一、EXPRESSION EFFECT OF (-CHO) AFTER LONG-TERM TREATMENT OF OPIATES AND THE RELATIONSHIP WITH MITOCHNDRIAL MEMBRANE POTENTIAL IN P[C12 CELLS（论文文献综述）
曹[1]（2021）在《基于ROS-MAPK-线粒体途径探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制》文中认为少弱精子症（Oligozoospermia and Asthenozoospermia,OAZS）主要表现为精子密度和精子活力的下降,约占男性不育的50%～75%,是引起男性不育的重要原因之一。各种因素如不良生活方式、精索静脉曲张、系统疾病、遗传变异、激素异常、环境污染等都会不同程度地影响男性的生殖功能,且它们之间常常共存,导致精液中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生和精浆中抗氧化能力之间的动态平衡失调,引起氧化应激损伤,降低精子质量水平。OAZS生殖系统内过多的氧自由基、高活性氧的状态可以看作是中医学“血瘀”证候的一种表现形式,而“肾虚”则是“血瘀”的重要病因,正如《医林改错》中记载:“元气即虚,必不能达于血管,血管无气必停留而为瘀”。因此贾金铭教授认为“肾虚血瘀”是导致OAZS的基本病机,并以补肾活血,填髓益精立法创制了补肾益精方（YJD）,临床应用多年,疗效确切,可显着提高精子密度、精子活力及正常形态率等。本研究采用网络药理学与数据挖掘技术分析YJD的潜在药理机制,并以环磷酰胺复制的OAZS小鼠模型和体外培养的Leydig细胞及Sertoli细胞为载体,以ROS-OS-p38MAPK-线粒体途径为研究主线,探讨YJD抑制氧化应激损伤,提高精子质量的作用及机制。目的:传承创新名老中医学术经验,采用网络药理学方法探讨YJD治疗OAZS的作用机制,并通过体内外实验明确YJD抑制氧化应激损伤和细胞凋亡的作用,从ROS-OS-p38MAPK信号途径深入探讨其作用机制。方法:1 网络药理学分析:通过 TCMSP、Swiss Target Preduction、Pharm Mapper、UniProt、CTD、Genecards、String、David 等数据库;将 YJD12 种中草药采用MW≤500,AlogP≤10,Hdon≤5,HACC≤10,OB≥30%,DL≥0.18,CaCO-2≥-0.4七种仿制药原则筛选出这些成分中潜在的活性化合物及相对应的药物靶点,检索少弱精子症相关靶基因,两组交叉获取重合靶点,进行GO-BP及KEGG分析,从有效成分、潜在靶点、关键途径三个方面分析YJD治疗弱精子症的潜在药理机制。2动物实验:以环磷酰胺复制少弱精子症小鼠模型,通过睾丸--生精小管--睾丸间质细胞/支持细胞--线粒体--凋亡相关分子等多层次进行研究;采用ELISA、HE染色、细胞计数、流式分析、透射电镜、Western blot等手段,检测睾丸指数,生精小管形态及超微结构,血清TT、FT、LH、FSH,雄激素生成及利用相关蛋白 STAR、P450Scc、AR、ABP,睾丸/附睾组织ROS、MDA、SOD、GSH-Px,线粒体膜结构及功能,p38MAPK信号通路相关因子BAX、Bcl-2、Cyt-C、Caspase3等多纬度进行实验。3细胞实验:分别以TM3细胞（体外培养）和Sertoli细胞（原代提取）为研究对象,并制备YJD含药血清进行干预;采用siRNA干扰技术敲减目标基因p38MAPK,PCR检测敲减p38MAPK效率,CCK8检测细胞增殖情况,western blot检测敲减p38MAPK后相关指标的变化,从睾酮的合成分泌与利用两个方面进行实验。结果:1通过筛选,YJD12味中药共获得75个有效成分,对应190个潜在靶点;检索少弱精子症靶点共1125个（含少精子症713个,弱精子症412个）;两组交叉获得重合靶点30个;对30个重合基因进行拓扑分析,共获得9个核心指标:MAPK1、AR、ESR1、AKT1、MAPK8、EGFR、MMP9、PTGS2 和 MAPK14。30个重合靶点富集分析主要涉及细胞对脂质、有机化合物、有毒物质、活性氧、类固醇激素的反应;细胞对激素刺激、氧化应激、外界刺激、炎症反应的反应;及生殖系统/结构调节等生物学过程;及MAPK信号通路、胰岛素信号通路、TNF信号通路、雌激素信号通路、P53信号通路、神经营养蛋白信号通路、T细胞受体信号转导途径、cAMP信号通路及FoxO、VEGF等信号通路。2环磷酰胺建立少弱精子症模型小鼠的睾丸指数及体积减小（P<0.05,P<0.01）;精子密度和活力下降（P<0.01）;血清TT、FT水平下降（P<0.01）,血清FSH、LH水平增加（P<0.01）;睾丸及附睾组织中ROS、MDA含量明显增加（P<0.01）,SOD、GSH-Px含量减少（P<0.01）;生精小管结构紊乱;线粒体结构和功能下降;p38MAPK、Caspase3、BAX、Cyt-C蛋白表达水平增加（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2、STAR、P450scc、AR、ABP 蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）;给予YJD治疗后,OAZS模型小鼠睾丸指数无明显变化（P>0.05）,睾丸体积增加（P<0.01）;精子密度和活力增加（P<0.01）;血清TT、FT水平增加（P<0.01）,血清FSH、LH水平降低（P<0.01）;睾丸及附睾组织中ROS、MDA含量明显减少（P<0.01）,SOD、GSH-Px含量增加（P<0.01）;生精小管结构及线粒体结构和功能改善;p38MAPK、Caspase3、BAX、Cyt-C蛋白表达水平降低（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2、STAR、P450scc、ABP 蛋白表达水平增加（P<0.05,P<0.01）;AR蛋白水平无明显变化（P>0.05）。3 在敲减 TM3 细胞中 p38MAPK 后,p38MAPK、Caspase3、Cyt-C、STAR及P450scc蛋白水平表达量均明显下调（P<0.05）,BAX和Bcl-2蛋白相对表达量无明显变化（P>0.05）;以10%YJD含药血清干预细胞12h后,上述除Bcl-2上调外,其他指标蛋白表达水平再次出现明显下调（P<0.01）。在敲减Sertoli细胞中 p38MAPK 后,p38MAPK、Caspase3、Cyt-C、BAX 及 AR 蛋白水平表达量均明显下调（P<0.05）,ABP及Bcl-2蛋白相对表达量无明显变化;以10%YJD含药血清干预细胞12h后,p38MAPK、Caspase3、Cyt-C及BAX蛋白水平表达量再次明显下调（P<0.01）,Bcl-2蛋白相对表达量明显上调（P<0.05）,AR及ABP蛋白相对表达量无明显变化（P>0.05）。结论:补肾益精方（YJD）能够通过ROS/OS/p38MAPK-线粒体途径改善环磷酰胺制备少弱精子症（OAZS）小鼠模型,及Leydig细胞和Sertoli细胞模型的氧化应激（OS）损伤,改善线粒体结构及功能,从睾酮的分泌合成与利用等方面,促进精子发生和成熟,提高精子密度和活力,治疗少弱精子症。
尚沛[2]（2021）在《慢性酒精中毒诱导小鼠前额叶皮质内侧区线粒体形态改变和呼吸抑制的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理背景:酒精依赖是当前发达国家及发展中国家最常见的但尚未得到充分关注及有效治疗的精神心理疾病。依据第五次修订的《国际精神障碍疾病诊断和统计手册》标准,美国约有36%的男性及22.7%的女性达到酒精使用障碍（Alcohol use disorder,AUD）即慢性酒精中毒的诊断标准。近年来,AUD患者之间的性别差异逐渐缩小。AUD最常见的发病年龄为18-29岁,仅有少于15%的患者及时就医且患者接受治疗的平均年龄大于30岁。虽然以往有研究证明少量饮酒可以降低40-60岁男性心血管疾病的发病风险,然而这一论据仅适用于心血管疾病风险较高的发达国家,且饮酒带来的风险总体高于其对心血管的保护作用。前额叶皮质区可以控制多种行为功能,但极其容易受到酒精影响。既往研究表明,AUD小鼠模型可出现工作记忆、认知功能和奖赏行为能力下降等前额叶皮质内侧区（medial prefrontal cortex,mPFC）功能损伤相关行为学改变。灵长类动物的研究表明,前额叶皮质区线粒体功能受损会导致灵长类动物出现工作记忆下降。AUD患者的功能核磁成像和正电子发射断层扫描成像结果表明,患者mPFC中出现神经纤维束的投射及结构异常。相比于其他皮质区,mPFC因频繁的神经冲动传导产生了较高的能量需求,故而其区域内线粒体含量较高。因此,本实验拟通过对AUD小鼠模型mPFC中线粒体结构及功能的研究探讨AUD的发病机制及相关行为学障碍的分子生物学机制。目的:明确AUD小鼠mPFC中出现的线粒体氧化磷酸化功能障碍,观察AUD小鼠模型mPFC中线粒体形态的改变以及功能特征,并通过分子生物学实验对线粒体形态与功能的改变相关蛋白的表达进行探究。同时,利用行为学实验衡量AUD小鼠mPFC相关的认知功能,空间记忆及工作记忆能力的改变。方法:选用Jackson实验室购买的6周龄C57BL/6J小鼠,随机分为AUD组与对照组并进行2周预适应。首先,利用4周的间断性酒精蒸汽暴露结合腹腔注射1.5 g/kg乙醇溶液建立小鼠AUD模型,8h戒断后,通过旷场实验、水平杆实验、新物体识别测试及Y迷宫自发转向实验评价各组小鼠的随意及协调运动功能、认知功能及工作记忆。同时,利用串行块面扫描电子显微镜连续扫描小鼠前扣带回皮质区（Anterior cingulate cortex,ACC）的线粒体,通过Amira三维重建和R-construct软件分析记录各组小鼠线粒体的形态结构相关的参数。随后,应用Seahorse-XF96分析仪测试mPFC中分离线粒体的呼吸功能。最后,通过免疫蛋白印记（Western blotting,WB）、逆转录定量聚合酶链式反应（Reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）和免疫荧光染色对mPFC中的线粒体分裂及融合蛋白含量进行测定。结果:1.线粒体的形态结构:AUD组的小鼠最终尾静脉血浆酒精平均浓度为219.72mg/dl。AUD组小鼠mPFC中ACC区线粒体形态显示为串珠状线性排列（Mitochondria on a string,MOAS）。AUD组ACC区线粒体长度显着高于对照组（9.355±1.67μm Vs.3.938±0.3161μm,t（12）=3.677,P<0.05）。AUD组ACC区平均线粒体末端数目明显少于对照组（t（12）=0.1702,P>0.05）。然而,AUD组ACC区线粒体的容量与对照组未见显着差异（t（12）=0.1702,P>0.05）。2.离体线粒体Seahorse功能测试:AUD组小鼠mPFC区线粒体整体呼吸功能降低,其中包括:基础呼吸值降低（t（9）=2.584,P<0.05）,ATP合成解耦联后的最大呼吸速率（StateⅢu）降低（t（9）=2.373,P<0.05）,非氧化磷酸化相关的质子漏驱动的呼吸功能（StateⅣo）降低（t（9）=2.796,P<0.05）,然而ATP合成依赖的呼吸功能（State III）保持正常（t（9）=1.958,P>0.05）。3.线粒体分裂及融合相关蛋白表达:WB结果表明,与对照组相比,AUD组小鼠mPFC中线粒体分裂蛋白Fis1含量显着升高（t（6）=4.333,P<0.01）,但Drp1水平保持不变（t（6）=0.9853,P>0.05）。同时,AUD组小鼠mPFC中线粒体融合蛋白Mfn2含量显着降低（t（6）=3.331,P<0.05）,但OPA1水平保持不变（t（6）=0.6933,P>0.05）,重复多次实验结果不变。RT-q PCR结果表明,AUD组小鼠的mPFC中中分裂蛋白Fis1表达上升（t（4）=4.655,P<0.01）,但融合蛋白OPA1（t（4）=5.560,P<0.01）及Mfn2（t（4）=5.783,P<0.01）表达显着降低。最后,免疫荧光染色结果进一步验证了AUD组小鼠mPFC中中分裂蛋白Fis1的表达增强。4.工作记忆、认知及运动功能评估:与对照组相比,AUD组小鼠工作记忆能力（t（20）=2.977,p<0.01）及认知功能（t（28）=3.364,p<0.01）均显着降低,但随意运动功能（运动时间,平均速度,休息时间等）及协调运动功能（协调运动评分）未见显着差异（p>0.05）。结论:1.慢性酒精中毒可以引起小鼠mPFC中线粒体形态呈现MOAS样形态学变化。2.慢性酒精中毒可以引起小鼠mPFC中线粒体氧化磷酸化功能障碍,氧化呼吸链及电子传递链的正常功能受到抑制,线粒体复合物I途径介导的呼吸功能降低。3.慢性酒精中毒可以引起小鼠mPFC中线粒体融合蛋白Mfn2表达降低,线粒体分裂蛋白Fis1表达升高;融合及分裂蛋白含量的改变可能为线粒体形态改变的诱导机制。4.慢性酒精中毒可以使小鼠的工作记忆及认知功能显着降低,但其随意运动功能及协调运动功能不受影响。
张微[3]（2021）在《新精神活性物质4-甲基乙卡西酮在神经细胞中的毒性机制研究》文中提出4-甲基乙卡西酮（4-MEC）属于卡西酮类新精神活性物质,长期滥用会造成神经细胞毒性。已有研究表明金属离子可能参与精神活性物质相关的调控网络,但是关于金属离子如何参与到4-MEC引起的神经细胞毒性机制的研究却鲜有报道。本论文首先通过CCK-8检测发现4-MEC会引起人和小鼠神经类细胞SH-SY5Y和HT22的生长抑制。在此基础上,选择人源SH-SY5Y细胞为实验模型,通过荧光显微、流式和Western Blot技术发现4-MEC通过诱导细胞发生自噬和G0/G1期细胞周期阻滞来发挥生长抑制作用。接下来,我们开展了金属组学的研究,通过ICP-AES检测4-MEC对SH-SY5Y细胞中钾、钠、铁、钙、镁、锌和铝七种重要金属离子含量的影响,发现4-MEC处理后显着增加了细胞钙和镁的含量,Q-PCR和Western Blot技术检测了 4-MEC对钙和镁转运相关的基因/蛋白的表达水平的改变。Fluo-3流式检测进一步证实4-MEC处理增加了胞内钙离子水平。钙离子螯合剂EGTA可以减弱4-MEC引起的细胞毒性和胞内钙离子增高,缓解了 4-MEC诱导的细胞自噬和G0/G1周期阻滞,表明4-MEC通过引起钙离子增加造成细胞自噬和G0/G1周期阻滞来发挥细胞毒性。激光共聚焦技术发现4-MEC引起了胞内钙离子存储库线粒体和内质网中钙离子的超载,造成线粒体膜电位紊乱、活性氧增加和内质网应激。EGTA/N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）处理缓解了 4-MEC造成线粒体膜电位紊乱、活性氧增加和内质网应激,说明4-MEC处理增加的胞内钙离子造成了内质网应激和线粒体功能紊乱。NAC减弱了 4-MEC引起的内质网应激,说明4-MEC通过增加的胞内钙离子来诱导的活性氧增加是内质网应激的压力源,而内质网应激抑制剂4-苯基丁酸减弱了 4-MEC引起的自噬,说明内质网应激介导了自噬的发生,以上数据表明Ca2+-ROS-ER stress-Autophagy可能是4-MEC发挥毒性作用的模式之一。最后,利用蛋白质组学技术研究了 4-MEC对SH-SY5Y细胞中蛋白表达的影响,发现4-MEC处理后,8种蛋白表达量发生了明显改变,HSPA5、GAPDH和PGAM1表达量增加,ATP5A1、GSR、TALDO1、MED30和TIMM13的表达量减少。其中HSPA5与内质网应激相关,ATP5A1、MED30和TIMM13与线粒体功能相关,GSR和TALDO1与氧化应激相关,进一步证实了 4-MEC引起的上述神经细胞毒性作用模式。综上,4-MEC通过诱导细胞内钙离子水平升高介导G0/G1期阻滞和ROS-ER stress-Autophagy信号通路发挥神经细胞毒性作用;NAC可能是治疗4-MEC引起细胞毒性的潜在手段。本研究为卡西酮类新精神活性物质的毒性机制及干预提供了分子基础。
熊伟[4]（2021）在《肥大细胞参与右美托咪定心脏保护效应的炎性调控机制研究》文中研究表明第一部分右美托咪定在体外循环心脏瓣膜置换术中的心脏保护效应:随机对照双盲研究[目的]探讨右美托咪定在体外循环心脏瓣膜置换术中的心脏保护作用。[方法]选取择期体外循环下行主动脉瓣或二尖瓣机械瓣膜置换术的40例成年患者,随机对照双盲分为2组（N=20例/组）,对照组（CON组）给予等体积0.9%氯化钠注射液持续泵注;右美托咪定组（DEX组）在麻醉诱导前10 min内予以右美托咪定1 μg/kg负荷量,然后0.5μg/kg/h持续泵注至术毕。统计两组患者的一般资料。观察注射负荷量药物、切皮、锯开胸骨前后SBP及HR变化情况,注射负荷量药物后高血压、低血压和严重心动过缓发生率,血管活性药物使用情况,以及术后主要心血管不良事件（PMACE）发生率。在术前和术后检测血常规,在术前、停机时、术毕和出ICU时检测患者外周血中cTnI和TPS浓度。采用多元logistic回归分析术后cTnI、TPS和NLR预测PMACE的准确性。[结果]两组患者间一般资料无统计学差异（P>0.05）。注射负荷量药物后,SBP和HR变化率DEX组高于CON组;但切皮和锯开胸骨后,SBP和HR变化率DEX组低于CON组（P<0.05）。DEX组较CON组的高血压和严重心动过缓发生率高,而低血压发生率低（P<0.05）。去氧肾上腺素使用率和多巴胺使用量,DEX组低于CON组;而阿托品使用率,DEX组高于CON组（P<0.05）。DEX组的低心排综合征和恶性心律失常发生率较CON组低（P<0.05）。与CON组比较,DEX组在停机时、术后即刻和出ICU前的外周血中cTnI和TPS的浓度降低（P<0.05）,且 cTnI 和 TPS 呈正相关（R2>0.9）。NEUT、MONO 和 WBC绝对值变化率DEX组高于CON组,而LYMPH绝对值和NLR变化率DEX组低于CON组（P<0.05）。单独使用NLR、TPS和cTnI预测PMACE具有较高准确性（AUC分别为0.831、0.833和0.848）。另外,联合使用NLR、TPS和cTnI构建多元回归模型用于预测PMACE可以提高预测的准确性,其中联合cTnI和NLR,TPS 和 NLR,cTnI、TPS 和 NLR 的 AUC 分别为 0.902、0.892和 0.895。[结论]右美托咪定治疗体外循环下心脏瓣膜置换术患者可抑制切皮和开胸刺激,减少术中血管活性药物使用率和术后心血管不良事件发生率,降低术后cTnI、TPS和NLR,联合cTnI、TPS和NLR在预测PMACE中具有一定准确性。第二部分右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒对抗大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤[目的]探讨右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒对抗大鼠在体心肌缺血/再灌注（Ischemia/reperfusion,I/R）损伤（Myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI）的保护机制。[方法]采用结扎冠状动脉左前降支30min（缺血）和再通120min（再灌注）构建大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型,分别予以右美托咪定和肥大细胞促分泌剂C48/80处理。在体预实验分为五组（N=6只/组）,Sham组、MIRI组、Group Ⅰ 组（C48/80 0.1 mg/kg.i.v.）、Group Ⅱ 组（C48/80 0.5mg/kg.i.v.）和 GroupⅢ组（C48/80 1 mg/kg.i.v）。在体正式实验分为五组（N=12只/组）,Sham组、I/R 组、DEX+I/R 组（DEX20 μg/kg.i.v.）、C48/80+I/R 组（C48/800.5 mg/kg.i.v.）和 DEX+C48/80+I/R 组（DEX 20 μg/kg.i.v.+C48/80 0.5 mg/kg.i.v.）。观察术中血流动力学和心律失常,以及术后左心室功能改变,并采用TTC法、ELISA法、透射电镜、HE染色、甲苯胺蓝和TUNEL染色,以及免疫组化染色、QRT-PCR和Western blot进行检测。[结果]结扎冠状动脉左前降支缺血30 min和再灌注120 min成功构建大鼠在体MIRI模型,C48/80在一定范围内（0.1、0.5、1.0mg/kg.i.v.）可以加重I/R损伤,且呈剂量依赖性。与Sham组比较,I/R组术中血流动力学紊乱和心律失常严重程度评分明显升高,术后左心室功能障碍和心肌梗死面积比明显增加,cTnl和TPS含量明显升高;而这些损伤在C48/80+I/R组中明显加重,在DEX+I/R组中明显减轻（P<0.05）。另外,I/R组较Sham组病理组织学评分和肥大细胞脱颗粒比明显升高,心肌纤维波状扭曲、水肿,炎性细胞浸润,左室心肌和冠状动脉超微结构明显损伤,在右美托咪定预处理后有所改善,但C48/80可以加重这种损伤。然而,这些损伤在DEX+C48/80+I/R组中较C48/80+I/R组部分逆转。与Sham组比较,I/R组细胞凋亡率升高,心肌组织中HMGB1、TLR4和NF-κB p65的阳性细胞率、mRNA和蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）。与I/R组比较,DEX+I/R组中这些改变被部分逆转,而C48/80+I/R组中加剧了这些改变（P<0.05）。另外,DEX+C48/80+I/R组中较C48/80+I/R组细胞凋亡率和HMGB1、TLR4和NF-κBp65表达水平明显降低（P<0.05）。[结论]右美托咪定预处理可能通过抑制肥大细胞脱颗粒,抑制炎性相关因子级联释放和心肌细胞凋亡,从而对抗大鼠在体I/R损伤。第三部分右美托咪定预处理抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒减轻大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤[目的]探讨右美托咪定预处理抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒减轻大鼠离体MIRI的保护机制。[方法]采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型停止灌注30 min（全心缺血）和复灌60 min（再灌注）构建大鼠心脏离体MIRI模型。离体预实验分为五组（N=6 只/组）,Control 组、MIRI 组、GroupⅠ 组[（C48/80 1 μg/mL×5 min+KHB × 5 min）× 4]、Group Ⅱ 组（C48/80 1 μg/mL × 5 min+KHB × 5 min）和 GroupⅢ组（20 μg C48/80）。离体正式实验分为五组（N=12只/组）,Control组、I/R组、DEX+I/R 组（10 nM DEX × 30 min）、C48/80+I/R 组（C48/80 1 μg/mL × 5 min）和 DEX+C48/80+I/R 组（10 nM DEX × 30 min+C48/80 1μg/mL × 5 min）。观察血流动力学、心律失常和心肌水含量改变,并采用TTC法、ELISA法、透射电镜、HE染色、甲苯胺蓝和TUNEL染色,以及免疫组化染色、QRT-PCR和Western blot进行检测。[结果]大鼠离体心脏Langendorff灌流模型停止灌注30 min（全心缺血）和复灌60 min（再灌注）成功构建大鼠离体MIRI模型。离体预实验中Group I组中反复的C48/80干预洗脱,可改善MIRI引起的血流动力学紊乱、心律失常、心肌水肿和梗死,而Group Ⅱ和Group Ⅲ经短时程C48/80干预激发肥大细胞脱颗粒,可加重I/R损伤（P<0.05）。离体正式实验中,与Control组比较,I/R组血流动力学紊乱、心律失常、心肌水肿和梗死升高,cTnI和TPS含量升高（P<0.05）。I/R组较Control组病理组织学评分和肥大细胞脱颗粒比升高,心肌纤维波状扭曲、水肿,炎性细胞浸润,左室心肌和冠状动脉超微结构明显损伤。与Control组比较,I/R组细胞凋亡率升高,心肌组织中HMGB1、TLR4和NF-κBp65的阳性细胞率、mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）。上述改变在右美托咪定预处理后有所改善,但C48/80可以加重这种损伤;同时,DEX+C48/80+I/R组较C48/80+I/R组上述改变被部分逆转（P<0.05）。[结论]右美托咪定预处理可能通过抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒,抑制炎性相关因子级联释放和心肌细胞凋亡,从而对抗大鼠离体I/R损伤。第四部分 右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤[目的]探讨右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤的保护机制。[方法]构建大鼠心肌细胞H9C2（2-1）和大鼠肥大细胞RBL-2H3共培养体系,分别予以右美托咪定10 nM和肥大细胞促分泌剂C48/80 10 μg/mL预处理。实验分为三组（N=6孔/组）:S组（不予以任何药物处理）、C组（C48/8010μg/mL 干预 30 min）和 DC 组（10 nM DEX 预处理 60 min,然后 C48/80 10μg/mL干预30min）。倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪及TUNEL染色检测细胞凋亡率,ELISA法检测培养上清液中心肌损伤标志物cTnI和肥大细胞标志物TPS含量,细胞免疫组织化学染色、QRT-PCR和Western blot检测心肌细胞中HMGB1、TLR4和NF-κBp65的阳性细胞率、mRNA和蛋白的相对表达量。[结果]C组较S组的H9C2（2-1）和RBL-2H3细胞活性明显下降,细胞凋亡率明显升高,cTnI和TPS释放明显升高,而右美托咪定预处理后DC组可部分抑制（P<0.05）。另外,C组较S组的心肌细胞中HMGB1、TLR4和NF-κB p65的阳性细胞率、mRNA和蛋白相对表达量明显增加,而右美托咪定预处理后DC组中降低（P<0.05）。[结论]右美托咪定预处理可能通过抑制肥大细胞脱颗粒以及炎性相关信号通路HMGB1/TLR4/NF-κB,从而减轻肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤。
申振通[5]（2021）在《MetEnk对小鼠白脂棕色化和脂肪细胞线粒体功能的调节机制研究》文中研究表明脂肪组织是动物体内重要的内分泌器官,其代谢稳态也是机体能量代谢平衡的体现。线粒体功能的改善有利于白脂棕色化并能够促进生物体内能量代谢稳态;且线粒体结构与功能与多种生理过程密切相关,深入了解线粒体结构与功能及其调控机制,对优化家畜的养殖管理模式及相关疾病的预防具有重要意义。改善线粒体功能与促进棕色化将有助于调节代谢稳态,促进脂肪重塑,改善畜禽肉品质。甲硫氨酸脑啡肽（methionine enkephalin,MetEnk）是具有Tyr-Gly-Gly-Phe-Met序列的生物活性肽,易消化吸收,在生产中能够改善饲料的适口性,提高动物生产性能。研究发现,MetEnk能够调节机体能量代谢稳态,2型固有淋巴细胞（group 2 innate lymphoid cells,ILC2s）分泌的MetEnk能够直接与脂肪细胞作用并上调UCP1表达,恢复高脂饮食小鼠中受损的蛋白激酶A（protein kinases A,PKA）活性并改善代谢综合征,但MetEnk调节棕色化的具体分子机制,对线粒体功能的影响以及改善机体能量代谢稳态平衡的潜在机制尚不清楚。本研究利用皮下注射MetEnk处理小鼠,通过测序分析探究MetEnk对高脂诱导的小鼠代谢紊乱的影响,筛选出可能对白脂棕色化发挥作用的通路,并使用通路激活剂、抑制剂协同处理,检测白脂棕色化、脂代谢等相关基因的表达;探明MetEnk对机体能量代谢（棕色化、线粒体功能）以及炎症的调节作用,探明其分子机制;此外,本研究补充了MetEnk对高脂模型小鼠肝脏组织的脂代谢以及炎症的调节作用,为利用MetEnk调节机体能量稳态提供了一定的理论基础。具体试验结果如下:1.MetEnk能够改善高脂模型动物代谢紊乱。利用高脂饮食（high fat diet,HFD）构建小鼠代谢紊乱模型,使用10mg/kg bw,MetEnk皮下注射15天后,与HFD组小鼠相比,MetEnk处理后,小鼠体重显着下降（P<0.01）;MetEnk显着减小白色脂肪组织的细胞大小,小鼠棕脂含量得到提高（P<0.01）;此外,MetEnk可以有效降低小鼠血清中总胆固醇（P<0.01）、甘油三酯（P<0.01）含量,同时提高了高密度脂蛋白胆固醇含量（P<0.01）,有效改善血清脂质含量;而且MetEnk能够改善葡萄糖耐受性及胰岛素敏感性（P<0.01）。此外,MetEnk促进肝脏糖脂代谢,并通过My D88/TRAF6/NFk B通路改善肝脏炎症。从促脂质积累的基因（PPARg、Srebp1c、ACC及Fasn）转录和翻译水平观察得到,MetEnk处理后,m RNA表达显着降低（P<0.01）;脂质分解相关基因（PGC-1α、ATGL）表达上升。此外,MetEnk显着提高了Hep G2细胞AMPK通路的磷酸化水平（P<0.01）,抑制其脂质沉积,且补充MetEnk还显着降低了Hep G2细胞的ROS水平（P<0.01）,改善了棕榈酸（palmitic acid,PA）引发的肝脏细胞的氧化应激。2.MetEnk通过cAMP/PKA/HSL通路激活UCP1促进白脂棕色化和脂解作用。本试验通过转录组学分析:GO分析显示,这些差异表达基因涉及到TLR信号;GSEA分析发现,MetEnk引起棕色化和炎症基因发生变化。q PCR进一步验证RNA-seq的测试结果,结果显示,促进了UCP1,PGC-1α和Dio2等棕色化相关基因的表达（P<0.01）。此外,MetEnk显着促进了ATGL（P<0.05）,HSL（P<0.01）等脂分解基因的表达,显着抑制了ACC、Fasn的m RNA水平（P<0.05）;免疫印迹分析表明,MetEnk显着提高了PKA磷酸化水平并促进HSL表达（P<0.01）,表明MetEnk能够促进脂肪组织脂质分解代谢。KEGG结果显示,MetEnk处理后,cAMP途径显着富集,利用PA诱导脂肪细胞高脂模型;使用通路激活剂、抑制剂协同处理,发现MetEnk能够促进该通路相关蛋白表达。3.MetEnk改善线粒体功能和能量代谢稳态。实时定量荧光PCR以及免疫印迹分析显示,补充MetEnk,各组SDH、TFAM、COX4、Ndusf1、UCP2水平得到显着提高（P<0.01）,而且MetEnk能够促进了呼吸链复合物I、Ⅲ、V的表达。此外,MetEnk处理改善了PA诱导的脂肪细胞线粒体膜电势损失,提高了ATP含量与NAD+/NADH的比例,以及降低了ROS水平修复了PA诱导线粒体活性及功能损伤。本研究揭示出MetEnk能够缓解高脂饮食导致的代谢紊乱,促进脂肪组织脂质代谢,缓解肝脏的脂肪积累;证明了MetEnk可以改善线粒体功能,增强能量代谢稳态;阐明MetEnk通过cAMP/PKA/HSL通路激活UCP1促进白色脂肪棕色化,并调节My D88/TRAF6/NFk B通路抑制肝脏炎症;该研究结果为生物活性肽用于畜禽生产中脂代谢紊乱防治提供试验依据,并为深入研究脂代谢的可塑性调控以及肉品质改良提供理论基础。
赵鹏程[6]（2021）在《高颈段脊髓电刺激调控PI3K/AKT信号通路对颅脑损伤大鼠的神经功能障碍的影响及机制研究》文中指出目的:探讨高颈段脊髓电刺激（cervical spinal cord stimulation,cSCS）对颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）大鼠神经功能恢复的影响,并通过阻断PI3K/AKT信号通路来研究其可能的机制。方法:将72只SD大鼠随机分为4组:假手术组（sham组）、颅脑损伤模型组（TBI组）、模型+高颈段脊髓电刺激组（TBI+cSCS组）、阻断+模型+高颈段脊髓电刺激组（LY294002+TBI+cSCS组）,每组18只。除sham组外,其他各组均制作大鼠TBI模型。cSCS组于TBI模型后隔一天,给予电刺激,频率50 Hz,脉宽100μs,电流0.4-0.6 m A。每隔10 min进行2 min的SCS,总共30min,1次/d,连续7天。抑制剂组在大鼠行颅脑损伤前0.5h侧脑室注射10ul LY294002抑制剂。用改良的神经严重程度评分（m NSS）评估各组大鼠的神经功能障碍程度,用HE染色观察损伤区域脑组织结构病理变化,TUNEL染色观察细胞凋亡变化,用RT-PCR检测BDNF和VEGF m RNA表达含量,用Western blot检测p-AKT、AKT、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达情况。结果:1.神经功能障碍程度实验中,与sham组相比,TBI组在第3、7天的m NSS评分均明显升高（P<0.01）,与TBI组和抑制剂组相比,电刺激组在第3、7天的m NSS评分明显降低（F=5.516、21.000,P<0.01）。2.HE染色显示TBI组损伤区大脑周围皮质出现不同损伤,脑组织结构严重破坏,大量炎症细胞浸润,胞浆淡染,核出现空泡化,部分胞核体皱缩及神经元坏死。电刺激组显示上述病理现象好转,炎症细胞降低,脑组织破坏程度低,神经元细胞数量增加。PI3K抑制剂组较电刺激组加重,充血及出血灶明显,神经元坏死增加。3.TUNEL染色结果显示与sham组相比,TBI组中损伤区域脑组织中神经细胞的凋亡明显增加（P<0.01）;与TBI组相比,给予cSCS后损伤区域脑组织中神经细胞的凋亡明显减少（P<0.01）,而加PI3K抑制剂LY294002后,与cSCS组中相比,神经细胞凋亡增加（P<0.01）。4.RT-PCR结果显示,与sham组相比,TBI组BDNF和VEGF m RNA表达含量升高（P<0.01）;与TBI组和抑制剂组比较,电刺激组BDNF和VEGF m RNA表达含量升高（F=12.813、49.15,P<0.01）。5.Western blot结果显示,与sham组相比,TBI组中Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3表达水平升高（P<0.01）;与TBI组和抑制剂相比,电刺激组中Bcl-2蛋白表达水平上升（F=47.520,P<0.01）,Bax和Caspase-3的表达水平降低（F=144.268、175.784,P<0.01）。同时,在通路蛋白检测上,与sham组相比,TBI组p-AKT/AKT表达降低（P<0.01）;与TBI组和抑制剂组比较,电刺激组p-AKT/AKT表达升高（F=84.505,P<0.01）。结论:cSCS可能通过调控PI3K/AKT信号通路影响大鼠颅脑损伤后细胞凋亡和BDNF和VEGF的表达,进而改善大鼠的神经功能恢复。
魏桂林,何青青,金强,杨凌[7]（2020）在《线粒体损伤介导的药源性脏器损伤评价模型研究进展》文中研究说明线粒体是细胞的能量工厂,同时线粒体还参与细胞分化、维持细胞内环境平衡、细胞信息传递和调节细胞凋亡等过程。线粒体受到核DNA和线粒体DNA的双重调控,使得线粒体对于各种外源及内源性毒性物质更加敏感。药物破坏线粒体结构与功能可导致细胞坏死或凋亡。近年来研究发现多种脏器细胞线粒体是药物毒性作用的主要靶标之一,药物可通过多种途径致线粒体毒性,线粒体损伤是许多药物器官毒性反应早期的重要特征。本文主要综述常见的诱导不同器官线粒体毒性的临床药物并简要探讨药物介导线粒体毒性的机制。此外,我们还将重点讨论目前常用的线粒体毒性评价模型和评价技术,以期为预防和诊断药源性器官损伤提供思路。
杨二兰[8]（2020）在《马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱的合成及其抗哮喘和抗炎活性研究》文中进行了进一步梳理马齿苋（Portulaca oleracea L.）为马齿苋科一年生肉质草本植物,可药食两用,具有清热解毒、凉血止血、止痢的功效。现代药理研究表明马齿苋具有抗菌、抗炎、镇痛、镇静、抗哮喘、舒张骨骼肌、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老、神经保护等多方面活性。《本草经疏》言马齿苋“能散肺家之热”,以马齿苋为主药,佐以清热化痰之品,可治疗肺脓肿（肺痈）、肺炎、急慢性支气管炎、化脓性支气管炎、小儿百日咳、肺结核咳嗽、慢性咳嗽等肺系病证属痰热壅肺咳喘者,伊朗传统医药记载马齿苋可治疗哮喘等呼吸系统疾病。此外,临床试验及动物实验表明马齿苋具有抗哮喘作用。上述结果提示马齿苋具有抗哮喘应用基础,并具备发现抗哮喘创新药物的潜力,目前马齿苋平喘作用研究仅局限于水煮液,其激动β2-AR抗哮喘活性成分尚不明确,有待深入研究。一、马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱及其衍生物的合成及纯化本课题组前期发现马齿苋中一系列结构新颖的水溶性儿茶酚型异喹啉类生物碱,包括四氢异喹啉类生物碱（Tetrahydroisoquinolines,THIQs）,具有不同程度的体外激动β2-AR和抗炎双功能,推测其可能是马齿苋抗哮喘的潜在药效物质基础。然而,由于这些化合物从天然产物中提取分离所得含量通常很低,造成后续体内药理活性研究无法深入展开,化学合成方法成为制备儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱的关键手段。本文以盐酸多巴胺和醛为反应底物,采用条件温和的磷酸盐介导的Pictet-Spengler反应合成了马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉生物碱1、2、12及其系列衍生物,共14个化合物（1-14）,其中14为新化合物,除产物1、3、4、5、8、12、13外,其余7个生物碱均为首次通过磷酸盐介导的Pictet-Spengler反应仿生合成。由于现存分离纯化方法的局限性,从水溶性反应体系（含磷酸盐、维生素C以及未反应完全的盐酸多巴胺）中大量分离纯化水溶性儿茶酚型THIQs产物成为本实验面临的一个严峻挑战。本实验首次发现利用AB-8大孔吸附树脂柱色谱,首先采用水洗脱可除去磷酸盐和维生素C等水溶性成分,然后采用乙醇洗脱可实现目标THIQs与未反应完全的底物多巴胺的分离,从而制备得到纯化的THIQs。大孔吸附树脂柱色谱法为实现磷酸盐介导的水溶性儿茶酚型THIQs的高效分离纯化提供了一种简便、绿色、环保、通用的新方法。二、马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱抗哮喘活性研究本文利用稳定表达α1B-AR、β1-AR和β2-AR的CHO-K1/Gα15中国仓鼠卵巢细胞模型,分别以肾上腺素和异丙肾上腺素作为阳性激动药物,通过钙流检测,考察了马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱及本实验合成的衍生物在100 μM时对β2-AR的激动作用及其对α1B-AR、β1-AR和β2-AR的选择性,并探讨了构效关系。首次发现12具有很强的β2-AR激活作用,但其对β1-AR亚型亦具有较好的激动活性;化合物2及本课题组前期制备的马齿苋酰胺E（oleracein E,OE）为选择性β2-AR激动剂,其对α1B-AR、β1-AR的作用弱。在此基础上,本文利用磷酸组胺诱导的豚鼠离体气管螺旋条收缩模型,发现马齿苋中β2-AR激动剂12、2和OE能够剂量依赖性地舒张气管,其解痉百分率的EC50值分别为0.8、2.8和7.0 μM,12、2和OE在低浓度时的气管舒张作用可被β受体阻断剂盐酸普萘洛尔阻断。上述三个化合物按照摩尔比1:1:1混合时在低浓度范围内（0.01 μM～1 μM）可协同止痉,作用强于单个化合物,但在高浓度（大于1 μM）时可能产生竞争性抑制,提示马齿苋抗哮喘作用可能是儿茶酚型异喹啉类生物碱协同作用的结果。本文进一步利用超声雾化组胺诱导的豚鼠化学刺激性急性哮喘气道痉挛模型,发现12在10、20、40 mg/Kg时能剂量依赖性地显着延长豚鼠的引喘潜伏期（p<0.05,p<0.01,p<0.01）,而且抽搐跌倒的豚鼠只数呈剂量依赖性下降趋势。2仅在高浓度（40、80 mg/Kg）时能剂量依赖性地显着延长豚鼠的引喘潜伏期（p<0.01）,OE仅在高浓度（80、160mg/Kg）时能剂量依赖性地显着降低豚鼠的引喘潜伏期（p<0.05,p<0.01）,2和OE对豚鼠抽搐跌倒的只数影响很小或无作用。上述结果表明马齿苋中的儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱对组胺喷雾致豚鼠哮喘模型具有抗气道痉挛作用,其作用强弱依次为12>2>OE,与12、2、OE在组胺诱导的豚鼠离体气管螺旋条平滑肌收缩模型中的支气管舒张作用强弱一致。进一步地,本文利用卵白蛋白（OVA）诱导的过敏性哮喘小鼠气道炎症模型,发现12虽然有剂量依赖性降低血液中嗜酸性粒细胞的趋势,但各剂量组与OVA模型组相比均无显着性差异（p>0.05）。12仅在高剂量80 mg/Kg具有抗气道炎症作用,其显着降低了过敏性哮喘小鼠BALF上清液中IL-1β、IL-5、IL-13含量（p<0.05 或p<0.01）,分别降低了 34.64%、23.40%、37.63%,但对 BALF 中 TNF-α的含量无显着性影响（p>0.05）;中低剂量（5、20mg/Kg）的12无抗炎作用（p>0.05）。三、马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12和2对脂多糖诱导脓毒症小鼠模型的抗炎活性研究本文通过测定血浆中NO、IL-6以及TNF-α以及BALF中IL-6、TNF-α等炎性因子指标,进一步评价了马齿苋中具有平喘作用的儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12、2是否对LPS诱导脓毒症小鼠模型具有抗炎作用。结果表明,单剂量腹腔注射LPS会造成昆明小鼠眼睑分泌物增多、精神萎靡、活动减少,与空白对照组相比,两次造模的脓毒症小鼠模型血浆NO（p<0.05或p<0.0001）、TNF-α（p<0.0001）和 IL-6（p<0.0001）以及 BALF 上清液中 TNF-α（p<0.01）和 IL-6（p<0.01或p<0.05）炎性因子水平均显着升高。各剂量12组对脓毒症小鼠血浆NO的过量释放均无显着影响（p>0.05）。12仅在高剂量80 mg/Kg时显着降低了脓毒症小鼠血浆和 BALF 中 TNF-α（p<0.01,p<0.05）以及 IL-6（p<0.01,p<0.05）的含量,分别降低了 65.16%、56.54%、73.53%和54.75%;但中低剂量的12均无显着影响（p>0.05）。中低剂量的2对脓毒症小鼠血浆和BALF上清液中TNF-α和IL-6的含量均无显着影响（p>0.05）,2仅在高剂量（80 mg/Kg）显着降低了血浆和BALF中 TNF-α（p<0.01,p<0.05）以及 IL-6（p<0.05,p<0.05）的含量,分别降低了48.57%、54.62%、46.65%、62.09%。上述结果表明 12 和 2 在 80 mg/Kg 时对 LPS诱导的脓毒症小鼠具有一定抗炎作用。
王云芸[9]（2020）在《DRP1在局麻药神经毒性中作用及机制的研究》文中研究说明With the development of medicine,although general anesthesia has become the first choice of most surgical patients,but local anesthesia is still applied to date because of its many advantages,such as operating easily,keeping patients safe and awake,and fewer impacts on physiological function.In recent years,the concept of comfortable medical treatment and ERAS is gradually strengthening,as well as the ultrasound technology is more and more applied to clinical anesthesia,the safety and accuracy of regional block technology has greatly improved.Local anesthetics are more and more applied to clinical works,while the incidence of adverse reactions is also increasing.The potential neurotoxicity of local anesthetics has gradually attracted the attention of anesthesiologists.For the most of the adverse reactions of local anesthetics,such as hypersensitivity and cardiotoxicity,we all have prevention methods and treatment measures.But for the neurotoxicity,whose mechanisms are not clear now,we can only reduce the concentration of drugs without anyother effective measures.But reducing drug concentration can also reduce the effect of local anesthetics,so it is difficult to balance the risk and benefit.Even worse,the dysfunctions due to neurotoxicity are often characterized by severe symptoms and slow recovery.At present,there is no consensus on the mechanisms of neurotoxicity caused by local anesthetics,so it is very necessary to do some research.Objective:The mechanisms of neurotoxicity are not clear,at present,most of the studies show that the apoptosis is the pathological basis of neuron damage.Mitochondrial homeostasis plays an important role in endogenous mitochondrial pathway,which plays an important role in neuron apoptosis.Mitochondrial dynamic related protein 1（DRP1）is a key GTP enzyme regulating mitosis,and its abnormal activation is involved in the mitochondrial homeostasis.This study explores the role of DRP1,which is closely related to mitochondrial homeostasis,played in mechanisms of neurotoxicity caused by ropivacaine from cell level to animal level.It also reveals the regulatory mechanisms of DRP1 and its downstream signaling pathways.This study not only provides the experimental evidence for clarifying the mechanisms of neurotoxicity caused by ropivacaine,but also provides the intervention target for the clinical treatment of neurotoxicity and the development of new local anesthetics.Methods:（1）Part 1 experiment took SH-SY5 Y cells as the study object,which were divided into blank control group（Ctrl）and experimental groups.Ctrl group was a complete medium without ropivacaine,while the experimental groups all contained ropivacaine,whose concentration was set to 0.5,1,2,5 mM and stimulation time was set to 12,24,48 and 72 h.CCK-8 method was used to detect cell viability;The flow cytometry of annexin V-FITC/PI staining was used to to detect cell apoptosis rate;Mito tracker dye was used to label cell mitochondria and JC-1 dye was used to detect cell mitochondria membrane potential（MMP）;The expressions of related proteins were measured by Western Blot.At last,we construct a study cell model for neurotoxicity of ropivacaine in vitro culture.（2）Part 2 experiment established a cell model by using chemically modified siRNA oligo,which could interfer the expression of target gene,to reduce the DRP1.Ctrl group was normal SH-SY5 Y cells without ropivacaine for 24h;si-DRP1 group was SH-SY5 Y cells transfected by DRP1 siRNA,induced by 2 mM ropivacaine for24h;si-NC group was SH-SY5 Y cells transfected by control siRNA,induced by 2mM ropivacaine for 24 h.CCK-8 method was used to detect cell viability;The flow cytometry of annexin V-FITC/PI staining was used to to detect cell apoptosis rate;MMP,ROS and ATP were detected to determine the changes of mitochondrial function;The expressions of mRNA and related proteins were measured by qRT-PCR and Western blot.（3）Part 3 experiment divided 40 SPF-grade SD male rats into sham operation group and ropivacaine group.The animal model of neurotoxicity induced by ropivacaine was established through directly exposing the sciatic nerve of the right hind limb and injecting the required drugs.After nerve injection for 24 hours,the sciatic nerve tissue at the injection site was taken,then TUNEL method was used to detect the apoptosis of sciatic nerve;MMP,ROS and ATP were detected to determine the changes of mitochondrial function.Western blot and immunohistochemistry were used to detect the expression level of related proteins.Results:（1）The results of CCK-8 test showed that: the relative activity of SH-SY5 Y cells decreased to（83.20±3.21）%,（71.70±5.25）%,and（53.05±3.45）%,after being stimulated by ropivacaine at concentrations of 0.1,0.5,1,2,and 5 mM for 24 hours,and the differences were all significant（P<0.05）;while the relative activity of SH-SY5 Y cells decreased to（75.18±2.87）%,（63.25±2.25）%,（58.50±2.66）%and（48.15±3.65）%,after 12,24,48 and 72 hours of 2 mM ropivacaine stimulation,and the the differences were all significant（P<0.05）.（2）The apoptosis rate of Ctrl group was 2.70%,but the rate of other 4 groups after being stimulated by 0.1,0.5,1,2,and 5 mM ropivacaine for 24 hours,increased to 4.02%,8.75%,9.85% and 14.24%,and the differences were all significant（P <0.05）;The apoptosis rate of Ctrl group was 2.28%,while the rate of other 4experimental groups,after being stimulated by 2 mM ropivacaine for12,24 48,72 hours,increased to 4.80%,7.51%,9.10% and 13.08%,and the differences were all significant（P< 0.05）.（3）After induced with 2 mM ropivacaine for 24 hours,Mito tracker test showsed that the number of normal mitochondria decreased and the accumulation of ROS in cells increased.It suggested that ropivacaine might cause the abnormal function of SH-SY5 Y cells by oxidative stress.Accordingly,JC-1 test showed that the MMP of the SH-SY5 Y cells was reduced by ropivacaine significantly.Western Blot showed that the expression of Mfn11,Mfn2,DRP1 and Caspase-3 in SH-SY5 Ycells were all significantly increased after 24 h induction of ropivacaine.（4）After interfering with the expression of DRP1 in SH-SY5 Y cells,CCK-8test showed that the relative activity of si-NC group was（61.22±5.58）%,while si-DRP group was（89.65±6.87）%,and there was statistically significant difference between groups（P<0.01）.Similarly,the apoptosis rate of si-DRP group was（6.35±0.65）%,while the si-NC group was（9.13±0.64）%,and there were also statistically significant difference between groups（P<0.01）.（5）After interfering with the expression of DRP1 in SH-SY5 Y cells,controlled with Ctrl group,mitochondria in si-NC group changed as follows:the relative concentration of ROS was（290.27±12.98）%,ATP was（384.28±39.18）Um/g,MMP decreased to（85.07±8.76）%;While controlled with Ctrl group,mitochondria in si-DRP1 group changed as follows:the relative concentration of ROS was（204.44±12.98）%,ATP was 453.38±28.90 Um/g,MMP was（103.25±10.02）%.There were statistically significant differences about ROS,ATP and MMP between si-NC group and si-DRP1 group（P<0.01）.These results indicated that inhibition of DRP1 could restore mitochondrial dysfunction of SH-SY5 Y cells induced by ropivacaine.（6）Western Blot test showed that the expressions of DRP1,p-DRP1 and p-p38 MAPK were all decreased statistically significantly in si-DRP1 group controlled with si-NC group（P<0.01）.The expression of Caspase-3 of si-DRP1 group was also significantly different from that of si-NC group（P<0.05）.It suggested that the function changes of the mitochondria might be activated by the DRP1/p38 MAPK signaling pathway,which could also induce apoptosis.（7）In the animal model experiment,TUNEL test showed that the apoptotic rate of sciatic nerve cells in Sham group was（6.31± 1.23）%,while that in Ropi group was statistically significantly increased to（14.20±2.18）%（P<0.01）.Compared with Sham group,the ROS content,ATP content and mitochondrial membrane potential of the sciatic nerve tissue in Ropi group were all significantly changed（P<0.001）.The results of immunohistochemistry showed that the expression of DRP1 and the activation of p-P38 MAPK in the sciatic nerve tissue of the Ropi group increasedcompared with sham group;The Western Blot results further confirmed that the expression of DRP1,p-DRP1,P-P38 MAPK and Caspase-3,whose relative values were（87.23±19.20）%,（198.39±20.05）%,（310.82±25.52）% and（185.23±1.66）%,were all increased significantly in Ropi group compared with sham group（P<0.01）.Conclusions:1.Ropivacaine can cause mitochondrial dysfunctions and increase the expression of DRP1 in SH-SY5 Y cells.It can also inhibit the activity and increase the apoptosis rate significantly,and the changes show concentration and time dependence.We think that ropivacaine has neurotoxic effect on SH-SY5 Y cells.2.After interfering with the expression of DRP1 in SH-SY5 Y cells,the neurotoxic effect induced by ropivacaine changes as follows:the inhibition of the mitochondrial function reduces significantly,the activity of cells increases significantly,and the rate of apoptosis decreases significantly.It suggests that DRP1 plays an important role in the neurotoxic effect of ropivacaine on SH-SY5 Y cells.While the expression of DRP1 decreases,the expression of P-DRP1,p-p38 MAPK and Caspase-3 are also significantly decreased,we can assum that p38 MAPK is involved in the apoptosis of SH-SY5 Y cell induced by ropivacaine,and DRP1/p38 MAPK signaling pathway is involved and plays a key role in the neurotoxic effect of ropivacaine on SH-SY5 Y cells.3.Animal experiment,whose results are consistent with that of cell experiment,confirms that ropivacaine has neurotoxic effect and increases apoptosis rate significantly on sciatic nerve cell through DRP1/p38 MAPK signaling pathway.It also suggests that DRP1/p38 MAPK signaling pathway plays a key role in the neurotoxic effect of ropivacaine.It also provides the intervention target for the clinical treatment of neurotoxicity and the development of new local anesthetics.
冯凤喜[10]（2020）在《地氟醚复合丙泊酚对烟雾病血管重建术患者脑保护作用的研究》文中研究表明研究目的观察地氟醚和丙泊酚对行颞浅动脉-大脑中动脉（STA-MCA）分支吻合术的成人烟雾病患者脑氧供需、脑能量代谢、血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）、s100β蛋白及术后并发症的影响,探讨地氟醚和丙泊酚对烟雾病血管重建术患者的脑保护作用。资料与方法选取拟择期行颞浅动脉-大脑中动脉分支吻合术的烟雾病患者90例,年龄18-65 岁,美国麻醉医师协会（American Society of Anesthesiologists,ASA）分级Ⅰ-Ⅱ级,性别不限,BMI值18-25kg/m2。采用随机数字表法随机分为三组:丙泊酚组（P组）、丙泊酚复合地氟醚组（PD组）及地氟醚组（D组）,每组30例。P组丙泊酚恒速输注4-6mg·kg-1.h-1,PD组丙泊酚恒速输注2-3mg·kg-1·h-1,复合地氟醚2%-3%,D组吸入地氟醚4%-6%。三组均持续恒速输注瑞芬太尼0.1-0.3ug·kg-1·min-1,麻醉诱导均采用依托咪酯0.3mg/kg,舒芬太尼0.4-0.5ug/kg,和苯磺顺阿曲库铵0.15-0.2mg/kg。分别记录入室麻醉前（T1）、插管后15min时（T2）,手术开始30 min时（T3）、硬膜打开即刻（T4）、血管搭桥灌通时（T5）、手术结束时（T6）各点的平均动脉压（MAP）和心率（HR）,并在T2、T3、T4、T5及T6时同步采集桡动脉血和颈内静脉球部血样进行血气分析,计算颈内静脉球部血氧含量差（Da-jvO2）、脑氧摄取率（CO2ER）、脑葡萄糖摄取率（GluER）、乳酸生成率（LacPR）及乳酸氧指数（LOI）,记录手术时间、大脑中动脉阻断时间、患者术后住院天数、术后并发症的发生情况及术前、术后3个月改良Rankin量表评分（mRS）。用ELISA法测定T2、T6以及T7（手术结束后6h）三个时刻颈内静脉球部的血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）及S100β蛋白浓度值。结果三组患者年龄、体重、ASA分级、性别、手术侧、疾病类型、手术时间、大脑中动脉阻断时间、MAP、HR及BIS值比较差异无统计学意义（P>0.05）。组间比较:三组患者Da-jvO2在T2时比较差异无统计学意义（P>0.05）,在T3、T4、T5及T6时点,D组Da-jvO2水平低于P组,差异有统计学意义（P<0.05）,PD组与P组、D组Da-jvO2水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）;在T2、T3时点,三组患者CO2ER及SjvO2水平比较差异无统计学意义（P>0.05）,在T4、T5及T6时点,D组CO2ER水平低于P组,差异有统计学意义（P<0.05）,PD组与P组、D组比较差异均无统计学意义（P>0.05）,D组SjvO2水平高于P组,差异有统计学意义（P<0.05）,在T4、T5时刻PD组SjvO2水平高于P组,差异有统计学意义（P<0.05）,D组与PD组比较差异无统计学意义（P>0.05）。三组患者NSE及S100β蛋白在T2、T6、T7时比较差异无统计学意义（P>0.05）。组内比较:与T2比较,在T3、T4、及T6时点,D组患者Da-jvO2、CO2ER水平均降低,差异有统计学意义（P<0.05）,在T6时点,PD组患者Da-jvO2水平均降低,D组SjvO2升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与T3比较,在T4、T5时,P组SjvO2降低差异有统计学意义（P<0.05）,在T6时,D组患者Da-jvO2水平均降低,SjvO2升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与T4比较,在T6时点,P组SjvO2升高,CO2ER降低,D组、P组及PD组Da-jvO2均降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与T5比较,在T6时点,三组患者Da-jvO2、CO2ER水平均降低,P组和D组SjvO2升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与T2比较,在T6、T7时点,三组患者NSE及S100β蛋白水平均有所升高,差异有统计学意义（P<0.05）。三组患者各时间点SaO2、PaCO2、Hb、GluER、LacPR及LOI比较差异均无统计学意义（P>0.05）,术后并发症发生率、住院天数及mRS评分比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.地氟醚和丙泊酚均可安全用于烟雾病血管重建手术。2.地氟醚和丙泊酚均可维持良好的脑氧供需平衡状态和能量代谢平衡。与丙泊酚相比,地氟醚麻醉可更好地维持烟雾病患者脑血管重建术中脑氧供需平衡状态。3.地氟醚和丙泊酚对烟雾病血管重建术患者神经功能恢复的影响相近。
二、EXPRESSION EFFECT OF (-CHO) AFTER LONG-TERM TREATMENT OF OPIATES AND THE RELATIONSHIP WITH MITOCHNDRIAL MEMBRANE POTENTIAL IN P[C12 CELLS（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、EXPRESSION EFFECT OF (-CHO) AFTER LONG-TERM TREATMENT OF OPIATES AND THE RELATIONSHIP WITH MITOCHNDRIAL MEMBRANE POTENTIAL IN P[C12 CELLS（论文提纲范文）
（1）基于ROS-MAPK-线粒体途径探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药治疗少弱精子症的临床研究进展 |
| 1 少弱精子症的定义 |
| 2 病因病机 |
| 3 辨证论治 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 氧化应激对男性精子质量的影响及研究进展 |
| 1 精液中氧化应激的产生 |
| 2 氧化应激对精子质量的影响 |
| 3 氧化应激对精子发生的影响 |
| 4 抗氧化应激治疗策略 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第一部分 基于网络药理学探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 补肾益精方对环磷酰胺诱导少弱精子症小鼠模型的作用及抗氧化应激研究 |
| 前目 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 补肾益精方对p38MAPK沉默后TM3细胞凋亡信号的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 补肾益精方对p38MAPK沉默后Sertoli细胞凋亡信号的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件：YJD中药成分潜在靶点信息列表（共190个靶点） |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）慢性酒精中毒诱导小鼠前额叶皮质内侧区线粒体形态改变和呼吸抑制的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 酒精成瘾概述 |
| 1.2 AUD概述 |
| 1.2.1 AUD的流行病学 |
| 1.2.2 AUD的分子机制 |
| 1.2.3 AUD的治疗策略 |
| 1.3 线粒体在AUD模型中的研究 |
| 1.3.1 线粒体的基本呼吸功能 |
| 1.3.2 线粒体在神经系统疾病中的改变 |
| 1.3.3 线粒体与AUD的关系 |
| 1.4 AUD与AD的联系 |
| 1.5 展望 |
| 第2章 AUD体内模型建立及行为学研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 小鼠AUD模型的建立 |
| 2.3.2 小鼠AUD模型随意运动功能及协调运动功能无明显改变 |
| 2.3.3 小鼠AUD模型认知及工作记忆功能下降 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 串行块面扫描电镜观察AUD小鼠模型扣带回皮质中线粒体形态 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第4章 SEAHORSE呼吸功能测定衡量AUD小鼠MPFC中线粒体呼吸功能 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 确定适合Seahorse实验的线粒体,底物及复合酶抑制剂浓度 |
| 4.3.2 采用优化的线粒体、底物、ADP和线粒体呼吸抑制药物浓度对小鼠m PFC中线粒体进行功能测定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 第5章 AUD小鼠MPFC中线粒体融合及分离蛋白的改变 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.2.3 统计学分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 蛋白水平上AUD组小鼠m PFC中Fis1表达上调,Mfn2表达下调 |
| 5.3.2 转录水平上AUD小鼠m PFC中线粒体中分裂蛋白表达上升,融合蛋白表达下降 |
| 5.3.3 免疫荧光实验显示AUD小鼠m PFC中线粒体中分裂蛋白表达增强 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 结论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）新精神活性物质4-甲基乙卡西酮在神经细胞中的毒性机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 精神活性物质研究进展 |
| 1.1.1 精神活性物质简介 |
| 1.1.2 精神活性物质毒理机制研究 |
| 1.2 金属组学研究进展 |
| 1.2.1 金属组学简介 |
| 1.2.2 金属组学水平相关研究 |
| 1.3 蛋白质组学研究进展 |
| 1.3.1 蛋白质组学简介 |
| 1.3.2 蛋白质组学核心技术简介 |
| 1.3.3 蛋白质水平相关研究 |
| 1.4 常见细胞表型 |
| 1.5 研究目的和内容 |
| 第二章 4-MEC引起神经细胞毒性 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料及实验方法 |
| 2.2.1 实验细胞 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 实验试剂配制方法 |
| 2.2.5 实验方法 |
| 2.2.6 实验数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 4-MEC对神经类细胞产生毒性作用 |
| 2.3.2 4-MEC诱导SH-SY5Y细胞形态变化 |
| 2.3.3 4-MEC诱导SH-SY5Y细胞发生自噬 |
| 2.3.4 4-MEC诱导SH-SY5Y细胞发生G0/G1周期阻滞 |
| 2.3.5 4-MEC不诱导SH-SY5Y细胞凋亡的发生 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 钙离子参与4-MEC引起的神经细胞毒性 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料及实验方法 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 实验数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 4-MEC引起细胞钙和镁离子含量增加 |
| 3.3.2 4-MEC引起细胞钙和镁离子转运相关基因/蛋白表达变化 |
| 3.3.3 4-MEC引起细胞内游离钙离子含量增加 |
| 3.3.4 钙离子介导4-MEC引起的自噬与G0/G1周期阻滞 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 氧化应激/内质网应激参与4-MEC引起的细胞毒性 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料及实验方法 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 实验数据分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 4-MEC引起线粒体功能紊乱 |
| 4.3.2 钙离子参与了4-MEC引起的线粒体功能紊乱 |
| 4.3.3 NAC缓解4-MEC引起的细胞毒性和线粒体功能紊乱 |
| 4.3.4 4-MEC引起内质网应激 |
| 4.3.5 活性氧参与4-MEC引起的内质网应激 |
| 4.3.6 内质网应激参与4-MEC引起的自噬 |
| 4.3.7 NAC和4-PBA不影响4-MEC引起的G0/G1周期阻滞 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 蛋白质组学研究4-MEC对神经细胞的毒性机制 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料及实验方法 |
| 5.2.1 实验试剂 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.2.3 实验试剂配制方法 |
| 5.2.4 实验方法 |
| 5.2.5 实验数据分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 4-MEC引起SH-SY5Y蛋白差异表达 |
| 5.3.2 差异表达的蛋白点的质谱分析 |
| 5.3.3 差异蛋白点的相关生物学验证 |
| 5.3.4 差异表达蛋白的功能分析 |
| 5.3.5 差异蛋白的蛋白网络 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 课题结论 |
| 6.2 课题展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士研究生阶段论文发表情况 |
（4）肥大细胞参与右美托咪定心脏保护效应的炎性调控机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 序言 |
| 第一部分 右美托咪定在体外循环心脏瓣膜置换术中的心脏保护效应:随机对照双盲研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒对抗大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 右美托咪定预处理抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒减轻大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 综述 右美托咪定心脏保护作用的研究进展:从基础到临床 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）MetEnk对小鼠白脂棕色化和脂肪细胞线粒体功能的调节机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 MetEnk、线粒体功能以及白脂棕色化研究进展 |
| 1.1 MetEnk研究进展 |
| 1.1.1 MetEnk结构和受体 |
| 1.1.2 MetEnk功能研究进展 |
| 1.2 线粒体功能与白色脂肪棕色化研究进展 |
| 1.2.1 线粒体功能 |
| (1)线粒体与脂肪细胞能量代谢稳态 |
| (2)线粒体与白脂棕色化 |
| 1.2.2 白色脂肪棕色化的发生 |
| (1)白色脂肪棕色化的诱导因素 |
| (2)棕色化的调节因子 |
| 1.2.3 白色脂肪棕色化的潜在应用 |
| (1)白脂棕色化的临床应用 |
| (2)白脂棕色化与畜牧业 |
| 试验研究 |
| 前言 |
| 第二章 MetEnk干预高脂模型动物代谢紊乱的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 MetEnk对小鼠体重、采食量以及体成分的影响 |
| 2.2.2 MetEnk改善葡萄糖耐量与胰岛素抵抗以及血脂异常 |
| 2.2.3 MetEnk促进肝脏脂代谢通过My D88/TRAF6/NFk B通路改善肝脏炎症 |
| 2.2.4 MetEnk通过AMPK信号通路促进肝脏细胞脂代谢抑制脂肪沉积 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 MetEnk调节白色脂肪棕色化的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 MetEnk上调小鼠脂肪组织中棕色化相关基因 |
| 3.2.2 MetEnk促进小鼠白脂棕色化并改善脂肪组织脂质代谢 |
| 3.2.3 MetEnk通过c AMP/PKA/HSL通路激活UCP1 促进白脂棕色化 |
| 3.2.4 MetEnk促进脂肪细胞棕色化与脂质代谢 |
| 3.2.5 MetEnk降低高脂模型动物脂肪组织炎症 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 MetEnk改善线粒体功能与能量代谢稳态的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 MetEnk改善白色脂肪组织线粒体生物合成及功能 |
| 4.2.2 MetEnk促进脂肪细胞线粒体生物合成 |
| 4.2.3 MetEnk促进脂肪细胞ATP合成降低氧化应激改善线粒体功能 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论、创新点、进一步研究内容 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.进一步研究内容 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）高颈段脊髓电刺激调控PI3K/AKT信号通路对颅脑损伤大鼠的神经功能障碍的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验仪器和试剂 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 建立动物模型 |
| 2.4 神经功能评分 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 TUNEL染色 |
| 2.7 荧光定量PCR检测损伤区域脑组织BDNF和 VEGF m RNA表达 |
| 2.8 Western blot检测p-AKT、AKT、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达情况 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 行为学结果 |
| 3.2 HE染色结果 |
| 3.3 TUNEL染色结果 |
| 3.4 RT-PCR检测损伤区域脑组织BDNF和VEGF mRNA表达含量的结果 |
| 3.5 体外western blot检测损伤区域脑组织AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 神经电刺激治疗脑损伤后意识障碍的研究进展 |
| 参考文献 |
（7）线粒体损伤介导的药源性脏器损伤评价模型研究进展（论文提纲范文）
| 1 线粒体结构与功能 |
| 2 线粒体损伤模式及机制 |
| 3 药源性线粒体毒性 |
| 3.1 非甾体抗炎药 |
| 3.2 抗菌药 |
| 3.3 抗逆转录病毒药物 |
| 3.4 抗癌药 |
| 3.5 麻醉药 |
| 3.6 降血脂药 |
| 3.7 抗糖尿病药 |
| 3.8 抗癫痫药 |
| 3.9 抗精神病药 |
| 3.10 抗抑郁药 |
| 4 线粒体毒性与脏器损伤 |
| 4.1 线粒体损伤致肝毒性 |
| 4.2 线粒体损伤致肾毒性 |
| 4.3 线粒体损伤致心毒性 |
| 5 线粒体毒性评价模型 |
| 5.1 离体线粒体 |
| 5.2 活细胞水平 |
| 5.3 体内评估体系 |
| 6 线粒体毒性评价技术 |
| 6.1 荧光成像技术 |
| 6.2 生化技术 |
| 6.3 细胞能量代谢 |
| 6.4 代谢组学分析技术 |
| 6.5 电镜 |
| 7 结论与展望 |
（8）马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱的合成及其抗哮喘和抗炎活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 四氢异喹啉类生物碱的生物活性研究进展 |
| 1.1.1 抗肿瘤活性 |
| 1.1.2 抗病原微生物活性 |
| 1.1.3 抗炎作用 |
| 1.1.4 激动β_2肾上腺素受体和扩张支气管作用 |
| 1.1.5 中枢神经系统作用 |
| 1.1.6 治疗糖尿病 |
| 1.2 本课题立题依据与研究内容 |
| 1.2.1 哮喘等气道慢性炎症性疾病是危害人类健康的常见病和多发病 |
| 1.2.2 扩张支气管和抗炎是治疗哮喘等气道慢性炎症性疾病的两大策略 |
| 1.2.3 肾上腺素受体概况及β_2-AR激动剂扩张支气管的作用机制 |
| 1.2.4 马齿苋具有治疗哮喘等呼吸系统炎症疾病的应用基础,其激动β2-AR抗哮喘活性成分有待深入研究 |
| 参考文献 |
| 第二章 马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱及其衍生物的合成及纯化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 实验步骤 |
| 2.4.1 儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱(1-14)的合成 |
| 2.4.2 儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱(1-14)的分离纯化 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱(1-14)的合成 |
| 2.5.2 化合物结构鉴定 |
| 2.5.3 AB-8大孔吸附树脂柱色谱法制备儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱的洗脱工艺研究 |
| 2.6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱抗哮喘活性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱及其衍生物对肾上腺素受体的活性筛选及其构效关系研究 |
| 3.2.1 实验原理 |
| 3.2.2 实验步骤 |
| 3.2.3 实验结果 |
| 3.3 马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12、2以及OE对组胺诱导豚鼠离体气管平滑肌收缩模型的影响 |
| 3.3.1 实验动物 |
| 3.3.2 仪器 |
| 3.3.3 试剂 |
| 3.3.4 主要试剂的配制 |
| 3.3.5 实验步骤 |
| 3.3.6 实验结果 |
| 3.4 马齿苋提取液(WEAPS)以及儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12、2、OE对组胺致豚鼠哮喘模型气道痉挛的影响 |
| 3.4.1 实验步骤 |
| 3.4.2 数据处理 |
| 3.4.3 实验结果 |
| 3.5 儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12对卵白蛋白诱导过敏性哮喘小鼠模型气道炎症的影响 |
| 3.5.1 实验动物 |
| 3.5.2 仪器 |
| 3.5.3 试剂 |
| 3.5.4 实验溶液配制 |
| 3.5.5 动物分组及给药 |
| 3.5.6 小鼠血液、支气管肺泡灌洗液的制备 |
| 3.5.7 小鼠BALF上清液TNF-α含量测定 |
| 3.5.8 小鼠BALF上清液IL-1β含量测定 |
| 3.5.9 小鼠BALF上清液IL-5含量测定 |
| 3.5.10 小鼠BALF上清液IL-13含量测定 |
| 3.5.11 数据处理 |
| 3.5.12 实验结果 |
| 3.6 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12和2对脂多糖诱导脓毒症小鼠模型的抗炎活性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 仪器 |
| 4.2.3 试剂 |
| 4.3 实验内容 |
| 4.3.1 试剂配制 |
| 4.3.2 动物分组及给药 |
| 4.3.3 小鼠血浆、支气管肺泡灌洗液的制备 |
| 4.3.4 小鼠血浆一氧化氮含量测定 |
| 4.3.5 小鼠血浆TNF-α含量测定 |
| 4.3.6 小鼠血浆IL-6含量测定 |
| 4.3.7 小鼠BALF上清液TNF-α含量测定 |
| 4.3.8 小鼠BALF上清液IL-6含量测定 |
| 4.4 数据处理 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.5.1 儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱12对LPS诱导脓毒症小鼠的影响 |
| 4.5.2 儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱2对LPS诱导脓毒症小鼠的影响 |
| 4.6 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士研究生期间发表的论文 |
| 附录 |
| 附录1: 第二章附表 |
| 附录2: 第三章附表 |
| 附录3: 第四章附表 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（9）DRP1在局麻药神经毒性中作用及机制的研究（论文提纲范文）
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 局麻药物的应用 |
| 2.2 局麻药物的不良反应 |
| 2.2.1 全身不良反应 |
| 2.2.2 心脏毒性反应 |
| 2.2.3 细胞毒性反应 |
| 2.2.4 神经毒性反应 |
| 2.3 局麻药物的神经毒性 |
| 2.3.1 神经毒性的影响因素 |
| 2.3.2 神经毒性相关理论背景 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 罗哌卡因神经毒性的细胞实验研究 |
| 3.1 材料和仪器 |
| 3.1.1 主要试剂和材料 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养和分组 |
| 3.2.2 CCK-8 法检测细胞活力 |
| 3.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 3.2.4 JC-1 探针检测线粒体膜电位 |
| 3.2.5 线粒体Mito Tracker荧光染色 |
| 3.2.6 Western Blot(免疫印迹) |
| 3.2.7 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 罗哌卡因对细胞活力的影响 |
| 3.3.2 罗哌卡因对细胞凋亡的影响 |
| 3.3.3 罗哌卡因对线粒体功能的影响 |
| 3.3.4 罗哌卡因对线粒体膜电位的影响 |
| 3.3.5 罗哌卡因对细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 DRP1 信号通路在神经毒性机制中的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂和材料 |
| 4.1.2 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养和分组 |
| 4.2.2 细胞转染 |
| 4.2.3 CCK-8 法检测细胞活力 |
| 4.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 4.2.5 JC-1 探针检测线粒体膜电位 |
| 4.2.6 细胞中ROS的检测 |
| 4.2.7 细胞中ATP浓度测定 |
| 4.2.8 Western Blot |
| 4.2.9 实时荧光定量PCR(Realtime PCR) |
| 4.2.10 细胞免疫荧光 |
| 4.2.11 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 构建DRP1 表达下调的细胞模型 |
| 4.3.2 DRP1 表达下调对细胞活力和凋亡的影响 |
| 4.3.3 DRP1 表达下调对线粒体功能的影响 |
| 4.3.4 DRP1 表达下调对相关蛋白的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 罗哌卡因神经毒性的动物实验研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要试剂和材料 |
| 5.1.2 主要仪器设备 |
| 5.1.3 实验动物 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 实验动物分组和建模 |
| 5.2.2 大鼠行为学观察 |
| 5.2.3 组织采集 |
| 5.2.4 ROS的检测 |
| 5.2.5 线粒体膜电位的检测 |
| 5.2.6 ATP浓度测定 |
| 5.2.7 组化前处理 |
| 5.2.8 TUNEL检测 |
| 5.2.9 免疫组化 |
| 5.2.10 Western Blot |
| 5.2.11 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 实验动物一般状况 |
| 5.3.2 各组大鼠后肢PWL和 EPT的比较 |
| 5.3.3 各组大鼠坐骨神经细胞凋亡变化 |
| 5.3.4 各组大鼠坐骨神经元线粒体功能变化 |
| 5.3.5 各组大鼠坐骨神经相关蛋白表达水平比较 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6章 结语 |
| 6.1 本课题的结论 |
| 6.2 本课题的创新点 |
| 6.3 不足之处和待深入研究的问题 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）地氟醚复合丙泊酚对烟雾病血管重建术患者脑保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 烟雾病患者围术期脑保护研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
四、EXPRESSION EFFECT OF (-CHO) AFTER LONG-TERM TREATMENT OF OPIATES AND THE RELATIONSHIP WITH MITOCHNDRIAL MEMBRANE POTENTIAL IN P[C12 CELLS（论文参考文献）
- [1]基于ROS-MAPK-线粒体途径探讨补肾益精方治疗少弱精子症的作用机制[D]. 曹. 中国中医科学院, 2021
- [2]慢性酒精中毒诱导小鼠前额叶皮质内侧区线粒体形态改变和呼吸抑制的作用及机制研究[D]. 尚沛. 吉林大学, 2021(01)
- [3]新精神活性物质4-甲基乙卡西酮在神经细胞中的毒性机制研究[D]. 张微. 华东理工大学, 2021(08)
- [4]肥大细胞参与右美托咪定心脏保护效应的炎性调控机制研究[D]. 熊伟. 昆明医科大学, 2021
- [5]MetEnk对小鼠白脂棕色化和脂肪细胞线粒体功能的调节机制研究[D]. 申振通. 西北农林科技大学, 2021
- [6]高颈段脊髓电刺激调控PI3K/AKT信号通路对颅脑损伤大鼠的神经功能障碍的影响及机制研究[D]. 赵鹏程. 安徽医科大学, 2021(01)
- [7]线粒体损伤介导的药源性脏器损伤评价模型研究进展[J]. 魏桂林,何青青,金强,杨凌. 世界中医药, 2020(23)
- [8]马齿苋中儿茶酚型四氢异喹啉类生物碱的合成及其抗哮喘和抗炎活性研究[D]. 杨二兰. 山东大学, 2020
- [9]DRP1在局麻药神经毒性中作用及机制的研究[D]. 王云芸. 吉林大学, 2020(08)
- [10]地氟醚复合丙泊酚对烟雾病血管重建术患者脑保护作用的研究[D]. 冯凤喜. 郑州大学, 2020(02)