一、自体角膜缘移植对角膜血管新生抑制作用的实验研究（论文文献综述）
张红超[1]（2021）在《102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察》文中指出角膜溃疡（Cornea Ulceration）是兽医临床较常见的眼科疾病,其病原菌主要为伪中间葡萄球菌（Staphylococcus Pseudintermedius）。目前,治疗角膜溃疡的方法是药物治疗和药物治疗联合手术治疗,如联合带蒂板层角膜移植手术或带蒂结膜瓣遮盖术。但是,对这两种手术的临床疗效比较没有系统的研究。本研究首先对郑州地区102例角膜溃疡犬进行流行病学分析,然后依据流行病学调查情况,用主要致病菌构建犬角膜溃疡模型,进而观察带蒂板层角膜移植术和带蒂结膜瓣遮盖术对角膜溃疡的疗效。现将研究情况报告如下:试验一:102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌的分离鉴定与耐药性分析收集2017年6月至2019年12月间郑州市三家宠物医院收治的102例犬角膜溃疡病例,统计其发病原因、年龄、性别、品种、治疗方法及预后等,并使用无菌生理盐水浸湿的细胞刷蘸取溃疡灶样品,对采集的样品进行细菌培养与纯化,然后使用MALDI Biotyper系统对分离的菌株进行鉴定。同时,将所分离的主要菌株做眼科常用药物的敏感性试验。试验结果如下:（1）发病率较高的品种为贵宾、比熊、京巴、柯基和混血犬;年龄从2月龄至19岁不等,平均年龄为5.8±0.54岁,发病原因主要以外伤（22例,21.57%）和干眼症（14例,13.73%）为主。（2）细菌培养阳性99例,以伪中间葡萄球菌感染的混合感染病例为主;体外抑菌有效的抗生素有头孢甲肟（96.94%）、利福平（98.98%）、妥布霉素（97.96%）、左氧氟沙星（93.88%）和环丙沙星（96.94%）;而对四环素（91.84%）、红霉素（96.94%）和氯霉素（51.02%）有耐药性。试验二:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性犬角膜溃疡的疗效观察选用15只健康成年比格犬,使用微量注射器吸取伪中间葡萄球菌菌液注入角膜基质层内构建犬角膜溃疡模型。造模后48 h,使用0.5%聚维酮碘生理盐水溶液对溃疡灶进行冲洗。同时滴加氧氟沙星滴眼液和玻璃酸钠滴眼液12次/d,两种药物用药间隔为1 min。造模成功后,随机选择3只犬用于抗生素治疗组,12只犬用于抗生素联合手术治疗组,手术治疗组在术眼消毒后进行手术治疗,其中左眼行带蒂板层角膜移植术,右眼行带蒂结膜瓣遮盖术。并于术后7、14、21、28、35和42 d统计相关临床指标和信息。根据临床观察指标和症状进行评分。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组实验犬在治疗后36-46h内均出现角膜穿孔,前房塌陷,虹膜脱出,羞明,流泪,眼分泌物增多;角膜大面积水肿、不透明,多象限内可见新生血管。单纯抗生素治疗组治疗无效。（2）手术治疗组角膜浑浊度评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7、14和21 d带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后28d,两组间无统计学差异;术后35和42d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）。（3）手术治疗组角膜新生血管评分:术前及术后7d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后14、21、28和35d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（4）手术治疗组角膜水肿面积评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7和14 d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后21、28、35和42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（5）手术治疗组泪液量检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。（6）手术治疗组眼内压检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42 d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。试验三:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性角膜溃疡犬角膜组织病理学及相关细胞因子表达的影响将抗生素联合手术治疗组的12只实验犬随机分成四组,分别于术后14、28、35和42 d进行手术采取角膜。将采集的角膜沿手术位置一分为二,一半用于组织切片制作,一半用于荧光定量检测细胞因子。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组的组织病理学变化:角膜上皮层缺失,结构不完整,内皮细胞层部分区域缺失,后弹力层缺失。溃疡灶内可见新生肉芽组织,但无法完全闭合溃疡灶。（2）手术治疗组的组织病理学变化:带蒂板层角膜移植组角膜结构完整,角膜上皮层重新上皮化,纤维蛋白排列整齐有序,后弹力层和内皮层结构完整。带蒂结膜瓣遮盖组溃疡灶处完全覆盖结膜上皮,细胞密度高,排列杂乱无章,基质层可见新生血管,纤维蛋白排列无序。后弹力层和内皮层结构完整。（3）炎性因子基因表达的变化:术后14和28 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）;术后35d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）,其余炎性因子基因表达量在两组间无统计学差异（p>0.05）;术后42d,两组各炎性因子基因表达量无统计学差异（p>0.05）。（4）生长因子基因表达的变化:术后14 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中VEGF、FGF和TGF的mRNA相对表达量均显着或极显着升高（p<0.05或p<0.01）。术后28d,两组各细胞因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。术后35和42 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TGF的mRNA相对表达量显着降低（p<0.05）,其余生长因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。试验四:带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察对犬深层角膜溃疡临床病例采取带蒂板层角膜移植术后,连续观察至60 d。术后泪液量均在正常值范围内波动,眼内压在术后5-11 d内低于正常值范围,其余时间点均在正常值范围内。没有病例出现重复感染,术后恢复效果良好,视力均得到恢复。综上所述,郑州市102例犬角膜溃疡病例中的犬品种多为泰迪和短头颅犬,感染的细菌主要为伪中间葡萄球菌且对红霉素、氯霉素和四环素类药物耐药;板层角膜移植手术的术后恢复效果优于结膜瓣遮盖术,角膜愈合与透明度良好,纤维蛋白排列整齐有序,上皮层结构完整。
吴艳菊[2]（2021）在《含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究》文中研究指明角膜缘干细胞缺乏症（Limbal stem cell deficiency,LSCD）是由于角膜缘干细胞（Limbal stem cells,LSCs）功能障碍或数量不足引起的一种病理现象,角膜上皮被结膜上皮细胞所取代,表现为角膜混浊且出现大量新生血管,视力下降甚至失明。药物治疗或常规手术治疗效果不理想。有研究报道采用含LSCs的角膜缘上皮细胞片自体移植（Autologous cultivated limbal epithelial transplantation,auto-CLET）技术可重建角膜上皮层,恢复角膜缘屏障功能,但在宠物犬的相关试验研究尚未见报道。本试验以无上皮层羊膜为载体,体外构建含LSCs的原代角膜上皮细胞植片,并对LSCD疾病模型犬进行auto-CLET手术治疗,以常规的羊膜移植术和结膜瓣遮盖术为对照组,术后进行眼表临床检查、角膜病理组织学和免疫组化染色观察,以评估其对LSCD疾病模型犬的治疗效果。1.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞植片的构建与鉴定本试验手术采集剖腹产犬胎儿羊膜,采用Dispase Ⅱ酶消化法制作无上皮层羊膜。手术采集3 mm2健康犬角膜缘组织,采用组织块培养法和Dispase Ⅱ酶消化法以无上层羊膜为载体体外培养犬原代角膜缘上皮细胞。根据细胞形态特征、超微结构特点、病理组织学和细胞标志物CK12、ABCG2和p63等进行角膜缘上皮细胞以及LSCs的鉴定。结果显示:Dispase Ⅱ酶消化后的羊膜表面无羊膜上皮细胞残留,暴露的基底膜由大量纵横交错的胶原纤维丝组成,胶原纤维丝完整,无受损或断裂。培养的原代角膜缘上皮细胞为多边形,扫描电镜可见细胞表面有大量微绒毛和微皱,细胞之间以及细胞与羊膜间连接紧密。犬原代角膜缘上皮细胞可在羊膜表面生长为2～3层,并表达角膜上皮细胞标志物CK12以及LSCs标志物ABCG2和p63,表明制作的原代角膜缘上皮细胞移植片含有LSCs,可用于后续的auto-CLET手术。2.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对LSCD疾病模型犬疗效的临床观察本试验选取15只健康比格犬,采用板层切除术建立LSCD疾病模型犬,造模后每7d对实验犬的术眼进行裂隙灯检查和印记细胞学检查,直至实验犬的术眼表面完全被纤维血管膜覆盖,印记细胞学检查角膜表面出现杯状细胞,确定弥漫性LSCD疾病模型犬造模成功。将LSCD疾病模型犬分为三组,分别实施auto-CLET手术、羊膜移植手术和结膜瓣遮盖手术。术后使用裂隙灯观察,对角膜的混浊度、新生血管和荧光素钠染色情况参照相关标准进行评分,并进行基础泪液分泌实验（Schirmer I test,SIT）、泪膜破裂时间（Tear film breakup Time,BUT）和印记细胞学检查（Impression Ctology,IC）评估术后是否存在干眼并发症。结果显示:造模术后35 d时,实验犬角膜表面完全被灰白色纤维血管膜覆盖,角膜混浊不透明,荧光素钠染色大面积着色,IC检查结果显示角膜表面出现杯状细胞,表明角膜上皮被结膜上皮取代,LSCD疾病模型犬造模成功。术后4个月时,auto-CLET组角膜透明度与正常角膜无差异,角膜缘界线清晰,无新生血管入侵,角膜表面荧光素钠点状着色。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜表面均存在大量新生血管,角膜混浊,荧光素钠着色。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜混浊度和新生血管评分均极显着高于auto-CLET组（p<0.01）,羊膜移植组角膜荧光素钠着色评分显着高于auto-CLET组和结膜瓣遮盖组（p<0.05）。根据治疗效果评估标准,auto-CLET组治疗成功率为77.78%,羊膜移植组和结膜瓣遮盖组均为0。三组术后BUT、SIT和IC结果均低于正常水平,且角膜表面荧光素钠着色,表明三组犬术后均存在干眼症。但auto-CLET组BUT与羊膜移植组和结膜瓣遮盖组相比极显着增加（p<0.01）,auto-CLET组IC等级极显着低于羊膜移植组和结膜瓣遮盖组（p<0.01）,表明auto-CLET组与羊膜移植组和结膜瓣遮盖组相比干眼症较轻。3.含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植后角膜组织学和免疫组化染色观察将LSCD疾病模型犬分为3组,分别于术前、术后第1、2和4个月采集术眼角膜样品。对采集的眼角膜进行病理组织学和免疫组化染色观察。结果显示:LSCD疾病模型犬角膜表面被结膜上皮覆盖,与基质层连接疏松,有大量新生血管和炎性细胞浸润,PAS染色可见杯状细胞。术后4个月时,auto-CLET组角膜上皮层由5～6层细胞组成,角膜各组成结构与正常角膜相似,角膜缘上皮基底细胞阳性表达p63和ABCG2。羊膜移植组和结膜瓣遮盖组角膜上皮层细胞排列杂乱,与基质层连接疏松,均有大量新生血管和炎性细胞浸润,角膜缘上皮基底细胞均不表达p63和ABCG2。上述试验结果表明,含LSCs的犬原代角膜缘上皮细胞移植片自体移植后成功在角膜表面成活,重建LSCD疾病模型犬角膜上皮层并恢复角膜缘屏障功能,术后角膜透明,无新生血管,成功率高达77.78%。
陈祖凤[3]（2020）在《维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究》文中研究指明目的:角膜碱烧伤损坏角膜组织结构,破坏角膜微环境,导致角膜缘干细胞功能障碍,延迟角膜损伤修复进程。本文旨在研究维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复的促进作用,为临床治疗提供实验依据。方法:45只BALB/c小鼠,随机选择5只作为健康对照组,40只随机平均分为2组,制作右眼角膜碱烧伤模型,每组20只（20眼）:一组为实验组,碱烧伤1天后每日给予维生素C滴眼液（浓度为10%,每小时1次）联合腹腔内注射（50mg/kg,每日1次）处理,持续7天;另一组为对照组,给予无菌生理盐水（0.9%氯化钠溶液,每小时1次）局部滴眼,持续7天。于碱烧伤后第1、4、7、10天通过裂隙灯显微镜观察角膜上皮缺损程度、角膜混浊度及角膜新生血管情况,通过HE染色观察角膜病理组织学改变,免疫组织化学染色检测髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、角膜缘干细胞标志物p63和PCNA（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、角膜上皮细胞标志物CK3（cytokeratin3,CK3）、肌成纤维细胞标志物α-SMA（α-smooth muscle actin,α-SMA）、角膜新生血管标志物CD31（platelet endothelial adhesion molecule,PECAM-1,CD31）的表达情况。结果:⒈碱烧伤后第1天小鼠角膜上皮损伤脱落,角膜荧光素染色阳性。碱烧伤后第10天,实验组小鼠角膜上皮完整,角膜上皮缺损评分明显低于对照组（0.80±0.20 vs 1.90±0.33,P=0.022）;同时,实验组角膜混浊程度明显改善,角膜混浊评分低于对照组（1.40±0.40 vs 3.00±0.44,P=0.029）。碱烧伤后对照组角膜周边新生血管形成,并逐渐向角膜中央长入,而实验组未见明显角膜新生血管形成,在第7天、第10天角膜新生血管评分低于对照组（第7天:1.00±0.32 vs 2.20±0.20,P=0.013;第10天:0.60±0.25 vs 1.80±0.20,P=0.005）。⒉角膜组织HE染色可见碱烧伤第1天中央角膜上皮缺损,第10天实验组角膜上皮完全修复;对照组角膜上皮仍有少许缺损。免疫组织化学染色显示,碱烧伤后第4、7和10天实验组每视野下（×400倍）p63阳性细胞数分别为（均数±标准差）:16.33±0.88、19.67±1.45、28.67±1.86,对照组分别为:10.33±0.88、13.00±1.16、14±1.16,实验组p63阳性细胞数明显高于对照组（第4天P=0.010、第7天P=0.023、第10天P=0.003）。碱烧伤后第4、7和10天实验组每视野下（×400倍）PCNA阳性细胞数分别为（均数±标准差）:17.33±1.20、21.33±1.20、33.33±2.60,对照组为:9.00±1.16、14.33±1.45、19.00±1.53,实验组PCNA阳性细胞数明显高于对照组（第4天P=0.008、第7天P=0.021、第10天P=0.009）。碱烧伤后第10天,实验组免疫组织化学染色CK3的平均光密度值为0.1001±0.0075;对照组为0.0512±0.0070,实验组明显高于对照组（P=0.009）。⒊碱烧伤后第4天、7天和10天,实验组角膜碱烧伤区域炎性细胞的浸润较少,中央角膜MPO的平均光密度值均显着低于对照组(第4天:1.40×10-4±6.32×10-5 vs 4.90×10-4±8.14×10-5,P=0.027;第7天:4.09×10-5±1.97×10-5 vs2.33×10-4±4.57×10-5,P=0.018;第10天:6.20×10-6±3.64×10-6 vs 5.69×10-5±9.79×10-6,P=0.008)。⒋碱烧伤后第7、10天实验组角膜CD31阳性新生血管数量少于对照组（第7天:4.67±0.89 vs 12.33±0.89,P=0.004;第10天:6.33±1.45 vs 16.33±0.88,P=0.004）,且在第10天,实验组α-SMA的平均光密度值显着低于对照组(1.55×10-4±3.47×10-5 vs 3.76×10-4±4.54×10-5,P=0.018)。结论:维生素C可促进碱烧伤后角膜上皮修复,减少角膜新生血管的形成,减轻角膜混浊程度,抑制碱烧伤后角膜的炎症反应,为维生素C在角膜碱烧伤的治疗中提供实验依据。
马进海[4]（2020）在《卡替洛尔对大鼠角膜新生血管抑制作用的实验研究》文中提出目的:用活体共聚焦显微镜（IVCM）观察正常SD大鼠角膜各层结构特点,获取正常SD大鼠角膜共聚焦基础数据;建立大鼠碱烧伤CNV模型,观察碱烧伤后CNV的增值过程;观察不同浓度实验药物（1%和2%卡替洛尔滴眼液）对大鼠CNV的抑制作用,为角膜新生血管性疾病的治疗提供新的药物选择。方法:选取49只体重（200±20）g健康成年（6-8周龄）清洁级雄性SD大鼠,实验前于裂隙灯下检查,排除角膜病变,然后采用完全随机化方法选取10只作为空白对照组（A组）,麻醉后行前节照相和角膜共聚焦显微镜检查;余39只建立角膜碱烧伤模型,建模时用打孔器制作直径为3mm圆形滤纸片,所有建立角膜碱烧伤模型眼均为右眼,建模后左氧氟沙星滴眼液点眼,4次/日,连用3天。第4日选取建模成功且新生血管生长相对均一的大鼠30只,继续采用完全区组随机化分组方法随机分为三组:阴性对照组（B组）,1%卡替洛尔组（C组）,2%卡替洛尔组（D组）;第4-17日分别给与B组（生理盐水点眼,2次/日）、C组（1%卡替洛尔,2次/日）、D组（2%卡替洛尔,2次/日）;分别于建模第1、4天,用药第4、6、12、14天对各组大鼠进行前节照相和角膜IVCM检查,记录检查结果,计算各组角膜新生血管评分、角膜水肿评分、角膜新生血管面积,计算角膜上皮、基质、炎性细胞以及内皮细胞计数,读取各组角膜厚度,完成实验结果统计分析。结果:正常SD大鼠散瞳后前节照相可见瞳孔规则圆形散大,角膜透明,周边虹膜清晰可见,晶状体无明显混浊,角巩膜缘血管无扩张及充盈;IVCM检查可见角膜上皮细胞边界高反射、胞质呈低反射信号,角膜上皮细胞计数为:5267±125个/mm2。角膜基质层有纤维束样和星芒状两种形态,有时可见两种结构并存;大鼠角膜基质浅层神经纤细迂曲,基质深层神经较粗,走行较直;角膜基质细胞核呈类圆形高反射信号,正常大鼠此细胞计数为:74±10个/mm2;大鼠角膜内皮细胞边界低反射、胞质呈高反射信号,多为较规则多边形,此细胞计数为:3377±279个/mm2;角膜厚度为:145.5±9.2um。建模后眼前节照相结果:建模第4天角巩膜缘可见毛刷状新生血管;角膜新生血管评分、水肿评分及新生血管面积均表现为阴性对照组高于卡替洛尔组,且存在差异（各组均为P<0.05）。建模组CNV面积均在建模第14天达到峰值,生理盐水组为20.91±1.68mm2,1%卡替洛尔组为11.15±1.45mm2,2%卡替洛尔组为10.83±1.28mm2;角膜IVCM检查结果:建模第4天基质层可见CNV长入,第14天基质层CNV生长最密,管径粗大,相互交通,血流信号丰富。角膜上皮细胞及内皮细胞计数空白对照组最高,分别为5267±125个/mm2、3377±279个/mm2,建模组这两项计数下降,且差异显着（P值均为0.000）,与生理盐水组相比,2%卡替洛尔干预可减轻角膜上皮细胞计数的下降及内皮细胞计数的下降,两组P值分别为0.039、0.000,1%卡替洛尔干预可减轻角膜内皮细胞计数的下降（P值值为0.03）;角膜基质细胞及炎性细胞计数建模当天出现升高,分别于建模第7、4天达到峰值,卡替洛尔干预可显着降低基质细胞（两组P值均为0.000）及炎性细胞（两组P值分别为0.003、0.001）计数;正常SD大鼠角膜厚度为:145.5±9.2um,碱烧伤后角膜厚度存在差异（P=0.000）,两两比较,生理盐水组角膜厚度增加无统计学意义（P=0.062）,而生理盐水组与卡替洛尔组相比,存在显着差异（P值均为0.002）,卡替洛尔组与空白对照组无差异（P值均为1.000）,单独分析用药12天及14天时角膜厚度发现,卡替洛尔可使角膜厚度变薄,且存在显着差异（P值分别为0.000、0.003）。以上所有统计指标显示1%卡替洛尔组与2%卡替洛尔组之间无统计学差异（各组P值均大于0.05）。结论:卡替洛尔滴眼液抑制CNV有效;活体共聚焦显微镜（IVCM）检查能够清晰显示正常SD大鼠角膜结构特点,并可对角膜上皮细胞、基质细胞和内皮细胞进行计数;活体共聚焦显微镜（IVCM）检查能清晰显示SD大鼠角膜碱烧伤后不同阶段的活体组织病理变化;卡替洛尔滴眼液可能通过抑制角膜炎性细胞浸润、减轻角膜水肿、改善角膜神经损伤、减轻角膜上皮及内皮细胞的破坏、抑制基质细胞增值来发挥抗新生血管作用;本实验中1%和2%卡替洛尔滴眼液均可抑制CNV生长,两者疗效无差异。
段朝野[5]（2019）在《角膜缘基质微环境细胞对体外培养的口腔黏膜上皮细胞的影响》文中提出目的:自体口腔黏膜上皮细胞移植（Autologous cultivated oral mucosal epithelial transplantation,COMET）是治疗角膜缘干细胞缺乏的重要方法,但是COMET术后周边部角膜新生血管的出现阻碍了其广泛地应用于临床。本研究将同种异体角膜缘基质微环境细胞（Limbal niche cells,LNCs）代替传统的小鼠源性的3T3细胞作为滋养细胞来培养口腔黏膜上皮细胞,从而降低口腔黏膜上皮细胞诱导新生血管生成的可能性。方法:将大鼠口腔黏膜上皮细胞与LNCs或3T3细胞共培养。对体外培养得到的口腔黏膜上皮细胞进行H&E染色及细胞免疫化学检测。通过RT-q PCR和Western Blotting分别在转录和翻译水平检测并比较各组口腔黏膜上皮细胞中血管生成相关因子的表达量。随后提取不同培养体系中上皮细胞培养基上清（条件培养基）对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）进行刺激,通过检测接受了不同刺激的HUVECs的细胞活性及管腔形成情况进而再次比较不同培养体系所得到的口腔黏膜上皮细胞诱导新生血管产生的潜能。结果:无论选择LNCs还是3T3细胞作为滋养层,均可成功地在体外扩增培养出口腔黏膜上皮细胞。细胞免疫化学结果显示体外扩增得到的各组口腔黏膜上皮细胞中p63α,ABCG2,Ki67和CK3阳性细胞比例无明显差异。RT-q PCR和Western Blotting结果分别从基因和蛋白水平证明,与3T3组相比,LNC组所得到的口腔黏膜上皮细胞表达较少的b FGF和较多的PEDF和s Flt-1。此外,与3T3组相比,LNC组的口腔黏膜上皮细胞可降低HUVECs的细胞活性和形成管腔的能力。结论:LNCs可以代替3T3细胞作为体外扩增口腔黏膜上皮细胞的滋养细胞。以LNCs作为滋养细胞培养的口腔黏膜上皮细胞比传统方法培养的口腔黏膜上皮细胞具有较小的诱发新生血管的可能性。本研究为口腔黏膜上皮细胞培养体系的优化和COMET的更广泛的应用提供了实验基础。目的:当发生严重的双眼角膜缘干细胞缺乏（Limbal stem cell deficiency,LSCD）时眼表的重建是当务之急,自体口腔黏膜上皮细胞移植（Autologous cultivated oral mucosal epithelial transplantation,COMET）为眼表重建策略之一,它不受供体来源不足和长期进行免疫抑制治疗的限制。我们之前将角膜缘基质微环境细胞（Limbal niche cells,LNCs）作为滋养细胞建立的口腔黏膜上皮细胞（Oral mucosal epithelial cells,OMECs）体外培养体系显示出具有抑制术后周边角膜新生血管的潜能,本研究试图在动物模型中进一步验证这一作用。方法:建立日本大耳白兔LSCD模型,通过裂隙灯检查及H&E染色检验该模型建立是否成功。将OMECs悬液种植到去上皮羊膜上,并与LNCs或3T3细胞共培养。将培养的口腔黏膜上皮细胞片移植于模型眼（COMET-LNCs组或COMET-3T3组）,通过裂隙灯检查及免疫化学染色检比较各组眼表重建情况。通过RT-q PCR和Western Blotting比较各组角膜血管生成相关因子的表达情况。结果:造模后,模型眼出现角膜混浊、结膜化及新生血管化,且无恢复或减轻的倾向。各组动物在接受COMET后,眼表情况基本恢复透明,但是在COMET-3T3组的一个角膜发现轻度的新生血管形成,且COMET-3T3组角膜中可检测到CD34。与COMET-3T3组角膜相比,COMET-LNCs组的角膜表达高水平的PEDF和s Flt-1,但b FGF表达水平较低。结论:在动物实验中,以LNCs作为滋养细胞培养的口腔黏膜上皮细胞片可用于COMET手术,治疗效果肯定。而且具有比传统方式（以3T3细胞作为滋养细胞培养OMECs）更小的诱发术后新生血管的风险。
杜圆圆[6]（2019）在《皮质类固醇激素眼液治疗严重角膜碱烧伤的临床疗效》文中研究指明目的探讨严重角膜碱烧伤患者早期、足疗程、局部使用皮质类固醇激素的临床疗效。方法回顾性分析2014年5月—2018年4月我院收治的严重角膜碱烧伤患者,根据国际通用的Roper-Hall标准分度,我们选取依从性好、病史齐全的眼部碱烧伤患者共15例18眼,接诊患者后,用妥布霉素地塞米松滴眼液4次/天治疗1-2周后,改为0.1%氟米龙滴眼液4次/天,根据治疗效果逐渐减量。随访3—12个月,裂隙灯显微镜辅助下,观察这些患者的临床疗效,如视力、角膜上皮修复、角膜水肿情况、新生血管、眼压、并发症等。结果治疗后视力改善有统计学意义（P<0.05）,其中,视力明显提高16只眼（视力在0.1-0.4 12眼,>0.4 4眼）,但仍有2眼在0.1左右。18眼角膜上皮完全修复,平均修复时间为（1.53±0.74）月。18眼角膜水肿均完全消失,治疗后角膜清晰度也较治疗前明显改善。新生血管明显消退,其中新生血管消失9眼,8只眼有不同程度的消退,1眼无明显变化。全部18眼中,有1眼出现眼压升高（经降眼压治疗后下降至正常）。并发症:睑球粘连,白内障,假性胬肉分别是1眼,1眼,2眼。未发现有其他严重的并发症如角膜穿孔、眼内炎甚至眼球萎缩等发生。结论对于严重角膜碱烧伤的患者,早期、足疗程、局部使用皮质类固醇激素,可以抑制新生血管生长及瘢痕形成,促进损伤愈合,改善视功能。
孙恒[7]（2019）在《PMMA-硅胶夹持型人工角膜的动物实验研究》文中认为[目 的]探讨PMMA-硅胶夹持型人工角膜后片中央孔的最适合尺寸;研究骨片-PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入兔眼碱烧伤模型的有效性和并发症;探索小切口 PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入手术的可行性。[方 法]实验分为三部分。第一部分:建立兔眼硷烧伤模型,选取其中24只分为A、B、C三组,每组8只,均完成PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入操作,A组植入的人工角膜后片中央孔径为2.Omm,B组为2.5mm,C组为3.Omm。术中对比组装人工角膜操作难易度;术后2月内观察人工角膜前后片的紧密程度,并对人工角膜脱离发生率做统计学分析。第二部分:建立兔眼硷烧伤模型,选取40只严重角膜烧伤兔眼模型,分为实验组和对照组,每组20只。实验组的手术分两期进行:第一期,切除小片兔肩胛骨,打磨成环形薄骨片,植入肌肉组织间,同期完成烧伤兔眼角膜的自体结膜覆盖术;第二期,取出包埋2个月后的环形薄骨片,植入结膜瓣与角膜之间,加固兔眼角膜,再完成PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入操作。对照组不植入薄骨片,单纯行PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入术。1年内观察其术后效果和并发症,并对实验组和对照组的穿孔发生率进行统计学分析。第三部分:建立5只烧伤兔眼,通过7mm角膜缘主切口和两个辅助切口内,完成小切口 PMMA-硅胶夹持型人工角膜后片的植入操作,然后在眼内完成人工角膜前后片的装配操作,观察术中和术后1月内的效果及并发症。[结 果]第一部分:在2个月的观察期内,A组有1例兔子不明原因死亡,剩下7例中有1例发生人工角膜脱离;B组有1例发生了人工角膜脱离,1例发生高眼压;C组有6例发生了人工角膜脱离。A组和B组比较,人工角膜脱离发生率无显着性差异（X2=0.010,P>0.05）;C组分别与A组、B组比较,人工角膜脱离发生率均有显着性差异（X2=5.529,P<0.05;X2=6.349,P<0.05）;术中装配人工角膜难易度,C组手术操作最容易,B组次之,A组难度最大。第二部分:实验组,1例术中麻醉意外死亡,在1年观察期内,2例不明原因死亡,剩下17只中,有2例发生了角膜穿孔,2例发生了部分骨片暴露（修补后恢复）,2例发生了青光眼,1例发生了人工角膜后膜,共15例兔眼人工角膜保持解剖在位,无其他并发症发生。对照组,在1年观察期内,4例不明原因死亡,剩下16只中,有8例发生了角膜穿孔,3例发生了青光眼,3例发生了人工角膜后膜,1例发生了感染性眼内炎,共8例兔眼人工角膜保持解剖在位,无其他并发症发生。统计学比较,实验组和对照组的穿孔发生率有显着性差异（X2=5.705,P<0.05）。第三部分:手术在5只轻度烧伤兔眼上顺利完成PMMA,通过7mm切口完成了 PMMA-硅胶夹持型人工角膜的所有组装过程,1例术中前房出血,发生在虹膜咬切时。在1个月观察期内,1例发生了青光眼,其他人工角膜均保持在位透明,无其他并发症发生。[结 论]（1）PMMA-硅胶夹持型人工角膜的硅胶后片的中央孔孔径应比前片的柱镜直径大1.0mm左右最为适宜。（2）PMMA-硅胶夹持型人工角膜加工简单,操作容易,费用较低,采用自体角膜作为人工角膜支架,节约了宝贵同种异体角膜材料。兔肩胛骨是简单易行的自体骨取材部位,骨片较薄,适用于人工角膜层间加固手术。自体骨片联合PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入术,增加了角膜的厚度,具有良好地安全性和有效性,对于严重烧伤的角膜,效果优于单纯PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入术。（3）PMMA-硅胶夹持型人工角膜完全可以通过7mm的小切口完成植入手术操作。小切口 PMMA-硅胶夹持型人工角膜植入术是一种相对安全有效的植入方式,值得进一步研究应用。
郭庆[8]（2017）在《羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究》文中指出眼表疾病是眼科的常见病、多发病,且复发率高,是眼科主要致盲疾病之一。对于各种眼表疾病所致角膜上皮缺损的治疗,目前以眼表面重建术效果最好,常采用的方法是自体或异体角膜移植术。但自体角膜缘取材有限,并有造成健眼角膜缘干细胞缺乏的风险。异体角膜要求新鲜,且存在来源不足、排斥反应等问题。由于羊膜有其特有的结构特点和促进组织修复的生物学特性,研究者们开始转向以羊膜为原材料治疗眼表疾病的研究中。在对羊膜移植的研究基础上,羊膜的研磨提取液—羊膜匀浆液保留了羊膜中的有效生物成分,在治疗眼表疾病方面取得了一定的进展,是一种较新的尝试。随着生物技术和其他相关技术的发展,以羊膜上皮细胞作为“种子细胞”构建组织工程角膜上皮,在眼表疾病治疗中亦显示出良好的发展前景。本文以羊膜为原材料,从动物实验、临床研究、细胞培养三个层面,研究羊膜移植片、羊膜匀浆液、羊膜上皮细胞对角膜上皮缺损的治疗作用及作用机制,为解决眼表重建材料缺乏及严重眼表疾病的治疗提供新的方法和新的理论依据。首先建立兔角膜上皮损伤的动物模型,行以羊膜移植术,以观察羊膜对动物角膜伤口愈合的作用。结果发现,羊膜移植组与对照组比较,角膜上皮愈合加快,显微形态学观察显示,实验组细胞排列水平、细胞形态、炎症细胞数等方面较对照组均明显改善。其次,在动物实验的基础上,对不同病因所致的眼表上皮缺损患者24人（25眼）,行以羊膜移植术,该临床研究发现:25只眼中21只眼眼表面得以重建,视力有不同程度的提高。再生的角膜上皮透明,结膜组织稳定、无感染。平均观察28.3周,所有21只眼无复发,另外3只眼因并发症致手术失败。再次,以上皮细胞缺损的兔角膜作为研究对象,观察不同浓度羊膜匀浆液对角膜上皮细胞增殖的作用。结果发现,羊膜匀浆液对兔角膜上皮细胞增殖和修复具有明显的促进作用,且这种促进作用在一定范围内随浓度增加而增强,即角膜上皮细胞的增殖率对羊膜匀浆液具有浓度依从性。羊膜匀浆组与羊膜移植组比较作用效果相同,但可避免手术并发症。最后,进行羊膜及角膜上皮细胞培养以及二者共同培养的细胞学研究。结果显示:羊膜上皮细胞在原代培养2 h后开始贴壁生长。细胞呈多角形、不规则形,排列呈铺路石样。体外可连续传45代,CK3、CK18、CK19呈阳性表达。流式细胞仪检测CK3、CK18、CK19表达率分别为40.84±3%,47.51±2%和32.41±3%。角膜上皮细胞在培养的第3天时开始爬出,呈多角形,排列均匀。经诱导培养后的羊膜上皮细胞呈多角形、扁平状,细胞体积增大。流式细胞学检测CK3表达率为76.40±0.3%,与诱导前相比有显着差异（P<0.05）,具有统计学意义。综上所述,本文针对羊膜进行了动物实验、临床研究、细胞培养三个层面的研究工作,实验和临床研究均证明了羊膜对角膜上皮缺损的修复具有促进作用,为解决眼表重建材料缺乏及严重眼表疾病的治疗提供了新的途径和方法。
袁晔[9]（2015）在《兔骨髓间充质干细胞膜片对角膜化学烧伤的治疗作用与机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的:一.探讨体外分离培养兔骨髓间充质干细胞的可行性;构建骨髓间充质细胞膜片;观察细胞膜片超微结构;二.探讨骨髓间充质干细胞培养基上清液对体外培养角膜基质细胞生长的影响,分析其产生影响的原因;三.探讨骨髓间充质干细胞膜片对兔角膜化学烧伤动物的治疗效果,检测治疗过程中相关细胞因子的表达水平;探讨细胞膜片发挥治疗作用的机制。研究方法:一.贴壁筛选分离和体外培养幼兔骨髓细胞,对所得细胞进行细胞传代培养、纯化;倒置显微镜下细胞形态学观察,照相,对比不同浓度条件接种细胞的培养效果;细胞诱导分化试验行成脂和成骨诱导并鉴定,观察骨髓间充质干细胞的分化能力;细胞表面标记CD29、CD44、CD45检测鉴定细胞,观察所获细胞其纯度;检测骨髓间充质干细胞克隆形成能力;维生素C诱导体外培养兔骨髓间充质干细胞多层生长,构建骨髓间充质干细胞细胞膜片,HE染色行细胞膜片组织学鉴定。扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察培养好的BMSCs膜片,观察组织成分、细胞状态;ELISA方法检测不同浓度细胞体外培养液上清液中IL-2、MMP-9、VEGF、IL-10、TSP-1和TSG-6等细胞因子表达量。二.兔角膜基质细胞分离和培养至对数生长期,应用无血清DMEM（Serum-free FCM）、含10%FBS DMEM的培养液（FCM）和BMSC上清液（MSC medium）培养角膜基质细胞,应用MTT、划痕实验、细胞周期检测三种培养液的影响,ELISA检测三种条件下IL-2、IL-10、TSP-1和TSG-6四种细胞因子表达量。三.新西兰大白兔72只,成功建立角膜化学烧伤模型后,随机分为实验组、对照组,术后7天、14天、21天,应用裂隙灯显微镜观察上皮完整性、基质透明性及血管新生情况,观察拍照后每个时间点随机按3只实验动物一组取材,分别进行2westernblot检测vegf,mmp-9,il-2和s100a8等因子,rt-pcr、elisa检测egf、mmp-9、s100a8、il-2、tsp-1、tsg-6和il-10等因子、组织切片行he染色和免疫荧光检测细胞因子表达。研究结果:第一部分1.1角膜间充质干细胞成功构建细胞膜片;bmscs原代培养24h全量换液效果佳。第三代细胞,获得较纯化的bmscs,细胞边缘折光性好,可用于后续试验;成脂实验部分,bmscs经油红染色,细胞内无脂滴形成,染色结果为为阴性;成骨诱导实验部分,所得细胞传代至第三代,培养过程应用成骨细胞诱导剂,至21天茜素红染色显微镜下观察:细胞呈多层生长,排列次序重叠,单个细胞的梭形形态消失,多呈多角形形态,细胞间质内大量钙质沉积,茜素红染色呈钙化结节,染色结果为阳性;流式细胞仪检测bmscscd29的阳性率为93.7%,cd44为93.4%,cd45阳性率为0.32%。2×105细胞/孔接种细胞,膜片表面未形成沉积物,可清晰观察到细胞形态,细胞边缘折光性强,形成的细胞膜片活力旺盛;1.2透射电镜（tem）观察见胞膜完整,可见细胞突触及分泌泡,胞质丰富有大量胶原束,说明细胞状态良好。il-2、mmp-9和vegf在2×105接种密度的表达量低于其他细胞接种密度;il-10、tsp-1和tsg-6在2×105接种密度的表达量高于其他细胞接种密度。第二部分Fcm促使细胞的迁移明显,促使细胞的迁移,mscmedium和serum-freefcm与fcm相比抑制角膜基质细胞迁移,mscmedium与fcm相比显着影响基质细胞的增殖。elisa检测结果mscmedium中细胞因子il-10,tsp-1和tsg-6表达量明显高于fcm和serum-freefcm中细胞因子的表达量。第三部分3.1裂隙灯观察:实验组术后第7天可见角膜平滑,已完成上皮化;术后第14天可见角膜透明度良好,无瘢痕组织形成;术后第21天实验组bmsc观察结果,可见角膜已完全透明,眼表光滑,上皮完整,治疗效果明显。3.2组织病理学观察结果:实验组术后第7天可见细胞膜片比较疏松,角膜已完成上皮化;第14天细胞膜片已基本与角膜基质整合;第21天术后细胞膜片已完全与角膜基质整合。3.3 Westernblot实验结果:VEGF,MMP-9,IL-2和S100A8因子在第7天,第14天和第21天时正常组和BMSC处理组表达量很低,但是对照组中表达量明显增强,且随着时间表达增强;3.4 RT-PCR检测细胞因子表达结果:在正常的兔角膜基质各基因的表达量很低;在对照组（板层去除角膜创伤）中VEGF、MMP-9、S100A8和IL-2均明显升高;BMSC组与对照组相比,TSP-1、TSG-6和IL-10的表达变化有显着增多。3.5免疫荧光检测细胞因子表达:随着时间的延长,对照组角膜中侵润的CD4逐渐增多明显高于MSC处理组和正常组;对照组角膜中IL-2、MMP-9表达量均逐渐增多,明显高于MSC处理组和正常组;3.6 ELISA检测细胞因子结果:EGF,MMP-9,S100A8和IL-2在对照组高表达,且3周时表达量最高;TSP-1、TSG-6和IL-10在BMSCs膜片处理的实验组表达量较高,有效地抑制血管化,炎症和瘢痕组织。结论:体外构建BMSCs细胞膜片对角膜化学烧伤治疗作用明显,促进角膜上皮化,维持角膜基质透明,有效地抑制血管化,炎症和瘢痕组织。作用机制可能与上调TSP-1、TSG-6和IL-10表达,下调VEGF、MMP-9、S100A8和IL-2表达有关。
中国医科大学医学信息学系[10]（2012）在《中国实用眼科杂志2012年第30卷主题词索引》文中指出
二、自体角膜缘移植对角膜血管新生抑制作用的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、自体角膜缘移植对角膜血管新生抑制作用的实验研究（论文提纲范文）
（1）102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜溃疡的病因和愈合机制 |
| 1 角膜溃疡的病因与致病机制 |
| 1.1 角膜溃疡的病因 |
| 1.2 角膜溃疡的致病机制 |
| 2 角膜上皮层伤口的愈合机制 |
| 2.1 生长因子/细胞因子在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.2 Toll样受体2 |
| 2.3 蛋白酶在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.4 细胞外基质(ECM)在上皮创面愈合中的作用 |
| 3 角膜基质伤口的愈合机制 |
| 3.1 愈合过程中角膜细胞向成纤维细胞和肌成纤维细胞转化 |
| 3.2 免疫系统细胞在基质修复中的作用 |
| 3.3 创面愈合过程中基质细胞外基质的改建 |
| 3.4 与基质创面愈合过程相关的信号通路 |
| 第二章 治疗角膜溃疡方法的研究进展 |
| 1 药物治疗 |
| 2 角膜工程生物材料 |
| 2.1 胶原蛋白 |
| 2.2 丝素蛋白 |
| 2.3 明胶 |
| 2.4 脱细胞角膜 |
| 2.5 壳聚糖 |
| 2.6 其他合成聚合物水凝胶 |
| 3 手术治疗 |
| 3.1 角膜溃疡清创术 |
| 3.2 结膜瓣遮盖术 |
| 3.3 羊膜移植术 |
| 3.4 穿透角膜移植术 |
| 3.5 板层角膜移植术 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌分离鉴定与药敏试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 临床病例 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 常用试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 细菌的分离和纯化培养 |
| 2.3 MALDI Biotyper系统鉴定细菌和细菌保存 |
| 2.4 药物敏感性试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 病因 |
| 3.2 发病率 |
| 3.3 品种 |
| 3.4 性别和年龄 |
| 3.5 治疗方法 |
| 3.6 治疗效果 |
| 3.7 细菌学分类 |
| 3.8 药物敏感性试验 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 不同治疗方法对犬伪中间葡萄球菌性角膜溃疡的疗效观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 试剂配制 |
| 1.4 仪器和设备 |
| 1.5 手术器械 |
| 2 方法 |
| 2.1 造模前准备 |
| 2.2 麻醉与保定 |
| 2.3 术部消毒 |
| 2.4 角膜溃疡模型建立 |
| 2.5 手术治疗前准备 |
| 2.6 抗生素治疗组 |
| 2.7 抗生素联合手术治疗组 |
| 2.8 术后护理 |
| 3 术后临床常规检查及裂隙灯观察 |
| 3.1 临床检查 |
| 3.2 裂隙灯检查 |
| 3.3 治疗过程中犬泪液量检测 |
| 3.4 犬眼内压测定 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 抗生素治疗组裂隙灯观察的变化 |
| 5.2 手术治疗组裂隙灯观察 |
| 5.3 临床评分 |
| 5.4 泪液量检测结果 |
| 5.5 眼内压检测结果 |
| 5.6 三种治疗方案的疗效 |
| 5.7 三种治疗方案的愈合时间 |
| 6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 不同治疗方法对角膜溃疡模型犬角膜组织病理学与相关细胞因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验犬术前准备 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 组织切片制作 |
| 2.5 荧光定量PCR检测相关基因表达量 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 组织病理学观察 |
| 3.1.1 抗生素治疗组组织病理学观察 |
| 3.1.2 抗生素联合手术治疗组病理学切片观察 |
| 3.2 qPCR检测角膜细胞因子的结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 临床病例介绍 |
| 2 方法 |
| 2.1 术前临床检查 |
| 2.2 手术方法 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 术后临床检查 |
| 3 结果 |
| 3.1 术前检查结果 |
| 3.2 术后检查结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附录 |
（2）含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜缘干细胞研究进展 |
| 1 角膜缘解剖结构 |
| 2 角膜缘干细胞概述 |
| 3 角膜缘干细胞的培养 |
| 3.1 培养方法 |
| 3.2 培养基的选择 |
| 3.3 饲养层细胞 |
| 3.4 培养载体 |
| 3.5 气液交界面培养 |
| 4 角膜缘干细胞的标志物 |
| 4.1 ΔNp63α |
| 4.2 C/EBPδ和Bmil |
| 4.3 ABCG2和Noch-1 |
| 4.4 细胞角蛋白 |
| 第二章 角膜缘干细胞缺乏症的研究进展 |
| 1 角膜缘干细胞缺乏症的病因 |
| 2 角膜缘干细胞缺乏症的临床表现 |
| 3 角膜缘干细胞缺乏症的诊断方法 |
| 3.1 临床表现及裂隙灯检查 |
| 3.2 印迹细胞学检查 |
| 3.3 活体成像技术 |
| 4 角膜缘干细胞缺乏症治疗的研究进展 |
| 4.1 CLET |
| 4.2 CLAU |
| 4.3 SLET |
| 4.4 COMET |
| 5 试验目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞植片的构建与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 犬羊膜的采集、保存以及处理 |
| 2.2 犬LSCs的分离培养 |
| 2.3 犬原代角膜缘上皮细胞的超微结构观察 |
| 2.4 羊膜组织学观察 |
| 2.5 犬原代角膜缘上皮细胞相关基因表达的鉴定 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 羊膜去上皮层效果的鉴定 |
| 3.2 犬角膜缘上皮细胞的培养 |
| 3.3 犬原代角膜缘上皮细胞的超微结构 |
| 3.4 犬原代角膜缘上皮细胞相关基因的表达情况 |
| 4 讨论 |
| 第二章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对LSCD疾病模型犬疗效的临床观察 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 LSCD疾病模型犬的制作 |
| 2.2 手术治疗 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 裂隙灯检查 |
| 2.5 眼表临床检查 |
| 2.6 数据分析 |
| 3.1 临床表现 |
| 3.2 裂隙灯检查结果 |
| 3.3 角膜临床评分结果 |
| 3.4 眼表临床检查结果 |
| 3.5 印记细胞学检查结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 含LSCs犬原代角膜缘上皮细胞片自体移植对角膜的组织结构及相关因子的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物的分组 |
| 2.2 术前准备、麻醉、保定与消毒 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 角膜组织学观察 |
| 2.5 免疫组化染色法检测ABCG2和p63的表达 |
| 2.6 qPCR检测IL-1β、VEGF和FGF的表达水平 |
| 2.7 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 角膜组织学观察结果 |
| 3.2 免疫组化染色观察术后角膜中ABCG2和p63的表达情况 |
| 3.3 手术治疗后角膜中细胞因子的mRNA相对表达量变化 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器、设备 |
| 1.1.4 主要试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 小鼠角膜碱烧伤模型的制作 |
| 1.2.2 实验分组 |
| 1.2.3 治疗方法 |
| 1.3 碱烧伤后眼前段观察 |
| 1.3.1 角膜上皮损伤测定 |
| 1.3.2 角膜新生血管情况 |
| 1.3.3 角膜混浊情况 |
| 1.4 组织病理学观察 |
| 1.4.1 苏木精-伊红染色(HE染色) |
| 1.4.2 免疫组织化学染色 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 维生素C可促进角膜碱烧伤后角膜上皮愈合 |
| 2.2 维生素C抑制碱烧伤后角膜新生血管的生成 |
| 2.3 维生素C减轻碱烧伤后角膜混浊程度 |
| 2.4 维生素C促进碱烧伤后角膜缘干细胞增殖分化 |
| 2.5 维生素C能减轻碱烧伤后角膜的炎症反应 |
| 2.6 维生素C抑制碱烧伤后角膜基质CD31 和α-SMA的表达 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 眼化学伤的临床治疗进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间撰写文章 |
| 致谢 |
（4）卡替洛尔对大鼠角膜新生血管抑制作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 研究背景 |
| 1.1 β受体阻滞剂抑制新生血管的机理 |
| 1.1.1 β受体阻滞剂可抑制VEGF表达 |
| 1.1.2 β受体阻滞剂可抑制血管内皮细胞成管 |
| 1.1.3 β受体阻滞剂可减缓细胞增值,诱导细胞凋亡 |
| 1.2 β受体阻滞剂对眼部新生血管的抑制作用 |
| 1.2.1 β受体阻滞剂对视网膜新生血管的抑制作用 |
| 1.2.2 β受体阻滞剂对脉络膜新生血管的抑制作用 |
| 1.2.3 β受体阻滞剂对角膜新生血管的抑制作用 |
| 1.3 IVCM的临床应用 |
| 1.4 CNV治疗方法及大鼠碱烧伤CNV模型 |
| 1.4.1 CNV治疗方法 |
| 1.4.2 大鼠碱烧伤CNV模型 |
| 1.5 总结 |
| 1.6 本次研究的目的及意义 |
| 第二章 研究对象及方法 |
| 2.1 研究对象及纳入、排除标准 |
| 2.2 实验人员资质 |
| 2.3 信息记录及眼科检查 |
| 2.4 实验仪器及相关用物 |
| 2.4.1 实验仪器 |
| 2.4.2 相关用物 |
| 2.4.3 配制NaOH溶液(1mol/L) |
| 2.5 建立模型 |
| 2.5.1 建模前准备 |
| 2.5.2 建模方法 |
| 2.6 实验分组及干预措施 |
| 2.6.1 实验分组 |
| 2.6.2 干预措施 |
| 2.7 检查项目、方法及实验终点 |
| 2.7.1 大鼠眼前节照相 |
| 2.7.2 大鼠活体角膜共聚焦检查 |
| 2.7.3 实验终点 |
| 2.8 阅图及数据测量 |
| 2.8.1 实验结果评价指标 |
| 2.8.1.1 大鼠眼前节照相 |
| 2.8.1.2 大鼠角膜共聚焦显微镜 |
| 2.9 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 空白对照组检查结果 |
| 3.1.1 空白对照组眼前节照相结果 |
| 3.1.2 空白对照组IVCM检查结果 |
| 3.2 干预组检查结果 |
| 3.2.1 建模第1天检查结果 |
| 3.2.2 建模第4天检查结果 |
| 3.2.3 用药第4天检查结果 |
| 3.2.4 用药第6天检查结果 |
| 3.2.5 用药第12天检查结果 |
| 3.2.6 用药第14天检查结果 |
| 3.3 整体结果分析 |
| 3.3.1 前节照相结果 |
| 3.3.2 角膜共聚焦显微镜检查结果 |
| 3.4 实验结果总结 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（5）角膜缘基质微环境细胞对体外培养的口腔黏膜上皮细胞的影响（论文提纲范文）
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分:大鼠角膜缘基质微环境细胞可支持大鼠口腔黏膜上皮细胞的生长并改变其生物学性状 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分:角膜缘基质微环境细胞对口腔黏膜上皮细胞移植后新生血管生成影响的动物实验研究 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 主要缩略语英汉对照表 |
| 附录:博士期间发表论文 |
| 致谢 |
（6）皮质类固醇激素眼液治疗严重角膜碱烧伤的临床疗效（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 2 资料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）PMMA-硅胶夹持型人工角膜的动物实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 PMMA-硅胶夹持型人工角膜的片型设计研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 自体骨片-PMMA-硅胶夹持人工角膜的植入研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 小切口PMMA-硅胶夹持型人工角膜的植入研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题来源 |
| 1.2 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.3 羊膜的特性 |
| 1.3.1 羊膜的组织学特性 |
| 1.3.2 羊膜的免疫学特性 |
| 1.3.3 羊膜的生物学特性 |
| 1.4 羊膜的研究现状及进展 |
| 1.4.1 羊膜的历史应用 |
| 1.4.2 羊膜的基础研究 |
| 1.5 羊膜在眼科的应用及研究进展 |
| 1.5.1 修复角膜上皮缺损 |
| 1.5.2 修复结膜上皮缺损及异常增生 |
| 1.5.3 治疗角巩膜溃疡及穿孔 |
| 1.5.4 角膜移植的辅助性治疗 |
| 1.5.5 眼部复杂化学烧伤的治疗 |
| 1.5.6 青光眼手术中的应用 |
| 1.5.7 屈光手术中的应用 |
| 1.5.8 其他眼病的治疗 |
| 1.6 羊膜在组织工程学中的应用 |
| 1.7 主要研究内容 |
| 第2章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 羊膜植片的筛选 |
| 2.1.2 实验动物的筛选 |
| 2.1.3 临床治疗病人筛选 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 手术器械 |
| 2.1.6 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 羊膜植片的制备及保存 |
| 2.2.2 羊膜匀浆的制备及保存 |
| 2.2.3 羊膜匀浆蛋白含量测定及实验溶液制备 |
| 2.2.4 病理标本的取材制备 |
| 2.2.5 羊膜上皮细胞原代及传代培养 |
| 2.2.6 羊膜上皮细胞的检测 |
| 2.2.7 角膜上皮细胞原代培养 |
| 2.2.8 羊膜上皮细胞与角膜上皮细胞共同培养 |
| 2.2.9 诱导后羊膜上皮细胞检测 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第3章 羊膜移植治疗兔角膜损伤的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验分组及动物模型的建立 |
| 3.2.1 实验分组 |
| 3.2.2 角膜损伤模型的建立 |
| 3.3 手术方式及观察指标 |
| 3.4 羊膜移植对兔角膜损伤愈合作用的比较分析 |
| 3.4.1 眼部炎症反应的比较分析 |
| 3.4.2 角膜上皮愈合时间的比较分析 |
| 3.5 羊膜移植术后显微形态学观察比较 |
| 3.5.1 光学显微镜观察比较 |
| 3.5.2 透射电镜观察比较 |
| 3.6 羊膜移植对角膜伤口愈合的影响 |
| 3.6.1 角膜伤口的愈合方式 |
| 3.6.2 生长因子、胶原纤维对角膜伤口愈合的影响 |
| 3.6.3 羊膜的作用及作用机理 |
| 3.6.4 实验结果及机理分析 |
| 3.7 本章小结 |
| 第4章 羊膜移植治疗人眼表疾病的临床研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 临床资料与手术方式 |
| 4.2.1 临床资料 |
| 4.2.2 羊膜植片的取材 |
| 4.2.3 手术方式 |
| 4.2.4 术后处理 |
| 4.3 临床愈后 |
| 4.4 典型病例报告 |
| 4.4.1 病例 1 |
| 4.4.2 病例 7 |
| 4.4.3 病例 19 |
| 4.5 羊膜移植的临床治疗作用及机理分析 |
| 4.5.1 临床愈后机理分析 |
| 4.5.2 手术适应症及手术方式的选择 |
| 4.5.3 术后并发症的预防和处理 |
| 4.5.4 影响愈后的相关因素分析 |
| 4.5.5 羊膜移植术临床应用的限制和不足 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 羊膜匀浆液治疗兔角膜损伤的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 羊膜匀浆液对兔角膜上皮细胞增殖作用的研究 |
| 5.2.1 实验分组及动物模型制备 |
| 5.2.2 角膜裸区面积的观察测量及细胞增殖率测定 |
| 5.2.3 各组生长速度的比较 |
| 5.3 羊膜匀浆液与羊膜移植对兔角膜损伤修复作用的比较研究 |
| 5.3.1 实验分组及动物模型制备 |
| 5.3.2 角膜裸区面积的观察测量及细胞增殖率测定 |
| 5.3.3 各组生长速度的比较 |
| 5.4 羊膜匀浆液的作用机理及应用前景分析 |
| 5.4.1 羊膜匀浆液的作用及作用机理 |
| 5.4.2 实验结果及机理分析 |
| 5.4.3 羊膜匀浆液在眼科疾病中的应用 |
| 5.4.4 羊膜匀浆液的应用优势及前景 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 羊膜上皮细胞体外培养及诱导分化研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 羊膜和角膜上皮细胞培养的形态变化及鉴定 |
| 6.2.1 羊膜上皮细胞形态变化 |
| 6.2.2 羊膜上皮细胞的鉴定 |
| 6.2.3 角膜上皮细胞的形态变化 |
| 6.2.4 角膜细胞诱导的羊膜上皮细胞形态变化及鉴定 |
| 6.3 羊膜和角膜上皮细胞培养的相关因素分析 |
| 6.3.1 实验材料选择相关性分析 |
| 6.3.2 羊膜上皮细胞的培养分析 |
| 6.3.3 羊膜上皮细胞的鉴定分析 |
| 6.3.4 角膜上皮细胞的培养分析 |
| 6.3.5 羊膜上皮细胞的诱导分化分析 |
| 6.3.6 本章实验的不足 |
| 6.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及其他成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）兔骨髓间充质干细胞膜片对角膜化学烧伤的治疗作用与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 兔骨髓间充质干细胞的体外培养与细胞膜片的构建与鉴定 |
| 摘要 |
| 实验一 BMSCs的体外培养和鉴定 |
| 附图一 |
| 实验二细胞膜片的制备与鉴定 |
| 附图二 |
| 参考文献 |
| 第二部分 兔BMSC培养液上清液对角膜基质细胞影响的体外实验 |
| 摘要 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图三 |
| 参考文献 |
| 第三部分BMSC sheet对化学烧伤角膜的治疗作用与机制研究 |
| 摘要 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图四 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 致谢 |
四、自体角膜缘移植对角膜血管新生抑制作用的实验研究（论文参考文献）
- [1]102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察[D]. 张红超. 扬州大学, 2021
- [2]含LSCs的原代角膜缘上皮细胞片自体移植对犬大面积角膜损伤的疗效研究[D]. 吴艳菊. 扬州大学, 2021
- [3]维生素C对小鼠角膜碱烧伤修复作用的实验研究[D]. 陈祖凤. 南京医科大学, 2020(07)
- [4]卡替洛尔对大鼠角膜新生血管抑制作用的实验研究[D]. 马进海. 兰州大学, 2020(01)
- [5]角膜缘基质微环境细胞对体外培养的口腔黏膜上皮细胞的影响[D]. 段朝野. 华中科技大学, 2019(03)
- [6]皮质类固醇激素眼液治疗严重角膜碱烧伤的临床疗效[D]. 杜圆圆. 广西医科大学, 2019(08)
- [7]PMMA-硅胶夹持型人工角膜的动物实验研究[D]. 孙恒. 昆明医科大学, 2019(05)
- [8]羊膜对角膜损伤的治疗作用及其机理研究[D]. 郭庆. 哈尔滨工业大学, 2017(01)
- [9]兔骨髓间充质干细胞膜片对角膜化学烧伤的治疗作用与机制研究[D]. 袁晔. 第二军医大学, 2015(07)
- [10]中国实用眼科杂志2012年第30卷主题词索引[J]. 中国医科大学医学信息学系. 中国实用眼科杂志, 2012(12)