一、肝癌组织中Septin1、Septin2、Septin6基因表达及其功能的初步研究（论文文献综述）
吴少军[1]（2021）在《Septin4在缺氧诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用与机制研究》文中研究说明目的:缺血性心脏病（IHD）已然是全球导致死亡的首要原因。2017年全球疾病负担（GBD）统计表明,IHD影响了全球约1.26亿人,约占世界总人口的1.72%。其中,IHD导致死亡的约有900万人,这使得IHD成为全球导致死亡的主要原因;同时,基于构建的预测模型得到的患病率数据表明,到2030年,IHD的患病率可能会增加到每1,000,000人中1,845人以上。在中国,IHD同样是导致死亡的首要原因。研究结果显示,IHD是2017年中国全国范围内死亡和DALYs的主要原因,经过年龄调整的IHD也是YLL最主要病因。IHD是由冠状动脉循环不足而引起的心肌缺血、缺氧性心脏病。在特定因素影响下,冠脉内皮会产生损伤,在一系列过程之后,动脉内膜变硬、变僵直,并有钙盐、脂肪脂质和异常的炎症细胞沉积,从而形成斑块;这些斑块和斑块破溃后形成的血栓会阻塞冠脉腔,最终使得缺血与缺氧在心肌中产生。研究表明,其他诸如炎症反应、微血管功能障碍、内皮功能障碍、心理应激（神经系统）和血管生成等也能够促进心肌缺血。然而,不管由什么原因引起,IHD的病理特征都是冠状动脉血流量降低从而导致的心肌供血、供氧不足。而心肌的供血供氧不足则会导致许多心脏方面的疾病发生,比如心肌梗死等。也就是说,IHD中的缺血缺氧诱导的心肌细胞损伤最终都会导致正常的心脏功能受损,从而给患者带来极大的危害甚至是生命危险。缺氧诱导因子1（HIF-1）是介导细胞适应缺氧环境的主要转录因子,主要由HIF-1α和HIF-1β两个亚基组成。HIF-1主要是从以下三个方面使细胞适应新的低氧环境:下调耗氧过程,上调厌氧过程以及恢复正常的氧气输送。HIF-1活性的激活实际上是由环境氧气浓度变化引起的HIF-1α的m RNA以及蛋白水平的波动实现的。HIF-1α的心肌保护作用在缺血性心脏的应激反应的早期阶段很重要。很多研究都表明HIF-1α在心肌缺氧时具有保护心肌细胞、减少缺氧诱导的心肌细胞损伤的作用。Septin4基因主要编码两种蛋白,Septin4＿i1（H5/PNUTL2）和Septin4＿i2（ARTS）。Septin4＿i2（ARTS）是一种肿瘤抑制蛋白,它位于线粒体外膜。一般认为,ARTS是在与XIAP发生拮抗作用后导致凋亡发生。也有研究发现Septin4＿i1具有促进人肝癌细胞细胞凋亡的作用,并且有其他研究发现这有可能是经过PI3K/Akt通路实现。近年来,还有学者发现在一些肿瘤细胞中,BAX和Bcl-2也是Septin4发挥促凋亡作用的蛋白底物。但是,Septin4在缺氧诱导的心肌细胞损伤甚至凋亡与坏死中的作用从来没有被研究过;另外,也没有研究探讨过心肌细胞中是否存在一种全新的Septin4底物。本研究旨在探讨Septin4在缺氧诱导的心肌细胞中的表达水平及其参与缺氧诱导的心肌细胞损伤的作用与机制。方法:1.探讨缺氧刺激对Septin4表达水平的影响。我们使用缺氧刺激作为构建心肌细胞损伤模型的刺激因素。首先我们将心肌细胞分为四组,分别对其进行缺氧0h、6h、12h和24h处理。然后,我们使用CCK8和FITC-PI试剂盒分别检测细胞活力和凋亡率。最后,通过western blot实验（免疫印迹实验）,我们检测Septin4蛋白表达量、凋亡相关蛋白cleaved caspase3蛋白表达量。2.探讨过表达Septin4对缺氧诱导的心肌细胞损伤的影响。首先我们将细胞分为八组:空载+缺氧0h组,空载+缺氧6h组,空载+缺氧12h组,空载+缺氧24h组,Flag-Septin4+缺氧0h组,Flag-Septin4+缺氧6h组,Flag-Septin4+缺氧12h组,Flag-Septin4+缺氧24h组;然后分别使用CCK8试剂盒与FITC-PI试剂盒检测细胞活性与凋亡率。接着,我们将细胞分为四组:空载组,空载+缺氧24h组,Flag-Septin4组,Flag-Septin4+缺氧24h组;然后,通过免疫印迹实验,我们检测Septin4蛋白表达量、cleaved caspase3蛋白表达量。3.探讨敲减Septin4对缺氧诱导的心肌细胞损伤的影响。首先我们将细胞分为八组:si-con+缺氧0h组,si-con+缺氧6h组,si-con+缺氧12h组,si-con+缺氧24h组,si-Septin4+缺氧0h组,si-Septin4+缺氧6h组,si-Septin4+缺氧12h组,si-Septin4+缺氧24h组;然后分别使用CCK8试剂盒与FITC-PI试剂盒检测细胞活性与凋亡率。接着,我们将细胞分为四组:si-con,si-con+缺氧24h组,si-Septin4组,si-Septin4+缺氧24h组;然后,通过免疫印迹实验,我们检测Septin4蛋白表达量、cleaved caspase3蛋白表达量。4.探讨Septin4是否通过降低HIF-1α表达参与缺氧诱导的心肌细胞损伤。首先我们将细胞分为六组:sh-con组,sh-con+缺氧24h组,sh-Septin4组,sh-Septin4+缺氧24h组,sh-Septin4+Flag-Septin4组,sh-Septin4+Flag-Septin4+缺氧24h组;然后,使用CCK8和FITC-PI试剂盒分别检测细胞活力和凋亡率。最后,通过免疫印迹实验,我们检测Septin4蛋白表达量、cleaved caspase3蛋白表达量。5.探讨Septin4与HIF-1α在正常及缺氧条件下的结合情况及具体的结合部位。首先,我们将蛋白样品按照所加抗体分为两组:Septin4抗体（或HIF-1α抗体）组和Ig G组,然后用免疫共沉淀实验检测HIF-1α（或Septin4）的表达量。接着,我们将蛋白样品分为三组:Septin4抗体（或HIF-1α抗体）组,Septin4抗体+缺氧24h（或HIF-1α抗体+缺氧24h）组和Ig G组,然后用免疫共沉淀实验检测HIF-1α（或Septin4）的表达量。最后,我们将蛋白样品分为六组:Flag-Septin4组、截短序列1组、截短序列2组、截短序列3组、截短序列4组、空载组,其中每组均加入等量Flag beads,然后用免疫共沉淀实验检测HIF-1α的表达量。6.探讨过表达Septin4与使用CHX或过表达Septin4与使用MG132对HIF-1α表达量的影响。首先我们将细胞分为四组,分别转染0μg、1μg、3μg、5μg的Flag-Septin4质粒,然后用western blot检测HIF-1α表达量。接着,我们还是将细胞分为四组,分别转染si-con、si-Septin4 1、si-Septin4 2、si-Septin4 3片段,然后用western blot检测HIF-1α表达量。再接下来,我们将细胞分为六组:空载+CHX 0h、空载+CHX 4h、空载+CHX 8h、Flag-Septin4+CHX 0h、Flag-Septin4+CHX 4h、Flag-Septin4+CHX 8h,然后用western blot检测HIF-1α表达量。最后,我们还是将细胞分为六组:空载+MG132 0h、空载+MG132 4h、空载+MG132 8h、Flag-Septin4+MG132 0h、Flag-Septin4+MG132 4h、Flag-Septin4+MG132 8h,然后用western blot检测HIF-1α表达量。7.探讨Septin4对HIF-1α泛素化的影响。首先我们将蛋白样品按照所加抗体分为三组:HIF-1α抗体（或Septin4抗体）组,HIF-1α抗体+MG132（或Septin4抗体+MG132 8h）组和Ig G组,然后用免疫共沉淀实验检测Septin4（或HIF-1α）蛋白表达。接着,我们将细胞分为三组:空载+HA-UB+MG132组,Flag-Septin4+HA-UB+MG132组和纯对照组或者是:si-con+HA-UB+MG132组,si-Septin4+HA-UB+MG132组和纯对照组,然后用免疫共沉淀实验检测HA表达。8.探讨Septin4影响HIF-1α降解的具体中间分子。首先,我们将细胞分为六组:空载组、空载+缺氧24h组、Flag-Septin4组、Flag-Septin4+缺氧24h组、Flag-Septin4+BAY85-3934组、Flag-Septin4+BAY85-3934+缺氧24h组,然后用western blot实验检测HIF-1α表达。接着,我们将细胞分为三组:空载+HIF-1α抗体组、Flag-Septin4+HIF-1α抗体组和空载+Ig G组或者si-con+VHL抗体组、si-Septin4+VHL抗体组和si-con+Ig G组,然后用免疫共沉淀检测VHL或HIF-1α表达。最后,我们将细胞分为三组:空载+HA-UB,Flag-Septin4+HA-UB组和Flag-Septin4+HA-UB+BAY85-3934组,然后用免疫共沉淀检测HA表达。结果:1.随着缺氧刺激时间的延长,心肌细胞活性逐渐降低,凋亡逐渐升高;另外,缺氧处理延长时Septin4表达也逐渐增多。2.无论给予缺氧多长时间处理,与空载组相比较,过表达Septin4组的心肌细胞活性都更低,凋亡率都更高;另外,给予缺氧24h处理后,与空载组相比较,Septin4蛋白表达量更高,凋亡相关蛋白cleaved caspase3表达量也更高。3.无论给予缺氧多长时间处理,与对照组相比较,敲减Septin4组的心肌细胞活性都更高,凋亡率都更低;另外,给予缺氧24h处理后,与对照组相比较,Septin4蛋白表达量更低,凋亡相关蛋白cleaved caspase3表达量也更低。4.稳定敲除Septin4心肌细胞中:Septin4表达量下降,HIF-1α蛋白表达量上升,细胞活力升高,细胞凋亡降低;稳定敲除Septin4心肌细胞中重新过表达Septin4:Septin4表达量上升,HIF-1α蛋白表达量下降,细胞活力降低,细胞凋亡升高。5.未给予缺氧刺激时,Septin4与HIF-1α可以相互结合;在给予缺氧刺激时,Septin4与HIF-1α的结合作用得到增强;通过构建的截短序列,发现Septin4主要通过其GTPase结构域与HIF-1α结合。6.梯度过表达Septin4时,随着Septin4表达量上升,HIF-1α表达量下降;转染Septin4 si RNA不同序列时,当Septin4表达量下降,HIF-1α表达量上升;CHX实验中,实验组和对照组HIF-1α下降速度几乎一致;MG132实验中,实验组HIF-1α量的积累明显比对照组快而明显。7.在MG132刺激下,Septin4与HIF-1α结合增强;过表达Septin4增强HIF-1α泛素化水平,敲减Septin4减弱HIF-1α泛素化水平。8.BAY85-3934抑制剂挽救Septin4下调的HIF-1α表达;过表达Septin4增强HIF-1α与VHL结合,敲减Septin4减弱HIF-1α与VHL结合;BAY85-3934抑制剂减弱Septin4增强的HIF-1α泛素化水平。结论:1.缺氧刺激可以引起Septin4蛋白表达量的增加。过表达Septin4加重缺氧诱导的心肌细胞损伤,敲减Septin4减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤。2.Septin4通过降低心肌保护因子HIF-1α的表达加重缺氧诱导的心肌细胞损伤。3.Septin4通过其GTPase结构域与HIF-1α结合,并且在缺氧刺激下结合增强。4.Septin4通过蛋白酶体途径降低HIF-1α稳定性。5.Septin4增强HIF-1α泛素化水平。6.Septin4通过增强E3泛素化连接酶VHL与HIF-1α的结合,促进HIF-1α的UPS途径降解,从而参与缺氧诱导的心肌细胞损伤。
赵昕[2]（2020）在《Septin4通过与BAX互作促进人结直肠癌细胞死亡》文中研究指明目的:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是仅次于肺癌与胃癌的世界第三大常见恶性肿瘤,也是第二大致死性肿瘤。在过去几十年中,我们对CRC的病因学、分子生物学、流行病学和临床诊治方面的了解有了显着提高。尽管如此,在全世界范围内,每年仍新增至少180万CRC病例。而且,这些病例通常在临床晚期阶段才能做出明确诊断,导致每年约有90万人死于这种恶性肿瘤。此外,虽然人们普遍认为CRC只有在发达国家才具有较高的发病率,但是近年来,在发展中国家中随着饮食和生活方式的改变,CRC的发病率也随之迅速上升。在相对落后国家,现有的筛查方法和可用的医疗手段尚不足以遏制CRC发病率不断上升的趋势。因此,了解CRC的发病因素并且寻找其分子生物学机制,对阻止CRC发生、发展极为重要,且为能够为其得到有效的临床治疗提供策略。凋亡在器官发育、组织稳态及防御机制中起到关键作用,这种防御机制可以清除机体内无用的或具有潜在威胁性的细胞。当细胞的凋亡能力下降时可以导致多种组织病理过程,包括癌症。Caspases的激活是凋亡发生的最终标志,因其激活可导致一系列凋亡相关的严重后果,所以caspases被不同的正向或负向调节因子精确的调控。在活细胞中,凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins,IAP）可直接与caspases结合,抑制caspases活性,对凋亡起负调节作用。因此,必须有IAP拮抗蛋白的存在,通过抑制其活性,促使细胞死亡,维持组织更新。Septin4是最重要的IAP拮抗蛋白,定位于线粒体外膜。在细胞凋亡发生时,Spetin4可从线粒体转运至细胞质并与IAP直接结合,从而激活caspases导致细胞的死亡。并且,Septin4不同于传统的肿瘤抑制因子或致癌基因,是通过丢失或获得某些功能变异导致癌症的发生。Septin4可通过其表达量的改变来影响肿瘤的发生,使其被认为是一种更具普遍性意义的癌症抑制因子。有研究表明,Septin4在急性淋巴细胞白血病患者的骨髓中表达下降,并且,敲除Septin4可通过抵抗凋亡从而增加造血干细胞的比例。在近期研究中也表明,Septin4基因编码的主要蛋白之一:Sept4＿i2/ARTS,在利式肠隐窝微龛中的肠干细胞（Intestinal stem cells,ISCs）中高表达。Sept4＿i2/ARTS可通过促进凋亡调节肠隐窝ISCs数量,维持肠道上皮细胞的稳态与再生。随着Septin4在细胞生物学功能方面研究的深入,充足的证据表明,Septin4参与调控肿瘤细胞的死亡、增殖、血管生成及侵袭,是其标志性分子机制。线粒体凋亡通路受Bcl-2家族成员蛋白调节,能够维持细胞生存与死亡的基本平衡。打破这一平衡可导致细胞病理性增殖,例如癌症、自身免疫性疾病,或细胞病理性死亡,包括神经退行性疾病或骨髓衰竭。线粒体外膜透化（Mitochondrial outer-membrane permeabilization,MOMP）标志着Bcl-2家族调节细胞凋亡结局的发生。BAX属于具有多重BH结构域的促凋亡蛋白成员,定位于线粒体外膜,具有自我组装成同源寡聚体破坏线粒体外膜通透性的能力。BAX几乎存在于所有种类的细胞中,包括肿瘤细胞。促凋亡激活的早期模型认为,BAX的激活受线粒体外膜上抗凋亡成员的抑制性相互作用调节。因此,为了激活细胞凋亡,需要从抗凋亡蛋白复合体中置换出BAX并激活,使其成为同源寡聚体,触发线粒体外膜透化。在这项研究中,我们首先证实Septin4在结肠癌患者癌及癌旁组织中的差异性分布,提示Septin4的低表达可能是结肠癌发生发展的重要因素。然后通过体外实验证实,Septin4参与DOX损伤导致的人结肠癌细胞系（HCT116）的凋亡及活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）释放。过表达Septin4可有效促进DOX诱导的细胞死亡及ROS释放,敲减Septin4可明显抵抗DOX诱导的结肠癌细胞凋亡及ROS产生。在体内实验中,沉默Septin4后可促进裸鼠体内瘤体的生长。通过免疫共沉淀实验,我们首次发现,Septin4可与BAX结合,而这种结合随着凋亡刺激条件的加强而增加,揭示BAX为Septin4的新互作蛋白,并且,Septin4可通过调控BAX的活性行使其促凋亡功能。以上研究揭示,Septin4通过与BAX互作促进细胞凋亡,可能成CRC治疗新的有效靶点。方法:1、结肠癌患者癌及癌旁组织中Septin4蛋白差异性分析;通过对79例人结肠癌及癌旁组织进行免疫组化染色,检测癌及癌旁组织细胞中Septin4蛋白的表达差异,初步探讨Septin4与人结肠癌的发生、发展的关系;应用Kaplan-Meier生存曲线分析患者生存率,对Septin4与结肠癌诊断及预后的关系进行统计学分析。2、体外诱导人结肠癌细胞死亡模型的建立;体外培养人结肠癌细胞系（HCT116）,给与不同浓度梯度DOX刺激,通过CCK8细胞生存试剂盒检测细胞生存率,观察细胞对不同浓度DOX的反应,根据生存率选出半数抑制浓度;通过DHR细胞活性氧染色,检测HCT116细胞在不同浓度DOX刺激条件下,细胞内ROS的生成量,从而检测细胞凋亡;通过Western blot实验检测细胞在DOX刺激条件下,cleaved caspase-3、cleaved PARP1及PCNA蛋白的变化,同时,检测Septin4蛋白的表达变化,初步探讨Septin4与人结肠癌细胞死亡之间的关系。3、检测Septin4在人结肠癌细胞死亡中的作用;3.1构建Flag-Septin4质粒表达载体,给与野生型人结肠癌细胞系HCT116瞬时转染Septin4;细胞过表达Septin4后,给与DOX刺激诱导细胞凋亡,经Western blot检测细胞中cleaved caspase-3、cleaved PARP1及PCNA蛋白的表达变化;通过DHR细胞活性氧染色,检测过表达Septin4的细胞在DOX刺激条件下,细胞内ROS的生成量,从而反应细胞凋亡程度;通过流式细胞凋亡检测仪及TUNEL细胞凋亡染色检测细胞凋亡情况;通过CCK8细胞生存试剂盒检测细胞生存率,观察过表达Septin4的细胞对不同浓度DOX刺激的反应。3.2体外构建Septin4 RNAi及control RNAi干扰载体,纯化并提取质粒,慢病毒载体包装系统共转染病毒包装细胞293T,感染HCT116细胞,构建稳定沉默Septin4基因表达的HCT116细胞系。通过Western blot检测稳定沉默Spetin4的HCT116细胞中,在DOX刺激条件下,cleaved caspase-3及cleaved PARP1蛋白的表达;通过DHR细胞活性氧染色,检测过沉默Septin4的细胞在DOX刺激条件下,细胞内ROS的生成量,从而反应细胞凋亡程度;通过流式细胞凋亡检测仪及TUNEL细胞凋亡染色检测细胞凋亡情况;通过CCK8细胞生存试剂盒检测细胞生存率,观察过沉默Septin4的细胞对DOX刺激的反应。4、体内实验检测Septin4在人结肠癌发生发展中的作用;给与BALB/c裸鼠腋窝分别接种shSeptin4及NC HCT116细胞,观察成瘤情况。对比缺失Septin4基因及野生型移植肿瘤的生长状态,肿瘤体积及重量。5、探索Septin4促进人结肠癌细胞死亡的分子机制;体外培养HCT116细胞,通过免疫共沉淀实验检测Septin4与BAX的相互作用情况;给与细胞DOX刺激,观察Septin4与BAX结合的变化情况。分析Septin4促进人结肠癌细胞死亡的分子机制。结果:1、Septin4蛋白在人结肠癌组织中的表达对比其在癌旁组织中的表达明显降低,差异有统计学意义（P<0.001）;2、Septin4蛋白在人结肠癌组织中的表达与患者性别、年龄及临床TNM分期无关,差异无统计学意义（P>0.05）;3、Septin4蛋白在人结肠癌组织中的表达随着病理学分级的增高而降低,差异有统计学意义（P<0.001）;4、Septin4在人结肠癌组织中的低表达揭示出不良预后及较低的总体生存率;5、Septin4参与DOX诱导的人结肠癌细胞死亡;当细胞死亡增加时,Septin4表达明显升高,并伴随着细胞凋亡蛋白cleaved caspase3及cleaved PARP1的升高,同时,细胞内PCNA蛋白表达降低;6、成功构建Septin4的真核表达载体;构建了稳定敲减Septin4的HCT116细胞系,Septin4的敲减效率在70%以上。7、给与细胞过表达Septin4,在DOX刺激条件下,与对照组相比,细胞死亡增加,细胞内ROS生成增加,细胞凋亡率增加;凋亡相关蛋白cleaved caspase3及cleaved PARP1的表达升高,同时,细胞内PCNA蛋白表达降低。8、当细胞稳定敲减Septin4后,在DOX刺激条件下,与对照组相比,细胞死亡明显减少,细胞内ROS生成减少,细胞抵抗凋亡的能力增加;凋亡相关蛋白cleaved caspase3及cleaved PARP1的表达降低。9、体内裸鼠成瘤实验中,沉默Septin4基因后,与对照组相比,瘤体的体积明显增大,重量明显增加。10、免疫共沉淀结果揭示,Septin4可与促凋亡相关蛋白BAX结合;在DOX刺激条件下,Septin4与BAX结合明显增加。结论:1、Septin4在人结肠癌组织中表达降低,揭示其功能的丢失可能是肿瘤发生发展的关键因素,其低表达与病理学分级的升高相关,并预示不良预后;2、Septin4参与人结肠癌细胞的死亡进程,其高表达可促进人结肠癌细胞死亡,其缺失可加速结肠肿瘤的生长;3、Septin4与促凋亡蛋白BAX的结合增加,是Septin4促进结肠癌细胞死亡的新的关键机制。我们的研究为人结直肠癌的发生发展提供理论依据,且为人结直肠癌的靶向治疗提供新的技术手段。
杨美玲[3]（2020）在《组织Septin9、血清糖蛋白肿瘤标志物联合检测在胃癌诊断及预后评估中的应用》文中提出目的:研究组织Septin9、血清糖蛋白肿瘤标志物联合检测对于胃癌诊断、预后评估的价值。方法:选取2017年8月～2018年2月在安徽某三甲医院行胃癌根治术的胃癌患者60例及同期就诊40例内镜下表现阴性患者作为正常对照组。采用电化学发光法对100例患者血清CEA、CA19-9,CA724水平进行检测。运用免疫组化法测定60例胃癌患者的癌组织及对应癌旁组织中Septin9蛋白水平。收集和整理患者的一般资料和病理资料、术后随访60名胃癌患者24个月,比较Septin9在胃癌组织及对应的癌旁组织中的表达情况以及不同分期胃癌患者组织中Septin9的表达情况。分析比较不同临床病理特征胃癌患者组织中Septin9表达情况。比较胃癌患者、正常对照组血清糖蛋白肿瘤标志物水平。运用ROC曲线分析比较各肿瘤标记物、组织Septin9、肿瘤标记物联合组织Septin9检测对于胃癌诊断的敏感性、特异性及AUC值,生存曲线分析比较各肿瘤标记物、组织Septin9、肿瘤标记物联合组织Septin9对于胃癌患者预后评估的价值。结果:1.胃癌组织、癌旁组织中Septin9阳性表达率分别为85.0%、36.7%,两组间阳性率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。2.不同分期胃癌组织中Septin9表达水平不同,临床分期Ⅲ、Ⅳ期Septin9高表达率显着高于Ⅰ、Ⅱ期（84.6%vs 19.0%,P<0.05）;3.肿瘤直径>5cm组Septin9高表达率显着高于肿瘤直径≤5cm组（71.4%vs 16.7%,P<0.05）;低分化组Septin9高表达率显着高于中高分化组（89.2%vs 39.1%,P<0.05）;浸润深度（T3、T4）组Septin9高表达率高于浸润深度（T1、T2）组（69.8%vs 29.4%,P<0.05）;有淋巴结转移组Septin9高表达率高于无淋巴结转移组（80.6%vs 50%,P<0.05）。4.胃癌患者血清CEA水平显着高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;胃癌组与正常对照组CA19-9、CA72-4水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。5.三种糖蛋白肿瘤标记物中CEA对于胃癌的诊断效能最高,诊断胃癌的敏感性（60.78%vs 55.03%vs 58.14%,P<0.05）、特异性为（66.32%vs 55.97%vs 57.53%,P<0.05）。Septin9诊断胃癌的敏感性、特异性分别为59.48%、60.83%;当Septin9、CEA两项指标联合检测,诊断胃癌的敏感性、特异性分别上升至70.02%、71.31%;ROC曲线显示,CEA、Septin9、CEA联合Septin9的诊断胃癌AUC值分别为0.765、0.804、0.916。6.CEA低表达组无进展中位生存年限显着高于CEA高表达组无进展生存的中位生存年限（23.0个月vs 17.4个月,P=0.000）;Septin9低表达组无进展中位生存年限显着高于Septin9高表达组无进展中位生存年限（23.7个月vs 20.7个月,P=0.001）;Septin9和CEA共高表达组中位生存年限为18.1个月,Septin9和CEA共低表达组23.7个月,差异有统计学意义（P=0.000）。结论:胃癌组织中Septin9水平显着高于对应的癌旁组织,组织Septin9表达水平与肿瘤分期、直径大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移密切相关。三种血清糖蛋白肿瘤标志物中CEA对于胃癌诊断及预后评估效能最高。联合检测组织Septin9及血清糖蛋白肿瘤标志物CEA可有效提高胃癌诊断的敏感性及特异性,并且对于胃癌患者预后评估有着重要参考价值。Septin9可作为新型潜在分子标记物应用于胃癌的诊断及治疗。
刘贵平[4]（2019）在《Septin9介导上皮间质转化在子宫颈鳞癌发生发展及预后中作用的初步研究》文中进行了进一步梳理目的:SEPT9基因编码的Septin9蛋白是一种细胞骨架蛋白,其功能复杂。最近发现SEPT9与肿瘤之间关系密切,成为肿瘤分子机制研究的新热点,但其在宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用尚未见报道。本文通过检测Septin9蛋白在正常宫颈组织、CIN病变组织以及宫颈鳞状细胞癌中的表达,初步探索Septin9在宫颈鳞状细胞癌发生发展中可能的作用;同时检测Vimentin,E-cadherin在宫颈鳞状细胞癌中的表达,分析Septin9、Vimentin、E-cadherin蛋白与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系,探讨SEPT9与上皮间质转化相关蛋白的关系及其作为一种细胞骨架蛋白参与宫颈鳞状细胞癌的侵袭、转移和预后作用中可能的机制。方法:回顾性选取内江市第一人民医院2010年7月至2012年7月手术切除的不同分化程度的宫颈鳞状细胞癌肿瘤组织50例,另取同期因子宫平滑肌瘤切除子宫的正常宫颈组织标本20例作为阴性对照以及CINΙ级标本20例、CINⅡ-Ⅲ级标本20例;同时收集、整理宫颈鳞癌病人临床病理学资料,随访其5年内生存情况;采用免疫组化EnVision法检测所有选取正常宫颈组织、CINΙ级、CINⅡ-Ⅲ级及宫颈鳞癌标本Septin9表达情况和Vimentin,E-cadherin在宫颈鳞癌中的表达情况;同时将伴有癌栓、宫颈外浸润转移和（或）淋巴结转移的病人定为高转移复发倾向组和不伴有癌栓、宫颈外浸润转移和（或）淋巴结转移的病人定为低转移复发倾向组;结合患者年龄、分化程度、淋巴结转移、浸润深度、FIGO分期、脉管癌栓、宫旁浸润、随访结果等临床病理资料,分析Septin9在宫颈癌发生发展中的作用,以及Septin9与Vimentin,E-cadherin的表达的关系及其与宫颈癌患者临床病理特征及预后之间的关系。结果:（1）正常宫颈组织、CINΙ级、CINⅡ-Ⅲ级及宫颈鳞状细胞癌组织中的Septin9的阳性率分别是10%、100%、95%、94%,CINΙ级、CINⅡ-Ⅲ级及宫颈鳞状细胞癌组织中Septin9阳性率均明显高于正常宫颈组织,差异有显着性（P均<0.01）;CINΙ级、CINⅡ-Ⅲ级及宫颈鳞状细胞癌之间Septin9阳性率及阳性强度差异无统计学意义（P均>0.05）。（2）伴有淋巴结转移及脉管癌栓的宫颈癌患者Septin9强阳性率（分别为71.5%、81.8%）分别明显高于不伴有淋巴结转移及脉管癌栓的宫颈癌患者Septin9强阳性率（分别为63.9%、35.9%）,差异均具有统计学意义（P<0.05或0.01）。（3）E-cadherin在高、中、低分化鳞状细胞癌中阳性率分别为100%、50%、11.8%,差异具有统计学意义（P<0.01）;伴有淋巴结转移、脉管癌栓患者E-cadherin阳性率（分别为14.3%、0%）明显低于不伴有淋巴结转移、脉管癌栓患者E-cadherin阳性率（分别为58.3%、59.0%）（P分别<0.05和0.01）。Vimentin在高、中、低分化鳞状细胞癌中阳性率分别为11.1%、37.5%、82.4%,差异具有统计学意义（P<0.01）;伴有淋巴结转移患者Vimentin阳性率（为78.6%）明显高于不伴有淋巴结转移患者Vimentin阳性率（为36.1%）,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）高转移复发倾向组和低转移复发倾向组与Septin9、E-cadherin和Vimentin表达情况的比较显示:高转移复发倾向组E-cadherin阳性率（21.1%）低于低转移复发倾向组（61.3%）（P<0.05）;高转移复发倾向组Vimentin阳性率（73.7%）明显高于低转移复发倾向组为（32.3%）（P<0.01）;高转移复发倾向组Septin9强阳性率（78.9%）明显高于低转移复发倾向组（25.8%）（P<0.01）。（5）Kendall’s tau-b相关性分析结果显示:宫颈鳞癌组织Septin9表达与E-cadherin表达呈负相关（r=-0.312,P<0.05）,与Vimentin表达呈正相关（r=0.301,P<0.05）。（6）COX比例风险回归分析结果显示:宫旁浸润和脉管癌栓是引起宫颈癌患者死亡的危险因素（P<0.05）,伴有宫旁浸润的患者死亡风险是不伴宫旁浸润患者的20.767倍;伴有脉管癌栓的患者死亡风险是不伴脉管癌栓患者的9.717倍;其余各因素均无统计学意义（P>0.05）。结论:（1）CINΙ级、CINⅡ-Ⅲ级及宫颈鳞状细胞癌组织中的Septin9表达明显高于正常宫颈组织,提示SEPT9可能参与了宫颈鳞状细胞癌的发生发展,其可能扮演着癌基因的角色。（2）高转移复发倾向组（伴有癌栓、宫颈外浸润转移和（或）淋巴结转移的宫颈癌患者）相对于低转移复发倾向组（不伴有癌栓、宫颈外浸润转移和（或）淋巴结转移的宫颈癌患者）,Septin9蛋白更倾向于强阳性表达,提示SEPT9可能参与促进宫颈癌的侵袭、转移。（3）宫颈鳞状细胞癌组织中Septin9蛋白的表达与E-cadherin蛋白的表达呈负相关关系,与Vimentin蛋白的表达呈正相关关系,提示SEPT9可能介导了EMT,从而促进宫颈癌的转移。（4）E-cadherin和Vimentin的表达程度与宫颈鳞状细胞癌分化程度以及侵袭、转移相关。（5）COX风险回归模型分析显示:宫颈鳞癌组织中Septin9与E-cadherin、Vimentin表达均不是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素,Septin9可能只是促进宫颈癌细胞侵袭转移的因素之一,其在预后评估中的价值有待进一步研究。
张念竹[5]（2017）在《SEPT2与SEPT7通过激活MEK/ERK通路调控乳腺癌的迁移及侵袭》文中指出目的:Septin是一类从酵母到人进化高度保守的GTP结合蛋白,目前已被证实有14个家族成员。Septin被列为第四类骨架蛋白,可通过杂聚肽复合体的行成组装成包括微丝、束、环的高阶细胞骨架结构。Septin核心结构的基本元件是由SEPT2/6/7形成的非极性六聚体。新兴研究表明,Septin在胞质分裂中发挥保守作用,同时也参与类似染色体分离、DNA修复、细胞极性、迁移及凋亡。除此之外,Septin也被报道与细菌感染、阿尔茨海默病、帕金森病及男性不育等人类生理及病理学事件有密切关系。最近,大量研究表明,Septin蛋白包括突变及表达等改变与肿瘤发生有密切联系,因此,Septin是某些癌症发生的关键蛋白并且值得凭借其功能对其作用机制进行深入探究。乳腺癌是最普遍的诊断癌症,并且是全世界女性与癌症相关死亡的最主要原因。尽管乳腺癌患者的总生存数有所改善,耐药性依旧是临床治疗的一个巨大挑战且对于癌症复发和进展至关重要。因此广泛寻找新型具有安全有效药物靶点的生物分子十分必要。而细胞骨架蛋白正是一类正在研发中的乳腺癌药物治疗靶点。研究表明,Septin可通过引导微管及肌动蛋白细胞骨架的动态进而调节以微管为基础的乳腺癌化疗,这一点在上皮细胞以及神经细胞[20]已经有很好的描述。鉴于Septin作为非传统细胞骨架蛋白,在不同人类癌症的细胞分裂及有丝分裂调节中发挥重要作用,我们假设Septin可能通过调节肿瘤细胞的恶性表型进而参与乳腺癌的发病机制。目前,关于Septin家族作用的基本信息以及其代表性成员对乳腺癌细胞生物学的影响依旧未知。因此,本研究的目的在于确定Septin蛋白质可能影响的乳腺癌细胞的生物学行为,包括细胞增殖、迁移和侵袭,并揭示其潜在的机制。方法:（1）检测septin家族的抑制剂氯吡脲（forchlorfenuron:FCF）对乳腺癌细胞系增殖、迁移、侵袭及细胞凋亡的影响;（2）检测不同乳腺癌细胞中SEPT2及SEPT7的表达以及细胞周期进程中SEPT2及SEPT7的亚细胞分布;（3）在高侵袭性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中特异性敲低内源性SEPT2及SEPT7,鉴定其对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及细胞凋亡的影响;（4）外源性过表达SEPT2及SEPT7,鉴定其对乳腺癌增殖、迁移、侵袭及细胞周期的影响（5）初步研究Septin对肿瘤细胞功能影响所参与的细胞信号通路。结果:（1）Septin家族抑制剂FCF能够抑制乳腺癌细胞系增殖、单克隆形成、凋亡以及侵袭;（2）相比于正常乳腺细胞MCF10A及低侵袭性乳腺癌细胞MCF7,SEPT2及SEPT7在MDA-MB-231以及T47D等高侵袭性乳腺癌细胞中具有更高表达;在分裂末期,SEPT2及SEPT7共定位于有丝分裂环平面处;（3）在乳腺癌MDA-MB-231细胞系中敲低SEPT2及SEPT7能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭,提升早期及总凋亡率;（4）在乳腺癌MDA-MB-231细胞系中过表达SEPT2及SEPT7能够促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭,但对细胞周期没有明显影响;（5）乳腺癌MDA-MB-231细胞系中,SEPT2及SEPT7通过激活MEK/ERK,进而调控乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。结论:SEPT2与SEPT7通过激活MEK/ERK通路调控乳腺癌的迁移及侵袭
王配[6]（2016）在《版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族的分离与功能研究》文中指出版纳微型猪近交系（BMI）是全球第一个大型哺乳类实验动物近交系,在生物和医学领域有广泛应用前景。但在35年的繁育过程中有多个亚系断代,前期研究发现主要是由一些公猪不育造成,这些不育公猪已成为阻碍其群体数目继续扩大的主要屏障,亟待解决。哺乳动物精子发生是曲精细管上皮细胞连续经历有丝分裂、减数分裂和精子形成,发育成完整形态精子的细胞分化过程,高度有序,涉及众多结构、功能基因调控。目前BMI精子发生机制的研究尚属空白,其公猪不育的机理尚不清楚,筛选和鉴定BMI精子发生关键基因,并研究其蛋白功能,有助于近交系精子发生机制的揭示和雄性不育分子诊断方法的建立,具有重要的理论意义和应用前景,也可为人类男性不育的研究提供参考。本研究选取国内外文献高频率报道的与哺乳动物雄性不育相关的精子发生关键基因家族为候选基因,这些基因包括睾丸特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族（包括TSSK1-4和TSSK6）、胞质分裂基因家族（包括Septin1-12和Septin14）、无精子症基因家族（包括DAZL和BOLL）和睾丸蛋白DEAD-box家族（包括DDX25和DDX3Y）。通过PCR和5’RACE技术获得其完整CDS序列,进一步对其序列特征、时空表达规律、启动子特征、表达产物的亚细胞定位进行研究,最后初步探索了利用RNA干扰和基因过表达技术研究DDX3Y基因的表达调控,从而为深入研究BMI精子发生的分子机理及调控机制奠定基础。取得的主要研究结果如下:1.基因克隆、生物信息学分析及组织表达谱研究克隆得到BMI TSSK家族、Septin家族、DAZ家族和DEAD-box蛋白家族共22个基因的cDNA序列,提交到GenBank获得了认证。特别地,相对于牛和人BOLL基因的翻译起始密码子ATG,BMI BOLL基因为AAG,发生了 T到A的突变,致使BOLL基因丢失了起始密码子,不能翻译成蛋白,提示BMIBOLL基因失去表达活性,可能变为假基因;大白猪、长白猪、黑猪与BMI的结果类似,推测猪BOLL基因起始密码子缺失可能具有普遍性,但有待进一步证实。其余21个候选基因编码的氨基酸序列与人的同源性达77%以上,高度保守,序列的相似性提示这些基因的功能在物种间具有相似性。在SMART数据库中对这些氨基酸序列进行可能的结构域搜索发现,TSSK家族均含STKc催化结构域,Septin家族均含Septin/CDCSeptin功能结构域,大部分成员在近C端含有coiled coil结构;DAZL含有RRM结构域和DAZ重复;DDX25和DDX3Y含有DEXDc和HELICc结构域。结构域是蛋白质分子中能独立存在的功能单位,结构域的存在提示我们研究的这些基因均是功能基因,参与BMI的生命活动。在TSSK家族和Septin家族多物种氨基酸序列同源性比对基础上,构建的系统进化树表明TSSK家族可分为3组（A、B和C）:Group A包含TSSK1和TSSK2,Group B包含TSSK3和TSSK6,Group C包含TSSK4;Septin家族也可分为3组（A、B和C）,Group A 包含 Septin6、8、10、11 和 Septin14,Group B 包含 Septin1、2、4、5 和 Septin7,Group C包含Septin3、9和Septin12。同一组内的成员,基因结构上具有更高的相似性,推测具有更加类似的功能。利用RT-PCR的方法证实上述22个基因的组织差异表达现象,14个基因（TSSK6、Septin1-11、DDX25和DDX3Y）在多种组织中都有转录。特别地,TSSK2、BOLL和DAZL为睾丸特异性表达基因;TSSK1、TSSK3、TSSK4、Septin12和Septin14基因为睾丸和精囊腺特异性表达基因;睾丸和精囊腺均为雄性动物的重要生殖器官,在这两种组织的特异表达提示这些基因在BMI生殖发育过程中可能发挥重要的功能。下一步就以睾TSSK2、Septin12、Septin14、DAZL、BOLL和DDX3Y基因为关键基因,深入研究其功能。2.发育表达谱、蛋白水平上的组织表达谱及启动子分析利用 qPCR 的方法证实 BMI TSSK2、Septin12、Septin14、BOLL 和 DAZL 基因的mRNA在初生公猪睾丸中不表达,在2.5月龄公猪睾丸中的表达量极显着提高（p<0.01）,5-18月龄间表达量无显着差异,至36月龄时有极显着下降,保持较低水平,与BMI精子发生时间基本一致,提示这些基因与BMI精子的发生具有关联性。进一步,对BMI TSSK2和DDX3Y基因进行原核表达,并利用其原核表达蛋白制备了特异性抗血清用于Western blot研究。Western blot结果证实了 TSSK2、Septin12、Septin14、DAZL和DDX3Y蛋白的天然存在;且TSSK2、DAZL和DDX3Y蛋白特异表达于睾丸,Septin12和14蛋白特异表达于睾丸和精囊腺组织。利用 PCR 扩增和克隆测序获得了 BMITSSK2、Septin12、Septin14、DAZL 和 DDX3Y基因的启动子区,发现TSSK2、DAZL和DDX3Y 5’侧翼区存在一个CpG岛,且位于启动子核心区域,为进一步从甲基化角度研究基因表达调控提供实验依据。3.细胞定位分析及BMI DDX3Y基因表达调控的初步探索细胞内定位结果显示TSSK2在线粒体和细胞核均有分布,主要在细胞核;Septin12和Septin14定位于核周围的线粒体;DAZL和DDX3Y定位于细胞核;与生物信息学预测的结果基本一致;每种细胞结构均含有一组特定的蛋白,具有特定的功能,细胞定位结果可为深入研究相关蛋白的生物学功能提供重要线索。利用过表达和RNAi技术初步探索了猪睾丸细胞系中DDX3Y基因的表达,结果表明:与对照组DDX3Y mRNA的表达相比,过表达组显着上调,干扰组显着下调,为后续深入研究奠定了基础。
蒋澜[7]（2016）在《虎皮鹦鹉性腺microRNA组的高通量测序与分析》文中提出动物、植物和病毒中发现多种micro RNA,每个micro RNA能够靶定成百上千种m RNA的不同位置,从而进行不同的上调下调功能。动物micro RNA功能如发育时间、神经元细胞命运、细胞增殖与分化、新陈代谢与衰老、细胞凋亡与器官形态发生都揭示micro RNA在调控动物个体出生与死亡有着尤其重要的作用。micro RNA在植物、哺乳动物、人中研究甚多,然而,在鸟类中的研究尚少,为了丰富鸟类中的micro RNA数据集,采用成体虎皮鹦鹉的卵巢（n=3）和精巢（n=3）提取总RNA,构建两个小RNA库,用高通量测序仪Hiseq 2500单道测序获取数据。基于以上实验数据拟解决如下科学问题:（1）虎皮鹦鹉micro RNA组的基本数据信息;（2）虎皮鹦鹉性腺micro RNA数据的比较分析;（3）筛选虎皮鹦鹉性腺micro RNA的差异表达信息;（4）micro RNA有无系统进化意义。主要的研究结果如下:1.小RNA序列文库的分析卵巢原始数据9,191,836和精巢原始数据6,383,927,经过接头去除、质量控制、片段长度筛选,保留有卵巢82.03%去除接头以及一些质量值较低的数据（clean reads）和精巢84.43%clean reads。最后,卵巢7,540,057序列中572,201 unique reads和精巢5,389,781序列中2,370,340 unique reads用来进行后续分析。2.新micro RNA的识别本研究中,我们预测了151个pre-mi RNAs,其中142个pre-mi RNAs编码了92个micro RNA家族,一共包括211个新的micro RNA（known）。211个新micro RNA（known）中有13个编码保守的micro RNA,仅仅在鸟类中出现,或首次在鸟类发现（现有数据中,其他鸟类没有,在其他物种中保守的已知micro RNA）。其他micro RNA不仅在鸟类,也在其他物种中发现。3.micro RNA家族在GGU基序和必需调控因子中的功能分析在本研究所有预测的micro RNA中,我们发现有77个micro RNA在GGU基序中的U位置发生变化,这很可能改变micro RNA的特异性靶标,从而对与之相关的细胞过程和基因表达产生更深层次的影响。GGU基序位于种子序列内部,本研究中77条micro RNA中有17条序列的种子序列不含GGU基序,GGU基序位于种子序列之外。发现mi R-9家族和mi R-140家族保守存在于虎皮鹦鹉micro RNA组中,大大丰富了鸟类发声学习领域的micro RNA数据支持。4.鸟类特有mi R-2954基因的q PCR验证及功能分析mi R-2954是鸟类中特有的micro RNA,且在雄性中的表达高于雌性,在鸡和珍珠鸟中都有发现且在雄性中高度表达。同时,我们通过随机取样进行q PCR验证生物信息学分析。mi R-2954的靶标基因会编码一个TLE4转录因子家族蛋白,包含了Ca MKIV、SCAMP1和SCAMP2可能与神经系统的某些特殊功能相关。在KEGG分析中,Mun-mi R-2954与发育、环境适应、神经系统、信号分子和互作都有关联。这些结果将提供很多有用信息用于今后的进一步研究。5.精巢、卵巢组织中显着差异表达的micro RNA筛选及进化分析本研究中,252个新的micro RNA共筛选得到17个显着差异表达micro RNA。其中Mun-novel6-3p、Mun-novel31-5p、Mun-mi R-1626-5p、Mun-mi R-215-5p和Mun-mi R-2954a-3p尤为显着表达。抽取Mun-mi R215-5p进行q PCR验证,基于前体结构对脊椎动物现有mi R-215的前体数据进行系统进化分析,发现pre-mi RNA在系统进化中的意义。本实验提供252个micro RNA前体数据,可用于后续进化分析研究。综上所述,本研究首次报道了虎皮鹦鹉micro RNA组原始数据,预测了211个新的micro RNA（known）和41个具有在生理和功能表达方面具有特异性调控功能的新micro RNA（novel）。此外,我们随机验证了一些在卵巢和睾丸中差异性表达的micro RNA（Mun-mi R-18b-5p,Mun-mi R-2954a-3p,Mun-mi R-215-5p,Mun-novel10-5p,Mun-novel24-3p）。mi RNA已成为强有力的调控分子,我们通过分析发现,某些mi RNA能够影响性别差异性表达。经过生物信息分析构建的两个小RNA文库自身的数据特征和q PCR随机验证,表明本研究构建的文库质量合格且数据真实可靠,这为进一步分析生物在性别特异性差异方面的生物机制和功能研究奠定了基础,也可用于进一步研究。
徐费凡[8]（2014）在《日本血吸虫可溶性虫卵抗原和Sept4i1对肝星状细胞凋亡的影响》文中认为目的探索日本血吸虫可溶性虫卵抗原和Sept4i1对人肝星状细胞株LX-2凋亡的影响和作用机制。方法1.SEA处理LX-2后应用Western Blot和caspase-3活性检测试剂盒检测细胞凋亡和相关分子的表达变化情况;应用Western Blot和细胞免疫荧光染色检测SEA诱导LX-2凋亡的分子机制。2.将Sept4i1基因转染LX-2细胞后应用Western Blot和TUNEL染色检测细胞凋亡情况;应用Western Blot检测Sept4i1诱导LX-2凋亡的机制。结果1.LX-2经SEA处理后caspase-3、DR5、p53表达上升,而p-Akt、α-SMA表达明显下降;PPARβ/δ激动剂能上调Akt表达,引起下游分子p53、DR5表达下降,caspase-3表达受到抑制;敲降p53或DR5后caspase-3表达明显抑制。说明SEA通过下调p-Akt,引起p53、DR5表达上调,继而caspase-3表达增加。2.Sept4i1转染LX-2细胞后经TUNEL染色显示细胞凋亡明显增加,Western Blot检测表明caspase-3表达上升;Sept4i1转染的LX-2细胞α-SMA表达下降,PPARγ表达增加;过表达Sept4i1后p-Akt表达下降,Bcl-2表达下降,而DR5、p53等分子变化不明显。说明Sept4i1主要通过抑制p-Akt和Bcl-2的表达来上调caspase-3的水平。结论1.SEA通过Akt/p53/DR5信号通路诱导LX-2细胞凋亡;2.Sept4i1通过Akt/Bcl-2信号通路诱导LX-2细胞凋亡。
杨亚楠[9]（2012）在《Sept4在LPS刺激的LX-2中的作用研究》文中认为目的研究Sept4在LPS刺激人肝星状细胞株LX-2中的表达情况,探讨Sept4在肝星状细胞中的作用及其与肝纤维化之间的关系。方法1.LPS刺激人肝星状细胞株LX-2,应用Western blot技术检测LPS诱导肝星状细胞增殖、活化和凋亡的变化。2.应用RT-PCR和Western blot技术检测LPS对LX-2中Sept4表达的影响。3.应用TLR4阻断剂处理LX-2,观察在LPS诱导的肝星状细胞中Sept4、α-SMA及Smad4的表达变化；应用Sept4siRNA转染LX-2,检测Sept4对LPS刺激的肝星状细胞中a-SMA及Smad4表达的影响。结果1.人肝星状细胞株LX-2经LPS刺激后,PCNA、α-SMA表达呈现先上升后下降的趋势；caspase-3在LPS低浓度或短时间刺激LX-2时无表达,在LPS高浓度和长时间刺激后呈现显着上升。2.LX-2经LPS刺激后,Sept4在mRNA和蛋白水平的表达变化明显。3.LX-2经TLR4阻断剂HTA125处理后,LPS刺激HSC所表达的Sept4、α-SMA及Smad4均有相应的下调。LX-2转染Sept4siRNA后,经LPS刺激后HSC中Sept4、α-SMA及Smad4表达量均有下降。结论1.LPS能够诱导LX-2细胞增殖、凋亡以及活化状态的变化,并能诱导LX-2中Sept4表达变化。2.LPS诱导的LX-2细胞中Sept4、α-SMA及Smad4等表达变化,与TLR4受体有关。Sept4可能参与TLR4-TGF-β-smad4信号通路,调节LPS诱导的HSC活化和肝纤维化形成。
周新华[10]（2012）在《CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化蛋白质组学研究及相关通路分析》文中进行了进一步梳理研究背景和目的霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma, HL）是恶性淋巴瘤的一大类型,具有特征性的肿瘤细胞H/RS（Hodgkin/Reed-Sternberg）细胞,但H/RS细胞一般仅占肿瘤组织的极少部分（<1%）,其余是大量以T淋巴细胞为主的炎性反应背景细胞,且经常发生变异,造成诊断上的困难。要把握H/RS的本质,就必须清楚H/RS细胞是如何发生、发展,与背景细胞之间究竟存在怎样复杂的相互关系,而要从根本上探究这些问题,迫切需要类似人HL病理特征的实验动物模型。目前虽然存在诸多人源性H/RS细胞株,但成瘤实验罕见报道,因为研究显示运用人H/RS细胞株时往往需要免疫严重缺陷的实验鼠如SCIDBNX或NOG鼠才能成瘤,但是越是免疫缺陷则越不能反映该肿瘤具有丰富免疫背景及炎症特性。因此构建鼠源性的H/RS细胞来构建鼠源性的动物模型成为研究的一个长期设想。Kuppers等研究者发现H/RS细胞来源于生发中心的残疾B细胞,认为生发中心B细胞在成熟过程中,一部分细胞经历了有利的突变选择,被T辅助及滤泡树突状细胞所选择,经过反复的增生、突变和选择,阳性选择细胞分化为浆细胞及记忆B细胞；而另一部分GCB细胞经过不利的突变,如反义突变、自身反应性的获得等成为功能上残缺的所谓前凋亡细胞,并经历了程序性细胞死亡一些残缺的前凋亡细胞丢失了被抗原选择的能力,从而没有经历正常的凋亡过程,成为H/RS前体细胞。H/RS细胞在克隆过程中其B细胞表面标志部分或全部消失,出现CD15、CD30特征性抗原标记物,成为H/RS细胞的生物学特性之一。由于H/RS细胞免疫表型及受体的改变,使其逃避免疫监视和细胞凋亡而得以生存及克隆性增殖。人CD99是一个糖基化跨膜蛋白,研究发现CD99的下调与人H/RS细胞的形成有关。本研究组前期通过脂质体转染CD99基因表达阴性的HL细胞株L428,筛选稳定表达CD99的L428-CD99细胞亚系,初步证实L428-CD99细胞亚系重现部分B细胞特征；同时发现鼠源性CD99（mouse CD99antigen-like2, mCD99L2）和CD99高度同源,通过慢病毒ShRNA质粒LV-mCD99L2转染内源性（?）CD99L2基因表达阳性的B淋巴瘤细胞株A20,筛选稳定表达干扰质粒的LV-mCD99L2-A20细胞亚系,初步证实有些LV-mCD99L2-A20细胞和人H/RS细胞有相似特征。本研究拟在构建稳定表达人CD99基因的L428亚系和稳定干扰鼠CD99基因的鼠B淋巴瘤A20细胞亚系的基础上,利用荧光差异凝胶双向电泳和质谱分析技术分别比较两种处理前后的细胞株蛋白表达差异,分离与鉴定与人、鼠CD99相互作用的靶蛋白,通过生物信息学研究分析方法得到的人、鼠两组数据,筛选出在细胞转化中起重要作用的蛋白,分析验证其功能及可能涉及的信号通路,为进一步阐明InCD99L2相互作用蛋白在构建H/RS细胞模型和类人HL动物模型中的作用和意义提供理论依据。研究内容与方法一、L428-CD99和LV-mCD99L2-A20细胞亚系的鉴定及分析1.L428-CD99细胞亚系的鉴定对前期构建的稳定过表达CD99基因的L428-CD99克隆株反复传代培养,利用RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、Western blot检测（?）CD99mRNA和蛋白表达；通过光镜观察、细胞计数和鬼笔环肽染色检测CD99基因过表达对L428细胞形态大小以及细胞骨架蛋白的影响；利用MTT实验检测CD99基因过表达对L428细胞增殖能力的影响；利用免疫细胞化学和流式细胞检测相关抗原标记分析CD99基因上调对L428细胞分化相关蛋白的影响。2. LV-mCD99L2-A20细胞亚系的鉴定对前期筛选出的稳定干扰1（?）CD99L2基因表达的LV-mCD99L2-A20细胞株反复传代培养,利用载体上通用引物进行PCR检测干扰载体整合至LV-mCD99L2-A20细胞情况；利用RT-PCR检测目的基因片段mCD99L2的mRNA表达,通过实时荧光定量RT-PCR检测mCD99L2基因的干扰效率；镜下观察观察mCD99L2干扰对A20细胞形态大小的影响,利用MTT实验检测]nCD99L2干扰对A20细胞增殖能力的影响。二、CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化的蛋白质组学分析运用荧光差异双向凝胶电泳技术分别对人鼠两组转化细胞（人源性L428-CD99细胞／空载体转染的L428-CTR细胞和鼠源性LV-mCD99L2-A20和空载体转染的LV-Gus-A20细胞）进行蛋白分离得到差异蛋白凝胶电泳图,结合软件分析和手工筛选,与制备胶匹配后,挖取了差异蛋白质点,采用灵敏且高通量的肽质量指纹图谱蛋白质鉴定方法鉴定差异蛋白,进一步采用GOfact开放软件进行在线聚类分析（http://www.hupo.org.cn/gofact）,对所得差异蛋白所参与的生物过程、所参与构成的细胞组件、所介导的分子功能进行注释,分析和细胞转化相关的蛋白。三、CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化的差异蛋白筛选及初步验证1.筛选差异蛋白并分析通过生物信息学检索预测CD99和]mCD99L2相互作用的蛋白,结合双向荧光凝胶电泳和质谱分析得到的人鼠两组差异蛋白,筛选分析人CD99+/鼠mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化的差异蛋白。2.筛选蛋白在人细胞、组织上的表达验证利用实时荧光定量RT-PCR、免疫细胞化学、Western blot和免疫荧光共聚焦检测筛选差异蛋白在人H/RS细胞转化细胞（L428-CD99和L428-CTR）和病理组织中的mRNA和蛋白表达。3.筛选蛋白在鼠源性细胞上的表达验证利用免疫细胞化学、Western blot检测筛选差异蛋白在LV-mCD99L2-A20和LV-Gus-A20细胞中表达。四、差异蛋白Septin-2在L428细胞和B淋巴瘤细胞初步功能验证及相关信号通路分析1、Septin-2蛋白与H/RS细胞和B淋巴细胞调控因子的关系信息学分析、western blot检测验证Septin-2与调控因子nf-kappaB和c-Myb的关系。2、Septin-2在H/RS细胞和B淋巴瘤细胞转化中初步功能验证瞬时干扰L428细胞中Septin-2表达,通过镜下观察、荧光共聚焦检测、CCK8实验和流式细胞检测Septin-2基因干扰对L428细胞形态、细胞骨架蛋白、细胞增殖能力和免疫表型的影响。3、Septin-2在H/RS细胞和B淋巴瘤细胞转化中可能参与的信号通路分析采用Western blot检测H/RS细胞L428稳定过表达CD99基因前后及瞬时干扰Septin-2基因前后相关通路蛋白的表达；结合蛋白组学分析结果,通过生物信息学和文献资料分析Septin-2在CD99调控H/RS细胞向B淋巴瘤细胞转化中可能参与的信号调控通路。结果一、L428-CD99和LV-mCD99L2-A20细胞亚系的鉴定及分析1.L428-CD99细胞亚系的鉴定（1） RT-PCR,实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测显示,与空载体组比较,L428-CD99细胞亚系CD99基因和蛋白表达均增高。（2）培养细胞镜下形态观察、HE染色后计数,L428-CD99细胞亚系细胞体积变小,差异具有显着性（t=7.131,P=0.018）；鬼笔环肽染色发现,与对照组相比,L428-CD99细胞骨架发生重建。（3）MTT检测发现,CD99基因过表达组较空载体组增殖减慢,差异具有显着性（F=773.374,P=0.000）；（4）免疫细胞化学和流式细胞检测发现,CD99基因过表达后,与对照组相比,CD30、CD15和MUM1表达降低,CD10、CD19、CD79α、BCL-6、PAX5和CD38表达增高,而CD20和CD138的表达没有明显改变。2. LV-mCD99L2-A20细胞亚系的鉴定（1）PCR检测干扰载体稳定整合于LV-mCD99L2-A20细胞基因组,RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测LV-mCD99L2-A20细胞中目的基因片段mCD99L2的nRNA表达稳定降低,mCD99L2基因的干扰效率约51%。（2）传代培养细胞于倒置显微镜下和HE染色发现,LV-mCD99L2-A20细胞细胞体积明显增大,出现类人H/RS细胞的巨大细胞；MTT实验检测mCD99L2干扰使A20细胞增殖能力下降,差异具有显着性（F=77.452,P=0.000）。二、CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化的蛋白质组学分析1.人源性转化细胞组荧光差异双向凝胶电泳和质谱分析人源性转化细胞组通过荧光差异双向凝胶电泳和质谱分析得到38个差异蛋白,与L428-CD99细胞而言正相关的蛋白21个,负相关的蛋白17个。其中RhoGDP-dissociation inhibitor2（GDIR2）和Septin-2（SEPT2）参与细胞骨架；DNAmismatch repair protein Msh2（MSH2）, Hematopoietic lineage cell-specific protein（HS1）参与细胞分化；Rho GDP-dissociation inhibitor2（GDIR2）、Prostaglandin E synthase3（TEBP）、Prohibitin（PHB）、Hematopoietic lineage cell-specific protein（HS1）、Sorcin （SORCN）和GEM-interacting protein （GMIP）参与信号通路；Prohibitin （PHB）、Heat shock protein beta-1（HSPB1）和Hematopoietic lineage cell-specific protein （HS1）参与调节基因表达。2.鼠源性转化细胞组荧光差异双向凝胶电泳和质谱分析鼠源性转化细胞组通过荧光差异双向凝胶电泳和质谱分析得到41个差异蛋白,其中与LV-mCD99L2-A20细胞而言正相关的蛋白21个,负相关的蛋白20个。其中参与细胞骨架的蛋白有Actin, cytoplasmic1（ACTB）、Septin-2（SEPT2）、 PDZ and LIM domain protein1（PDLI1）, Stathmin （STMN1）;参与细胞分化的蛋白有stathmin （STMN1）、ADP-ribosylation factor-like protein6（ARL6）;参与信号通路的蛋白有Ran GTPase-activating protein1（RAGP1）、 ADP-ribosylation factor-like protein6（ARL6）;参与调节基因表达的蛋白有Eukaryotic translation initiation factor4E （IF4E）、Nucleophosmin （NPM）、60kDa heat shock protein, mitochondrial （CH60）、PDZ and LIM domain protein1（PDLI1）、Hypermethylated in cancer2protein （HIC2）> Poly（U）-binding-splicing factor PUF60（GCP60）等。三、CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化差异蛋白筛选及验证1.通过生物信息学检索和人鼠两组转化细胞差异蛋白的分析比较,选取骨架蛋白Septin-2和Stathmin作为验证的目标蛋白。2.实时荧光定量RT-PCR.免疫细胞和细胞化学、Western blot（?）和荧光共聚焦检测显示Septin-2和Stathmin的nRNA水平、蛋白水平在人转化细胞组L428和L428-CD99中存在差异表达,蛋白水平在组织标本中也存在差异,Septin-2和CD99表达负相关,Stathmin（?）和CD99表达正相关。3.免疫细胞化学、Western blot检测显示Septin-2和Stathmin在鼠源性转化细胞A20和LV-mCD99L2-A20中存在差异表达,与人源性转化细胞上表达一致。四、差异蛋白Septin-2在L428细胞和B淋巴瘤细胞初步功能验证及相关信号通路分析1. Septin-2上游调控因子NF-kappaB1、c-Myb和XBP-1也是促进H/RS细胞形成和B细胞分化的调控因子。Western blot检测显示NF-kappaB1和c-Myb参与H/RS细胞和B淋巴细胞的转化,Septin-2的表达受nf-kappaB、c-Myb调控,与nf-kappaB表达呈正相关,与c-Myb表达呈负相关；nf-kappaB和c-Myb不受Septin-2的调控。2.倒置显微镜下连续观察和荧光共聚焦检测显示L428瞬时干扰SEPT2后细胞骨架发生重建,细胞伪足状突起消失。3.CCK8试验显示与空载体组L428-cn细胞相比,L428-sisept2细胞株生长较缓慢,差异具有显着性（F=204.927,P=0.000）。4.流式细胞检测结果显示L428细胞瞬时干扰Septin-2后细胞的部分抗原标记出现了小幅改变,H/RS细胞特征性抗原标记CD30和CD15表达下降,B细胞抗原标记CD19表达上升,生发中心标记CD10和早期浆细胞标记CD38表达也有上升。5. Western blot检测发现,干扰L428中Septin-2和过表达L428中CD99表达,RhoA蛋白表达都明显降低；结合RhoGDI2、HS1、Stathmin等差异蛋白和信息学检索,提出CD99调控H/RS细胞和B淋巴瘤细胞转化过程中,可能通过上调RhoGDI2来抑制Rho Family GTPases信号通路中的Rho GTP酶,主要是抑制了RhoA活性,从而抑制细胞骨架GTP结合蛋白Septin-2的表达,促使骨架重建并抑制了细胞的增殖活性；同时Septin-2也能通过调节RhoA蛋白参与B细胞受体通路,和HS1共同平衡转化细胞的骨架重组,参与调节B细胞转录因子和B细胞抗原的形成分化。另一骨架蛋白Stathmin可能起到协同改变细胞骨架和形态作用。结论1.前期构建L428-CD99和LV-mCD99L2-A20细胞亚系反复传代培养并验证CD99+/mCD99L2-调控了H/RS细胞与B淋巴瘤细胞的转化；2.人H/RS细胞株L428过表达CD99后得到38个差异蛋白,21个表达上调,17个表达下调；鼠源性B淋巴瘤细胞株A20敲低mCD99L2表达后得到41个差异蛋白,21个表达上调,20个表达下调；部分蛋白参与细胞分化、信号通路、骨架改变和基因表达调节等功能,和细胞转化密切相关；3.骨架蛋白Septin-2和Stathmin在人鼠两组转化细胞中皆存在差异表达,Septin-2与CD99表达负相关,Stathmin与CD99表达正相关；4.初步验证了Septin-2在人H/RS细胞转化中通过骨架重建参与细胞形态改变,降低细胞增殖活性,参与H/RS细胞向B淋巴瘤细胞转化过程中的抗原分化；分析其可能主要通过Rho Family GTPases信号通路和B细胞受体的信号通路发挥作用。创新之处1.本研究通过蛋白质组学技术筛选CD99+/mCD99L2-调控了H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化的差异蛋白,分析出一批和转化密切相关的蛋白；2.初步验证Septin-2的功能并分析相关作用信号通路,初步提出CD99调控H/RS细胞向B淋巴瘤细胞转化的分子机制。
二、肝癌组织中Septin1、Septin2、Septin6基因表达及其功能的初步研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝癌组织中Septin1、Septin2、Septin6基因表达及其功能的初步研究（论文提纲范文）
（1）Septin4在缺氧诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞缺氧及药物处理 |
| 2.2.3 使用脂质体进行质粒转染 |
| 2.2.4 使用jet Prime进行si RNA转染 |
| 2.2.5 慢病毒感染构建Septin4 稳定敲除H9c2 细胞系 |
| 2.2.6 CCK8 实验 |
| 2.2.7 流式细胞术实验 |
| 2.2.8 免疫印迹法(western blot实验) |
| 2.2.9 免疫共沉淀实验(Co-IP实验) |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 缺氧刺激诱导H9c2 心肌细胞损伤并且促进Septin4 表达 |
| 3.2 过表达Septin4 加重缺氧诱导的H9c2 心肌细胞损伤 |
| 3.3 敲减Septin4 减轻缺氧诱导的H9c2 心肌细胞损伤 |
| 3.4 Septin4 通过降低HIF-1α的表达参与缺氧诱导的H9c2 心肌细胞损伤 |
| 3.5 Septin4 通过其GTPase结构域与HIF-1α结合 |
| 3.5.1 HIF-1α被鉴定为Septin4 的新结合蛋白并且在缺氧时结合增强 |
| 3.5.2 Septin4 通过其GTPase结构域与HIF-1α结合 |
| 3.6 Septin4 通过蛋白酶体途径调节HIF-1α稳定性 |
| 3.7 Septin4 促进HIF-1α的泛素化 |
| 3.8 Septin4 增强VHL与 HIF-1α结合促进HIF-1α的泛素化蛋白酶体降解 |
| 3.8.1HIF-PHDs 抑制剂 BAY85-3934 挽救 Septin4 对 HIF-1α表达的抑制 |
| 3.8.2 Septin4 增强E3 泛素化连接酶VHL与 HIF-1α的结合 |
| 3.8.3 HIF-PHDs 抑制剂 BAY85-3934 下调 Septin4 促进的 HIF-1α泛素化 |
| 3.9 Septin4 参与缺氧诱导的H9c2 心肌细胞损伤的工作模式图 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 Septin 家族介绍及 Septin4 在心血管疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）Septin4通过与BAX互作促进人结直肠癌细胞死亡（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :Septin4在结肠癌组织中的表达及临床意义 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 免疫组化 |
| 2.2.2 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Septin4蛋白在人结肠癌组织中的表达对比其在癌旁组织中的表达明显降低 |
| 3.2 Septin4蛋白在人结肠癌组织中的表达与患者性别、年龄及临床TNM分期无关 |
| 3.3 Septin4蛋白在人结肠癌组织中的表达随着组织病理学分级的增高而降低 |
| 3.4 Septin4表达与患者生成存率及预后的关系 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :Septin4通过与BAX互作促进人结直肠癌细胞死亡 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 真核表达载体GV141-Septin4-3×Flag质粒的构建 |
| 2.2.3 脂质体转染法转染 |
| 2.2.4 慢病毒包装建立稳定沉默细胞株 |
| 2.2.5 细胞总蛋白的提取 |
| 2.2.6 Western blot |
| 2.2.7 免疫共沉淀 |
| 2.2.8 DHR细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)染色 |
| 2.2.9 流式细胞仪检测细胞凋亡率 |
| 2.2.10 TUNEL凋亡细胞染色检测细胞凋亡率 |
| 2.2.11 CCK8细胞生存率检测 |
| 2.2.12 裸鼠体内成瘤实验 |
| 2.2.13 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Septin4参与DOX诱导的人结肠癌细胞凋亡 |
| 3.2 过表达Septin4可加剧DOX诱导的结肠癌细胞凋亡 |
| 3.3 Septin4的缺失,可抵抗DOX诱导的结肠癌细胞死亡 |
| 3.4 Septin4的缺失促进裸鼠移植瘤的生长 |
| 3.5 Septin4与BAX互作促进结肠癌细胞凋亡 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）组织Septin9、血清糖蛋白肿瘤标志物联合检测在胃癌诊断及预后评估中的应用（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 胃癌早期诊断相关基因的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）Septin9介导上皮间质转化在子宫颈鳞癌发生发展及预后中作用的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 综述 宫颈癌相关miRNA研究进展 |
| 参考文献 |
（5）SEPT2与SEPT7通过激活MEK/ERK通路调控乳腺癌的迁移及侵袭（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一、材料 |
| 二、实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（6）版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族的分离与功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 哺乳动物精子发生的研究进展 |
| 1.1.1 哺乳动物精子发生的时期和场所 |
| 1.1.2 哺乳动物精子发生过程和意义 |
| 1.1.3 哺乳动物精子的结构 |
| 1.1.4 哺乳动物精子发生过程的基因调控 |
| 1.2 哺乳动物雄性不育研究进展 |
| 1.2.1 犏牛雄性不育研究进展 |
| 1.2.2 国外猪(芬兰约克夏猪)雄性不育研究进展 |
| 1.2.3 版纳微型猪近交系雄性不育研究进展 |
| 1.3 本研究分离的四个精子发生关键基因家族的研究进展 |
| 1.3.1 睾丸特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族研究进展 |
| 1.3.2 胞质分裂基因家族研究进展 |
| 1.3.3 无精子症基因家族研究进展 |
| 1.3.4 DEAD-box蛋白家族研究进展 |
| 1.4 本研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 菌株和细胞 |
| 2.1.3 质粒和探针 |
| 2.2 主要化学药品及试剂 |
| 2.2.1 RNA分析所需试剂 |
| 2.2.2 原核表达及抗体制备所需试剂 |
| 2.2.3 蛋白分析所需试剂 |
| 2.2.4 启动子克隆所需试剂 |
| 2.2.5 亚细胞定位、RNAi和基因过表达实验所需试剂 |
| 2.3 主要溶液配制 |
| 2.4 主要实验仪器 |
| 2.5 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族分离与序列分析 |
| 2.5.1 组织总RNA的提取和制备 |
| 2.5.2 cDNA第一链合成 |
| 2.5.3 设计并合成PCR引物 |
| 2.5.4 PCR扩增及产物检测 |
| 2.5.5 PCR产物回收及测序 |
| 2.5.6 PCR纯化产物与pEASY-T5 Zero克隆载体连接 |
| 2.5.7 连接产物的转化、复苏和培养 |
| 2.5.8 菌液PCR鉴定和测序 |
| 2.5.9 序列的生物信息学分析 |
| 2.6 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族表达研究 |
| 2.6.1 半定量RT-PCR分析基因的多组织表达情况 |
| 2.6.2 qPCR分析基因发育表达情况 |
| 2.6.3 原核表达及抗血清制备 |
| 2.6.4 Western Blot(WB)检测基因蛋白表达水平 |
| 2.7 版纳微型猪近交系精子发生关键基因启动子克隆与序列分析 |
| 2.7.1 组织样中DNA的提取 |
| 2.7.2 5'RACE和启动子PCR扩增引物设计 |
| 2.7.3 5'RACE和启动子区PCR扩增及产物检测 |
| 2.7.4 启动子序列生物信息学分析 |
| 2.8 版纳微型猪近交系精子发生关键基因的亚细胞定位研究 |
| 2.8.1 引物设计及真核表达序列扩增 |
| 2.8.2 重组克隆载体的构建与鉴定 |
| 2.8.3 融合表达载体的构建和鉴定 |
| 2.8.4 ST细胞培养 |
| 2.8.5 融合表达载体转染及细胞荧光观察 |
| 2.9 版纳微型猪近交系DDX3Y基因过表达和RNAi |
| 2.9.1 引物设计及DDX3Y过表达序列扩增 |
| 2.9.2 重组克隆载体的构建与鉴定 |
| 2.9.3 DDX3Y过表达载体的构建和鉴定 |
| 2.9.4 ST细胞培养、过表达载体和siRNA探针转染 |
| 2.9.5 细胞中总RNA的提取和cDNA的合成 |
| 2.9.6 qPCR检测细胞中DDX3Y的表达情况 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族分离与序列分析结果 |
| 3.1.1 组织总RNA提取 |
| 3.1.2 版纳微型猪近交系TSSK家族分离与序列分析 |
| 3.1.3 版纳微型猪近交系Septin家族分离与序列分析 |
| 3.1.4 版纳微型猪近交系DAZ家族分离与序列分析 |
| 3.1.5 版纳微型猪近交系DEAD-box蛋白家族分离与序列分析 |
| 3.2 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族表达研究结果 |
| 3.2.1 mRNA水平上的多组织表达情况 |
| 3.2.2 mRNA水平上的发育表达结果 |
| 3.2.3 原核表达和抗血清制备结果 |
| 3.2.4 蛋白水平上的多组织表达结果 |
| 3.3 版纳微型猪近交系精子发生关键基因启动子克隆与序列分析结果 |
| 3.3.1 Septin12和Septin14基因5'RACE PCR扩增结果 |
| 3.3.2 重组克隆载体菌液PCR鉴定结果 |
| 3.3.3 BMI Septin12和Septin14基因5'RACE序列分析 |
| 3.3.4 启动子序列PCR扩增结果 |
| 3.3.5 启动子序列分析结果 |
| 3.4 版纳微型猪近交系精子发生关键基因的亚细胞定位研究结果 |
| 3.4.1 真核表达序列扩增结果 |
| 3.4.2 重组克隆载体的鉴定结果 |
| 3.4.3 融合表达载体的鉴定结果 |
| 3.4.4 融合蛋白的亚细胞定位结果 |
| 3.5 版纳微型猪近交系DDX3Y基因的过表达和RNAi结果 |
| 3.5.1 DDX3Y过表达序列扩增结果 |
| 3.5.2 pEASY-T5-ZERO-DDX3Y-GBD 重组质粒的鉴定 |
| 3.5.3 pcDNA3.1-DDX3Y重组质粒的构建和鉴定 |
| 3.5.4 细胞总RNA电泳检测结果 |
| 3.5.5 干扰和过表达效率检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族蛋白结构域的分析 |
| 4.2 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族序列分析 |
| 4.3 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族染色体定位和基因组结构分析 |
| 4.4 版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族表达分析 |
| 4.5 版纳微型猪近交系精子发生关键基因启动子区序列分析 |
| 4.6 版纳微型猪近交系精子发生关键基因亚细胞定位分析 |
| 4.7 版纳微型猪近交系DDX3Y基因的过表达和RNAi沉默效果分析 |
| 5 小结 |
| 5.1 主要研究成果 |
| 5.2 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间完成的科研成果 |
| 致谢 |
（7）虎皮鹦鹉性腺microRNA组的高通量测序与分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写表及中英文对照 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 鸟类microRNA组学的研究进展 |
| 0 前言 |
| 1 鸟类分类系统 |
| 2 非编码RNA简介 |
| 3 microRNA简介 |
| 3.1 microRNA的生物学发生 |
| 3.2 microRNA的作用机制 |
| 3.3 microRNA研究进展 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 第二部分 研究论文 |
| 第二章 虎皮鹦鹉microRNA组学研究 |
| 0 引言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物解剖 |
| 1.1.2 主要试剂耗材清单 |
| 1.1.3 主要实验仪器清单 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 虎皮鹦鹉性腺总RNA的提取 |
| 1.2.2 microRNA测序文库构建、质检和测序 |
| 1.2.3 mi RNA数据分析 |
| 1.2.4 技术路线 |
| 1.2.5 q PCR验证 |
| 2 实验结果与讨论 |
| 2.1 实验结果 |
| 2.1.1 RNA质量检测 |
| 2.1.2 测序原始数据的预处理(QC目录) |
| 2.1.3 测序数据的质量控制和预处理分析 |
| 2.1.4 序列生物信息分析 |
| 2.1.5 预测新的microRNA |
| 2.1.6 碱基偏好性统计 |
| 2.1.7 精巢、卵巢组织中显着差异表达的microRNA |
| 2.1.8 qPCR验证精巢和卵巢中的microRNA |
| 2.1.9 已知和新microRNA假定的靶标预测 |
| 2.1.10 虎皮鹦鹉microRNA GO注释和KEGG通路功能分析 |
| 2.1.11 脊椎动物Mun-mi R-215 的进化分析 |
| 2.2 讨论 |
| 2.3 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表论文及获奖情况 |
（8）日本血吸虫可溶性虫卵抗原和Sept4i1对肝星状细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 课题来源、研究目的与意义 |
| 1.2 国内外研究概况 |
| 1.2.1 国外研究概况 |
| 1.2.2 国内研究概况 |
| 1.3 论文的主要研究内容 |
| 第二章 SEA对LX-2 细胞凋亡的影响及作用机制 |
| 2.1 序言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 研究资料和仪器设备 |
| 2.2.2 实验流程与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 SEA促进LX-2 细胞凋亡 |
| 2.3.2 SEA促进LX-2 细胞凋亡与DR5的上调有关 |
| 2.3.3 SEA通过上调p53的表达诱导LX-2 细胞凋亡 |
| 2.3.4 SEA诱导p53和DR5表达上调与Akt相关 |
| 第三章 Sept4_i1对LX-2 细胞凋亡的影响及作用机制 |
| 3.1 序言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 研究资料和仪器设备 |
| 3.2.2 实验流程与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 Sept4_i1真核表达质粒的构建 |
| 3.3.2 Sept4_i1对LX-2 细胞凋亡的影响 |
| 3.3.3 Sept4_i1可能通过Akt/Bcl-2 通路诱导LX-2 细胞凋亡 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 南通大学硕士学位论文在攻读硕士学位期间公开发表的论文和参加的项目 |
| A：在国内外刊物上发表的论文 |
| B：参加的项目 |
| 致谢 |
（9）Sept4在LPS刺激的LX-2中的作用研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 课题来源、研究的目的和意义 |
| 1.2 国内外研究概况 |
| 1.2.1 国外研究概况 |
| 1.2.2 国内研究概况 |
| 1.3 论文研究的主要内容 |
| 第二章 LPS对人肝星状细胞LX-2增殖、活化和凋亡的影响 |
| 2.1 序言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 研究资料及仪器设备 |
| 2.2.2 实验流程与方法 |
| 2.2.3 统计分析与作图 |
| 2.3 结果 |
| 第三章 Sept4在LPS刺激的肝星状细胞中的变化 |
| 3.1 序言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 研究资料及仪器设备 |
| 3.2.2 实验流程与方法 |
| 3.2.3 统计分析与作图 |
| 3.3 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目 |
| A：在国内外刊物上发表的论文 |
| B：所参加的项目 |
| 致谢 |
（10）CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化蛋白质组学研究及相关通路分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 技术路线 |
| 第一章 CD99+/L428-CD99和mCD99L2-/LV-mCD99L2 -A20细胞亚系的鉴定及分析 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化的蛋白质组学分析 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化差异蛋白的筛选及初步验证 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化差异蛋白Septin-2功能的初步验证及相关信号 通路分析 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 全文小结 |
| 展望 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
四、肝癌组织中Septin1、Septin2、Septin6基因表达及其功能的初步研究（论文参考文献）
- [1]Septin4在缺氧诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用与机制研究[D]. 吴少军. 中国医科大学, 2021(02)
- [2]Septin4通过与BAX互作促进人结直肠癌细胞死亡[D]. 赵昕. 中国医科大学, 2020(01)
- [3]组织Septin9、血清糖蛋白肿瘤标志物联合检测在胃癌诊断及预后评估中的应用[D]. 杨美玲. 安徽医科大学, 2020(02)
- [4]Septin9介导上皮间质转化在子宫颈鳞癌发生发展及预后中作用的初步研究[D]. 刘贵平. 西南医科大学, 2019(08)
- [5]SEPT2与SEPT7通过激活MEK/ERK通路调控乳腺癌的迁移及侵袭[D]. 张念竹. 大连医科大学, 2017(08)
- [6]版纳微型猪近交系四个精子发生关键基因家族的分离与功能研究[D]. 王配. 云南大学, 2016(06)
- [7]虎皮鹦鹉性腺microRNA组的高通量测序与分析[D]. 蒋澜. 安徽师范大学, 2016(05)
- [8]日本血吸虫可溶性虫卵抗原和Sept4i1对肝星状细胞凋亡的影响[D]. 徐费凡. 南通大学, 2014(03)
- [9]Sept4在LPS刺激的LX-2中的作用研究[D]. 杨亚楠. 南通大学, 2012(06)
- [10]CD99+/mCD99L2-调控H/RS细胞与B淋巴瘤细胞转化蛋白质组学研究及相关通路分析[D]. 周新华. 南方医科大学, 2012(04)