一、8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞抑癌基因表达的效应（论文文献综述）
陈水龄[1]（2020）在《姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究》文中研究说明第一章目的采用 532nm倍频激光建立实验性脉络膜新生血管（Choroidal Neovascularization,CNV）动物模型,为CNV的相关基础研究提供模型参考。方法1.应用532nm倍频激光光凝棕色挪威（Brown Norway,BN）大鼠建立实验性CNV模型,分别在光凝后1d、3d、5d、7d、14d、21d采用眼底照、眼底荧光血管造影（Fundus Fluorescein Angiograph,FFA）和吲哚菁绿血管造影（Indocyanine green Angiography,ICGA）观察光凝后不同时间点 CNV 的变化情况。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察光凝后不同时间点CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学染色法观察光凝后不同时间点CNV眼组织中CD105因子表达的情况。结果1.光凝后1d光斑处无荧光素渗漏;光凝后3d、5d仅有少量光斑处有荧光素渗漏。光凝后7d CNV生成率为70.18%,荧光素渗漏平均光密度值为128.30±11.21。光凝后14d CNV生成率为78.18%,平均光密度值为182.12±6.59,与光凝后7d组比较差异有统计学意义（P<0.05）。光凝后21d,CNV生成率和荧光素渗漏平均光密度值与光凝后14d组比较差异无统计学意义。2.HE染色结果显示:随着光凝后时间的增加,CNV中央厚度逐渐增加,光凝后7d CNV厚度为48.92±2.81μm,较光凝后1d显着增加（P<0.05）;光凝后14d CNV厚度为61.98±5.06μm,较光凝后7d显着增加（P<0.05）;光凝后21d CNV厚度为61.78±4.03μm,与14d组比较差异无统计学意义。3.CD105免疫组化结果显示:正常组视网膜组织CD105表达呈阴性,光凝后1d、3d、5d组光斑处可见少量棕黄色反应物表达,光凝后7d组光斑处棕黄色反应物逐渐增多（P<0.05）,光凝后14d组较光凝后7d组比较显着增加（P<0.05）,光凝后21d组与光凝后14d组比较差异无统计学意义。结论1.应用532nm激光光凝可以成功建立BN大鼠实验性CNV动物模型。2.CNV在光凝后7d至14d生长迅速,至21d逐渐稳定,此模型具有成模速度快,成模率高、重复性好、成本低的优点,可作为CNV基础研究的动物模型。3.眼底照、FFA、ICGA、HE染色和免疫组化检查可以动态观察CNV的变化。第二章目的观察中药单体姜黄素对BN大鼠实验性CNV的抑制作用,以及对AKT/p-AKT/HIF-1 α/VEGF信号通路活性的影响,为姜黄素治疗CNV提供实验依据。方法1.应用532nm倍频激光光凝诱导BN大鼠建立CNV模型,造模后的大鼠被随机分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组,在光凝后14d进行眼底照、FFA与ICGA检查。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察不同组CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学法观察不同组CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的表达情况。4.采用RT-qPCR法检测CNV眼组织中AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子mRNA的相对表达量。5.采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的相对表达量。结果1.正常组未打激光,模型组,雷珠单抗组,姜黄素低、中、高剂量组CNV生成率分别为78.18%、73.21%、77.19%、75.86%、74.55%,组间比较差异无统计学意义;荧光素渗漏平均光密度值分别为182.12±6.59、119.22±8.03、166.45±8.33、164.34±5.69、149.22±6.45;雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）;姜黄素低、中、高剂量组较雷珠单抗组显着升高（P<0.05）,其中姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。2.HE染色结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织各层结构清晰、排列整齐。光凝后14d,雷珠单抗组CNV中央厚度较模型组显着减少（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着减少（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。3.免疫组化结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织结构中AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子表达呈阴性,未见棕黄色反应物。光凝后14d,模型组光斑处AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组低于模型组（P<0.05）;姜黄素低剂量组、中剂量组AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组的表达较模型组显着降低（P<0.05）;较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。4.mRNA结果显示:光凝后14d,模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。5.Westernblot结果显示:光凝后14d,AKT蛋白各组间比较差异无统计学意义。p-AKT蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）;雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。HIF-1α蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）,雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）,姜黄素低、中剂量与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。VEGF蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）,雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）,姜黄素低剂量组与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。结论1.高剂量姜黄素（400mg/Kg/d）对激光诱导的BN大鼠实验性CNV的形成具有抑制作用。2.姜黄素抑制BN大鼠实验性CNV的机制可能与抑制AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路的激活,降低相关因子的表达有关。第三章目的观察姜黄素对氯化钴（CoCl2）诱导的人视网膜色素上皮细胞株-19（adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19）细胞缺氧模型中 AKT、HIF-1 α 和VEGF因子mRNA及蛋白表达的影响。方法1.采用CoCl2诱导ARPE-19细胞建立化学性缺氧模型,应用CCK-8法筛选造模试剂CoCl2、实验药物姜黄素和阳性对照药雷珠单抗的浓度,同时检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞活性的影响。2.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用RT-qPCR法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、HIF-1α和VEGF mRNA表达量的影响。3.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用Westernblot法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白表达量的影响。结果1.CCK-8细胞活性检测:随着CoCl2浓度的增加,ARPE-19细胞活性呈现先增长后抑制,当CoCl2终浓度≥200μM时,细胞活性显着降低（P<0.05）。姜黄素终浓度在0-100μM时,ARPE-19细胞活性未见异常;当浓度≥200μM时,细胞活性显着降低（P<0.05）。雷珠单抗在终浓度为20μg/mL时,细胞活性较CoCl2组显着降低（P<0.05）,与正常组比较差异无统计学意义;当浓度为40μg/mL、80μg/mL时,细胞活性较CoCl2组和正常组均显着降低（P<0.05）。因此,我们选择终浓度100μM的CoCl2作为造模浓度;终浓度6.25μM、25μM、100μM的姜黄素作为低、中、高剂量组浓度;终浓度为20μg/mL的雷珠单抗作为阳性对照药物的浓度。2.RT-qPCR结果显示:模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义（P<0.05）;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）;与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.Westernblot结果显示:AKT蛋白相对表达量各组间比较差异无统计学意义。p-AKT和HIF-1α蛋白相对表达量模型组均高于正常组（P<0.05）,雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）,姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义（P<0.05）,姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。VEGF蛋白相对表达量模型组高于正常组（P<0.05）,雷珠单抗组低于模型组（P<0.05）,姜黄素低剂量与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.应用CoCl2可成功建立APRE-19细胞化学缺氧模型。2.CoCl2在终浓度为100μM时可增加细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达量。3.高剂量姜黄素（100μM）可降低CoCl2诱导的ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和 VEGF mRNA 及 p-AKT、HIF-1α 和 VEGF 蛋白的表达。4.姜黄素（100μM）对CoCl2诱导ARPE-19细胞缺氧具有保护作用。第四章目的观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。方法1.将ARPE-19细胞条件培养液分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,分别作用于HUVEC细胞;采用CCK-8法观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响。2.采用细胞划痕实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的水平迁移的影响。3.采用Transwell小室迁移实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的垂直迁移的影响。4.采用Transwell小室侵袭实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的侵袭的影响。5.采用Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响。结果1.ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响,组间差异无统计学意义。2.HUVEC细胞水平迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞水平迁移显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组水平迁移显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）、高（100μM）剂量组水平迁移较模型组显着减少（P<0.05）,其中,高剂量组与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.HUVEC细胞垂直迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞垂直迁移显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组垂直迁移显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）剂量组垂直迁移与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素条件培养液高（100μM）剂量组垂直迁移较模型组显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。4.HUVEC细胞侵袭实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞侵袭显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组细胞侵袭显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）剂量组细胞侵袭与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素条件培养液高（100μM）剂量组较模型组细胞侵袭显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。5.HUVEC细胞管腔形成实验结果显示:模型组管腔形成较正常组显着增加（P<0.05）;雷珠单抗组管腔形成较模型组显着较少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）剂量组管腔形成与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中（25μM）、高（100μM）剂量组管腔形成与模型组比较显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.ARPE-19细胞姜黄素低（6.25μM）、中（25μM）、高剂量组（100μM）条件培养液可显着抑制HUVEC细胞水平迁移;其中高剂量组条件培养液可显着抑制HUVEC细胞垂直迁移。2.ARPE-19细胞姜黄素高剂量组（100μM）条件培养液可抑制HUVEC细胞侵袭。3.ARPE-19细胞姜黄素中（25μM）、高剂量组（100μM）条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。4.姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。
李园媛[2]（2020）在《水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过水提法制备水蛭提取液,分别采用凝血酶间接检测提取液中水蛭素含量（根据2015版药典）和高分辨液质联用QE技术检测提取液成分,以确定水蛭提取液的主要成分。通过观察水蛭提取液对人视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma RB）WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响,验证水蛭提取液抑制WERI-RB-1细胞生长和侵袭的作用。通过水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor VEGF）、缺氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a HIF-1a）、基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9 MMP-9）的影响及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶（Phosphatidylinositol 3kinase/Protein Kinae B PI3K/AKT）通路的影响,阐明水蛭提取液抑制WERI-RB-1细胞可能的分子机制。通过观察水蛭提取液对人脐静脉内皮细胞（Human Vascular endothelial cells HUVEC）的活性影响及表达VEGF和血管内皮生长因子受体2（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 VEGFR2）的影响,以此来研究水蛭提取液抑制肿瘤血管生成的潜能。方法:1.水蛭提取液的制备和检测:水提法制备水蛭提取液,并利用凝血酶间接测定水蛭素的含量;高分辨液质联用-QE技术分析水蛭的主要成分。2.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响: 将WERI-RB-1细胞与不同浓度的水蛭提取液（0.02U/ml、0.04U/ml、0.08U/ml、0.16U/ml）共培养0、24、48、72h,经CCK-8筛选最佳药物干预浓度和时间点; 以0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度、48h为药物干预条件,采用流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响; 以2个实验浓度、48h为药物干预条件,采用流式细胞仪检测药物对细胞凋亡的影响; transwell侵袭实验检测2个实验浓度对WERI-RB-1细胞侵袭作用的影响。对照组细胞仅在培养基中培养,无添加药物。3.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究: 0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,Elisa实验检测水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,RT-PCR检测水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达HIF-1a和MMP-9 m RNA水平的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预WERI-RB-1细胞48h,Western Blot检测蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达HIF-1a、MMP-9、PI3K、人磷酸化AKT蛋白（Human phosphorylated AKT protein p-AKT）蛋白含量的影响。对照组细胞仅在培养基中培养,无添加药物。4.水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响: 将HUVEC细胞与不同浓度的水蛭提取液（0.02U/ml、0.04U/ml、0.08U/ml、0.16U/ml）共培养0、24、48、72h,经CCK-8筛选最佳药物干预浓度和时间点; 0.04U/ml和0.08U/ml 2个水蛭提取液浓度干预HUVEC细胞48h后,RT-PCR检测水蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和VEGFR2 m RNA水平的影响; 以实验组水蛭提取液浓度干预HUVEC细胞48h后,Western Blot检测蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和VEGFR2蛋白含量的影响。结果:1.水蛭提取液的制备和检测:根据2015版《中华药典》中使用凝血酶测定水蛭提取液中水蛭素的浓度,经过多次反复提取及测定,水蛭提取液中水蛭素浓度保持相对稳定。高分辨液质联用分析仪-QE分析结果表明:水蛭提取液中包含有核苷类、氨基酸类、肌苷类、嘌呤类、维生素类等多种成分。2.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞活性、周期、凋亡、侵袭作用的影响: 0.04U/ml、0.08U/ml的水蛭提取液组在48h对RB细胞的抑制率分别是9.70%、9.92%,与对照组比较,差异具有统计学意义（OD值P<0.05）。 实验组药物浓度干预的RB细胞主要阻滞在G2/M期。对照组、0.04U/ml水蛭提取液组、0.08U/ml水蛭提取液组处于G2/M期的阳性细胞率（%）分别为3.00±2.32、12.59±5.36、14.79±4.12（对照组与水蛭提取液组比较,P<0.01）。 实验组水蛭提取液浓度均可诱导RB细胞凋亡率上调,以上3组细胞凋亡率依次分别为4.64±2.56、37.91±3.44、33.05±2.25（与对照组比较,P<0.01）。 实验组Transwell下室中移行的、每高倍视野细胞数目均较对照组显着减少,3组检测结果（OD值）依次分别为1.21±4.36、0.44±2.08、0.53±3.42（与对照组比较,P<0.01）。3.水蛭提取液对WERI-RB-1细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究: Elisa实验结果显示:与对照组比较,0.04U/ml和0.08U/ml2个水蛭提取液浓度培养基上清中VEGF的表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。 RT-PCR结果显示:与对照组比较,HIF-1a和MMP-9 m RNA水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）; Western Blot结果显示:与对照组比较,HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT的蛋白含量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响: 0.04U/ml和0.08U/ml水蛭提取液干预WERI-RB-1细胞48h后,细胞的抑制率分别为12.96±1.59、14.81±2.17,与对照组比较差异具有统计学意义（OD值P<0.05）。 RT-PCR结果显示:与对照组比较,VEGF、VEGFR2的m RNA水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）; Western Blot结果显示:与对照组比较,VEGF、VEGFR2的蛋白含量降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.水提法提取的水蛭提取液中水蛭素含量相对稳定。水蛭提取液中包含有核苷类、氨基酸类、肌苷类、嘌呤类、维生素类等多种成分。2.水蛭提取液通过抑制WERI-RB-1活性、引起周期阻滞、诱导细胞凋亡、抑制细胞侵袭等作用对视网膜母细胞瘤WERI-RB-1细胞发挥抑制作用。3.水蛭提取液通过VEGF/PI3K/AKT通路抑制WERI-RB-1细胞,同时抑制WERI-RB-1细胞中HIF-1a、MMP-9活性。4.水蛭提取液可抑制HUVEC细胞活性,抑制HUVEC细胞表达VEGF、VEGFR2蛋白活性。综上所述,在体外实验中,水蛭提取液在一定程度上可能通过VEGF/PI3K/AKT通路和HIF-1a、MMP-9因子影响WERI-RB-1细胞周期分布、凋亡、侵袭作用,从而发挥抑制RB的作用。同时发现水蛭提取液可能通过抑制VEGF、VEGFR2表达抑制脐静脉内皮细胞。我们的研究结果表明:水蛭提取液对RB细胞具有抑制作用,同时可能对RB血管也有抑制作用。从中医理论上进一步验证了其活血化瘀、其破血消瘕的作用。以上研究结果为开发新型抗肿瘤制剂水蛭提供了一定的临床前研究资料。
甄庆宇[3]（2018）在《榄香烯联合化疗药物对食管癌细胞增殖及PD-L1、PTEN/PI3K/AKT相关蛋白表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过研究榄香烯联合细胞毒性药物奈达铂、氟尿嘧啶对人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109的增殖、凋亡、分裂周期的影响及PD-L1和PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白的变化,探讨榄香烯作用于人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109的机制,为临床应用提供理论依据。材料与方法:1.应用CCK-8法检测和计算榄香烯、奈达铂、氟尿嘧啶的半数抑制浓度（IC50）,检测联合用药对Ec109细胞株的抑制率。2.应用流式细胞仪检测榄香烯、奈达铂、氟尿嘧啶、榄香烯联合奈达铂、榄香烯联合氟尿嘧啶、奈达铂联合氟尿嘧啶、榄香烯联合奈达铂和氟尿嘧啶对Ec109细胞株凋亡、周期的影响;3.应用Western blot法检测各组药物作用后的Ec109细胞株PD-L1、PTEN、PI3K、AKT蛋白表达水平的变化。结果:1.榄香烯（浓度≥60ug/ml）、奈达铂、氟尿嘧啶对人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109抑制作用呈现时间与浓度的效应关系,差异有统计学意义（P<0.05）。药物作用于细胞48h的IC50分别为:榄香烯70.873ug/ml、奈达铂60.358 um/ml、氟尿嘧啶84.159 um/ml,后续实验均以榄香烯60ug/ml、奈达铂50um/ml、氟尿嘧啶50um/ml为浓度参数。榄香烯、奈达铂和氟尿嘧啶的两药联合较单药能更好地抑制细胞的增殖活力,榄香烯、奈达铂和氟尿嘧啶的三药联合较两药联合和单药能更好地抑制细胞的增殖活力,差异均有统计学意义（P<0.05）。2.低浓度（15ug/ml、30ug/ml）的榄香烯对Ec109细胞株具有增殖作用,差异有统计学意义（P<0.05）,其活细胞吸光度OD值均较空白组高,差异有统计学意义（P<0.05）。3.榄香烯、奈达铂和氟尿嘧啶的两药联合较单药能提高细胞凋亡率,使细胞更多停滞在S及G2期,缩短G1期占比,差异有统计学意义（P<0.05）。榄香烯、奈达铂和氟尿嘧啶的三药联合较两药联合和单药能提高细胞凋亡率,使细胞更多停滞在S及G2期,缩短G1期占比,差异有统计学意义（P<0.05）。4.所有联合用药组及单药组Ec109细胞株的PTEN蛋白表达较空白对照组总体呈上升的趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;所有联合用药组及单药组Ec109细胞株的PD-L1、PI3K、AKT蛋白表达较空白对照组总体呈下降趋势,差异有统计学意义（P<0.05）;5.榄香烯联合奈达铂组、榄香烯联合氟尿嘧啶组较奈达铂、氟尿嘧啶单药组及其两药联合用药组Ec109细胞株的PTEN蛋白表达量减少,差异有统计学意义（P<0.05）;所有联合用药组均较单药组PI3K/AKT蛋白表达量减少,差异有统计学意义（P<0.05）。6.榄香联合奈达铂组、榄香烯联合氟尿嘧啶组、榄香烯联合奈达铂和氟尿嘧啶组较单药组Ec109细胞株的PD-L1蛋白表达量减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.榄香烯（浓度≥60ug/ml）能抑制人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109增殖;低浓度（15ug/ml、30ug/ml）榄香烯能促进人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109增殖。2.榄香烯联合奈达铂和氟尿嘧啶较单药和两药联合应用可以提高人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109的抑制率。3.榄香烯联合奈达铂和氟尿嘧啶较单药和两药联合应用可以提高人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109的凋亡率以及S和G2期占比,缩短G1期占比。4榄香烯单药或联合奈达铂和氟尿嘧啶能抑制人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109的增殖和促进凋亡,PTEN蛋白表达提高,PI3K和Akt蛋白表达降低,药物的作用机制可能与负向调控PTEN/PI3K/Akt/信号通路有关。5.榄香烯单药或联合奈达铂和氟尿嘧啶可使人高分化食管鳞状癌细胞株Ec109的PD-L1蛋白表达下调。提示减少PD-L1介导的免疫逃逸可能与药物在人体内作用机制有关。
熊旋,李磊,王庆才[4]（2018）在《氧化苦参碱对肿瘤抑制作用的研究进展》文中研究说明氧化苦参碱（oxymatrine,OMT）是传统中药苦参的主要生物活性成分,具有抗炎、抗过敏、抗纤维化、免疫调节及抗肿瘤等多种药理活性。近年来,研究发现,氧化苦参碱具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化凋亡、抑制肿瘤细胞黏度与浸润转移等作用。本文就氧化苦参碱抗肿瘤的作用及其机制作一综述。
熊旋[5]（2018）在《氧化苦参碱对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路的影响》文中研究指明氧化苦参碱（Oxymatrine,OXY）是从中药苦豆子中提取的有效成分,是苦参的主要活性成分,具有抗炎、抗过敏、抗纤维化、免疫调节及抗肿瘤等多种药理活性。已有实验表明OXY可抑制胃癌SGC-7901细胞的活性[1],为了阐明OXY抑制胃癌SGC-7901细胞活性的作用机制,本实验进一步探讨OXY对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用与Ras/Raf信号通路的关系。目的观察OXY对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路中上游Ras及下游Raf蛋白及mRNA表达的影响,深入探讨OXY对肿瘤的抑制作用。方法1.首先在体外进行胃癌细胞SGC-7901的培养。2.采用CCK8检测不同浓度（0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml）[2]的OXY在不同时间（24h,48h和72h）对SGC-7901胃癌细胞活性的影响。3.利用实时荧光定量PCR法来观察不同浓度（0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml）的OXY在48h对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路中Ras和Raf mRNA表达水平的影响。4.利用Western Blot法来检测不同浓度（0mg/ml,1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml）的OXY对胃癌SGC-7901细胞株处理48h后Ras/Raf通路中Ras和Raf蛋白表达的影响。结果与对照组（0mg/ml）相比,不同浓度（1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml）的OXY处理后细胞活性率为（24h:75.62%±5.04%,64.75%±3.72%,56.01%±4.36%Vs88.67%±5.03%,F=205.7,p<0.001;48h:70.02%±2.65%,58.07%±5.01%,51.33%±3.51%Vs86.33%±5.69%,F=22.54,p=0.001;72h:59.11%±3.48%,51.23%±4.51%,44.67%±6.03%V s84.67%±4.16%,F=21.92,p=0.002）;不同浓度OXY（1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml）作用于胃癌SGC-7901细胞48h后Ras及Raf mRNA相对表达量分别为（0.79%±0.03%,0.64%±0.03%,0.44%±0.03%,F=229.5,p<0.001;0.78%±0.03%,0.61%±0.03%,0.50%±0.02%,F=203.3,p<0.001）;不同浓度（1mg/ml,2mg/ml,4mg/ml）的OXY作用于胃癌SGC-7901细胞48h后Ras及Raf蛋白相对表达量分别为（0.82%±0.03%,0.64%±0.04%,0.42%±0.02%,F=207.3,p<0.001;0.68%±0.03%,0.59%±0.02%,0.32%±0.02%,F=201.6,p<0.001）;OXY在胃癌SGC-7901细胞株中能够下调Ras/Raf信号转导通路中正调控因子Ras和Raf蛋白及mRNA的表达水平（p<0.05）。结论OXY通过抑制胃癌SGC-7901细胞株Ras及Raf蛋白和mRNA的表达,抑制Ras/Raf信号转导通路的激活,从而起到抑制胃癌的作用。
赵静滨,何熹微,姚素艳,刘建生,郑德宇[6]（2016）在《绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用》文中指出目的探讨绿原酸（CHA）对体外培养人视网膜母细胞瘤（Rb）细胞株HXO-RB44的作用及机制。方法应用CCK-8体外抑制实验,筛选CHA对体外培养传6代的人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度。Western blot检测人Rb细胞株HXO-RB44中抑癌基因Rb1和P16及细胞周期蛋白（Cyclin D2）和细胞周期蛋白依赖激酶（CDK 4）的表达变化;ELISA检测培养基中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果 CCK-8体外抑制实验结果显示,CHA对人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度为80μmol/L。经80μmol/L CHA处理5d的HXO-RB44细胞株中,抑癌基因Rb1和P16均有少量表达,而在阳性对照组（HT1080细胞）和未处理的HXO-RB44细胞几乎没有表达。CHA处理5d的HXO-RB44细胞株的Cyclin D2和CDK4的表达明显低于阳性对照组（HT1080细胞）和未处理的HXO-RB44细胞（P<0.01）。CHA处理5d的HXO-RB44的培养基中LDH的含量为（226.75±42.74）U/L,明显低于正常培养的细胞培养基（425.84±31.67）U/L（P<0.01）。结论 80μmol/L CHA可能通过增加HXO-RB44抑癌基因的表达,降低细胞周期蛋白的表达及LDH水平,而抑制HXO-RB44细胞株的增殖。
陆烨,童剑萍[7]（2016）在《视网膜母细胞瘤的发生机制及诊断和治疗进展》文中进行了进一步梳理视网膜母细胞瘤是婴幼儿最常见的眼球内恶性肿瘤,不仅影响眼球和视力,甚至危及生命。随着临床治疗水平的不断提高,治疗的目标也从单纯局限于保护患儿的生命转向立足于提高患儿的生存质量,即保留眼球和有用视功能的方向发展,而实现这一目标的最关键问题在于患儿的早期发现和诊断。由于视网膜母细胞瘤患儿的年龄一般都在三岁以下,肿瘤的早期发现相当困难,这不仅是因为患儿眼底检查配合不佳,更是缺乏清晰和直观的检查成像手段所造成的。随着基础研究和临床实践的逐步深入,视网膜母细胞瘤有了更多的治疗方法。本文就视网膜母细胞瘤的发生机制、早期诊断和治疗进展进行综述。
夏天[8]（2013）在《沉默缺氧诱导因子HIF-1α基因对视网膜母细胞瘤生长与凋亡的影响》文中研究说明视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma, RB）是所有儿童实体肿瘤中最常见和最主要的眼内恶性肿瘤，其肿瘤发生率约为1:15000。对患儿的视力与生命都有严重威胁。肿瘤缺氧微环境在多数实体肿瘤中普遍存在，肿瘤细胞对缺氧的适应是肿瘤形成过程中一个关键的步骤。缺氧诱导因子1（hypoxia-inducible factor-1,HIF-1）是由肿瘤内部缺氧所激活的一种转录因子，受多种癌基因、抑癌基因和生长因子的调节，并与肿瘤的发生发展、侵袭转移以及血管化形成等多种生物学特性有关。研究发现HIF-1在多种恶性实体肿瘤中呈现高表达并且与肿瘤的发生、发展与转移关系密切。鉴于HIF-1在肿瘤许多生物学行为中所起的关键性作用，近几年以HIF-1为基因靶点的抗肿瘤方案已经成为肿瘤治疗研究的热点之一。然而，HIF-1在RB中的表达及意义目前在国内外的研究文献中并不多见，其对RB的生物学行为的影响还有待进一步深入探讨与了解。本研究以肿瘤缺氧微环境理论为依据，通过RNA干扰技术沉默缺氧诱导因子HIF-1α基因表达，分别在体外与体内水平观察HIF-1α基因沉默对人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞与裸鼠RB移植瘤致瘤性的影响，旨在为以缺氧诱导因子HIF-1α为靶点的RB抗肿瘤基因治疗提供理论基础与实验依据。第一部分缺氧诱导因子HIF-1α在人视网膜母细胞瘤中的表达及其意义目的了解缺氧诱导因子HIF-1α在人RB肿瘤组织中的表达情况以及HIF-1α表达与RB的病理分型和临床分期之间的关系；探讨缺氧对RB细胞株中HIF-1α基因的转录与蛋白表达水平的影响。方法1应用免疫组织化学方法检测32例人RB肿瘤组织标本与11例正常人视网膜组织标本中HIF-1α的表达情况。2利用SPSS16.0统计学软件，通过卡方检验分析HIF-1α表达与RB病理分型和临床分期之间的关系。3应用RT-PCR方法从转录水平分别检测人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1与HOX-Rb44细胞株中HIF-1αmRNA的表达情况。4应用Western blotting方法从蛋白表达水平分别检测人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1与HOX-Rb44细胞株中HIF-1α蛋白表达情况。结果1免疫组织化学检测显示，HIF-1α在人RB肿瘤组织中高表达，阳性表达率为84.38%；在正常人视网膜组织中低表达，阳性表达率为9.09%（P＜0.01）。2统计学分析显示，HIF-1α阳性表达率在分化型RB与未分化型RB肿瘤组织中差异无显着性（P＞0.05）；临床Ⅰ期RB组织中HIF-1α阳性表达率与临床Ⅱ期、Ⅲ期相比差异均具有显着性（P＜0.01）。3RT-PCR检测显示，在人RB细胞系WERI-Rb-1和HOX-Rb44两种细胞株中，无论在缺氧条件下或常氧条件下HIF-1αmRNA均呈阳性表达；两种RB细胞株中HIF-1αmRNA表达水平在低氧组与常氧组之间差异均无显着性（P＞0.05）。4Western blotting检测显示，在人RB细胞系WERI-Rb-1和HOX-Rb44两种细胞株中，常氧条件下HIF-1α蛋白均呈弱阳性表达，低氧条件下HIF-1α蛋白表达水平显着上调；两种RB细胞株中HIF-1α蛋白表达水平在低氧组与常氧组之间差异均具有显着性（P＜0.01）。结论1HIF-1α在人RB肿瘤组织中高表达，而在人正常视网膜组织中不表达或弱阳性表达；HIF-1α阳性表达率与人RB的病理学分型无关，而与RB的临床分期正相关。2缺氧主要在蛋白表达水平上明显增加RB细胞株中HIF-1α基因的表达，而缺氧对RB细胞株中HIF-1α基因的mRNA表达水平并无明显影响。第二部分针对HIF-1α基因的RNA干扰质粒的构建及其抑制效果检测目的构建特异性针对HIF-1α基因的RAN干扰质粒（HIF-1αsiRNA），并检测该重组质粒对RB细胞株WERI-Rb-1细胞中HIF-1α表达的抑制效果；为HIF-1α基因的功能研究提供理论基础与技术手段。方法1设计3条针对HIF-1α和1条阴性对照的寡核苷酸序列，并将其与酶切后的空白质粒连接，构建3条特异性针对HIF-1α的RNA干扰重组质粒与1条阴性RNA干扰重组质粒。2通过细胞转染的方法将重组质粒转染RB细胞系WERI-Rb-1细胞株，利用流式细胞术（FCM）检测各种转染试剂对该重组质粒的转染效果。3利用RT-PCR与Western blotting方法分别检测3条特异性针对HIF-1α的RNA干扰重组质粒对WERI-Rb-1细胞株中HIF-1αmRNA和蛋白表达的抑制效果。结果1成功构建了3条特异性针对HIF-1α的RNA干扰质粒pRNAT-HIF-1αsiRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ与1条阴性RNA干扰质粒pRNAT-Neg siRNA；经基因测序检测证明，重组质粒DNA片段序列全部与Gene bank数据库提供的HIF-1α序列完全一致，无碱基缺失和错位。2FCM检测显示，经纳米高分子聚合物转染试剂EntransterTMR转染的重组质粒pRNAT-HIF-1α siRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ与pRNAT-Neg siRNA的细胞转染效率分别为91.23%、90.54%、94.01%与89.76%，经脂质体LipofectamineTM2000转染的重组质粒的细胞转染效率为62.14%。 EntransterTMR转染各组和Lipofectamine转染组细胞的重组质粒转染效率分别与空白对照组相比各组间差异均有显着性（P＜0.01）；EntransterTMR转染各组与Lipofectamine转染组细胞的重组质粒转染效率差异均有显着性（P＜0.05）。3RT-PCR方法检测显示，三组分别转染了pRNAT-HIF-1αsiRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ重组RNA干扰质粒的WERI-Rb-1细胞中HIF-1α mRNA表达水平明显下调，与对照组相比各组间差异具有显着性（P＜0.01）。其中pRNAT-HIF-1αsiRNAⅢ重组质粒的抑制效果最明显。4Western blotting方法检测显示，三组分别转染了pRNAT-HIF-αsiRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ重组RNA干扰质粒的WERI-Rb-1细胞中HIF-1α蛋白表达水平明显降低，与对照组相比各组间差异具有显着性（P＜0.01）。其中pRNAT-HIF-1αsiRNA Ⅲ重组质粒的抑制效果最明显。结论成功构建的特异性针对HIF-1α的RNA干扰重组质粒能有效地并特异性地抑制RB细胞系WERI-Rb-1细胞株中HIF-1α基因在mRNA与蛋白水平上的表达。为研究HIF-1α基因在视网膜母细胞瘤发生与发展中的作用提供了有用的工具。第三部分HIF-1α基因沉默对WERI-Rb-1细胞生长、凋亡以及HIF-1α下游基因表达的影响目的探讨质粒介导的HIF-1α基因沉默在体外水平对人RB细胞系WERI-Rb-1细胞的增殖、凋亡、细胞周期以及HIF-1α下游靶基因P53、P21、VEGF及bcl-2家族蛋白表达的影响。方法1MTT比色法检测HIF-1α基因沉默对WERI-Rb-1细胞体外增殖的影响2流式细胞术（AnnexinⅤ-PE与7-AAD双染色法）检测HIF-1α基因沉默对WERI-Rb-1细胞凋亡的影响。3流式细胞术检测HIF-1α基因沉默对WERI-Rb-1细胞周期的影响。4Western blotting检测HIF-1α基因沉默对WERI-Rb-1细胞中HIF-1α靶基因P53、P21、VEGF及bcl-2家族蛋白表达的影响结果1MTT检测结果显示，与同期对照组相比， HIF-1αsiRNA干扰组WERI-Rb-1细胞在缺氧条件下培养第1天未发现增殖抑制，第2天细胞增殖抑制率为8.24%（P＞0.05），第3天增殖抑制率为29.6%（P＜0.01），第4天增殖抑制率为49.1%（P＜0.01），第五天增殖抑制率为53.2%（P＜0.01）。2FCM检测显示，HIF-1αsiRNA干扰组与同期对照组相比，G1/G0期细胞数量增加，S期与G2/M期细胞数量减少，在细胞周期各阶段中两组的细胞数量差异均有显着性（P＜0.01）。3FCM检测结果显示，缺氧条件下培养48小时后，HIF-1a siRNA干扰组WERI-Rb-1细胞凋亡水平为48.97%，分别与同期空白对照组（17.53%）、转染试剂组（17.00%）以及阴性质粒干扰组（21.59%、）相比，各组间差异均有显着性（P＜0.01）。4Western blotting结果检测显示，与同期对照组相比，HIF-1αsiRNA干扰组WERI-Rb-1细胞中P53蛋白表达各组间差异均无显着性（P＞0.05）；bcl-2与p-p53蛋白表达轻度减少（P＜0.05）；P21与Bax蛋白表达显着性增加（P＜0.01）；VEGF蛋白表达显着下调（P＜0.01）。结论1HIF-1α基因沉默能抑制RB细胞系WERI-Rb-1细胞的体外增殖能力，使细胞周期停滞于G1/G0期，增加肿瘤细胞的凋亡。2HIF-1α基因沉默能以非P53依赖形式，通过下调bcl-2和上调Bax基因表达方式增加WERI-Rb-1细胞的凋亡；同时还可能通过下调VEGF基因表达方式减少其肿瘤血管化的形成并控制肿瘤生长。第四部分HIF-1α基因沉默对裸鼠RB移植瘤生长、凋亡及血管化形成的影响目的探讨HIF-1α基因沉默在体内水平对裸鼠RB移植瘤的生长凋亡以及血管化形成的影响方法1通过裸鼠皮下注射WERI-Rb-1细胞的方式建立裸鼠RB移植瘤动物模型；采用肿瘤瘤体内多点注射方式进行RNA干扰抑瘤实验。2抑瘤实验期间定期观察裸鼠RB移植瘤生长情况，用游标卡尺测量并计算各组裸鼠瘤体体积，绘制肿瘤生长曲线；实验结束后处死裸鼠，剥离肿瘤组织并测量瘤体终重量，计算抑瘤率。3Western blotting方法检测RNA干扰沉默HIF-1α基因对裸鼠RB移植瘤中HIF-1α蛋白表达的抑制效果。4采用CD34单克隆抗体标记新生微血管内皮细胞的免疫组织化学方法检测裸鼠RB移植瘤组织中微血管密度（MVD）。5采用TUNEL法检测裸鼠RB移植瘤肿瘤细胞的凋亡情况。结果124只BALB/C（nu/nu）裸鼠右侧前肢腋窝皮下注射WERI-Rb-1细胞4周后，全部裸鼠皮下RB移植瘤均达到成瘤标准，且无一例死亡，肿瘤发生率为100%。2抑瘤实验后第6天开始，与同期对照组相比，HIF-1αsiRNA干扰组裸鼠RB移植瘤生长速度明显减慢（P＜0.01）。3与同期对照组相比，HIF-1αsiRNA干扰组裸鼠RB移植瘤终重量明显较轻（P＜0.01）。4Western blotting检测显示，与同期对照组相比，HIF-1αsiRNA干扰组裸鼠RB移植瘤中HIF-1α蛋白表达明显下调（P＜0.01）。5MVD法检测结果显示，与同期对照组相比，HIF-1αsiRNA干扰组裸鼠RB移植瘤组织中新生微血管的形成明显减少（P＜0.01）。6TUNEL法检测显示，与同期对照组相比，HIF-1αsiRNA干扰组裸鼠RB移植瘤肿瘤细胞的凋亡数量明显增加（P＜0.01）。结论HIF-1α基因沉默能通过减少裸鼠RB移植瘤新生微血管的形成，增加肿瘤细胞的凋亡的方式，抑制肿瘤的生长并降低其致瘤性。
周琦[9]（2013）在《奥沙利铂体外对人视网膜母细胞瘤细胞Y79增殖及凋亡的影响》文中认为目的1.探讨奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y79增殖抑制及诱导凋亡的影响。2.探讨siRNA下调人髓细胞白血病基因-1（myeloid cell leukemia-1, Mcl-1）后增强奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y79凋亡的敏感性的影响。方法1.MTT法检测不同浓度（0、0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L）奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y7924、48、72h后的增殖抑制作用,以明确其剂量-效应关系;2.碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y79作用24h后凋亡的影响；3.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性变化；4.PI/Annexin V双染检测奥沙利铂（0.25μmol/L）对siRNA转染下调Mcl-1人视网膜母细胞瘤细胞Y79凋亡的影响,同时将未转染和转染空质粒人视网膜母细胞瘤细胞Y79作为空白和阴性对照；5.Western blot检测奥沙利铂（0.25μmol/L）诱导人视网膜母细胞瘤细胞Y79不同时间（0、6、16、24h）, Mcl-1的表达以及siRNA转染下调Mcl-1人视网膜母细胞瘤细胞Y79中Mcl-1的表达。结果1.奥沙利铂抑制人视网膜母细胞瘤细胞Y79增殖MTT法显示不同浓度的奥沙利铂对视网膜母瘤细胞Y79的增殖抑制作用,实验中使用不同浓度奥沙利铂（0、0.125、0.25.0.5、1、2μmol/L）处理人视网膜母细胞瘤细胞Y79,使用MTT法检测细胞存活率。结果表明,随着药物浓度的增加,作用时间的延长,细胞的存活率下降。0.25μmol/L奥沙利铂处理视网膜母细胞Y79的24、48、72h后细胞的存活率分别为（83.59±0.76）%、（77.30±1.24）%、（61.41±1.39）%；与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。2.奥沙利铂诱导人视网膜母细胞瘤细胞Y79凋亡0.25μmol/L奥沙利铂刺激人视网膜母细胞瘤细胞Y7924h后,PI流式检测,诱导人视网膜母细胞瘤细胞Y79的凋亡率分别为（36.23±0.25）%（P<0.05）。3.奥沙利铂诱导人视网膜母细胞瘤细胞Y79的Caspase-3激活作用0.25μmol/L奥沙利铂刺激人视网膜母细胞瘤细胞Y79后,对Y79细胞Caspase-3激活有明显的增强作用,为（5.76±0.25）%,与对照组（1.96士0.15）%比较差异有统计学意义（P<0.01）。4.奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y79中Mcl-1的表达的影响实验中用0.25μmol/L奥沙利铂刺激人视网膜母细胞瘤细胞Y79后,培养6,16,24h后收集细胞,提取蛋白,用Western blot方法检测Mcl-1蛋白的表达。从实验可以看出,奥沙利铂可诱导人视网膜母细胞瘤Y79中Mcl-1的表达增强。5. pSH1Si-Mcl-1对人视网膜母细胞瘤细胞Y79Mcl-1表达的抑制作用为观察下调Mcl-1后人视网膜母细胞瘤Y79Mcl-1的表达,实验中分别转染空质粒和不同序列的pSH1Si-Mcl-1质粒到人视网膜母细胞瘤细胞Y79,转染6h后更换新鲜培养基,次日收集细胞,提取蛋白,用Western blot的方法检测Mcl-1蛋白的表达,显示Mcl-l-homo-991具有明显抑制Mcl-1表达的作用。6.下调Mcl-1的表达对人视网膜母细胞瘤细胞Y79凋亡的促进作用为观察下调Mcl-1后,奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y79凋亡的作用。实验中对不同因素处理的细胞进行PI/Annexin V染色,并通过流式细胞仪分析,观察敲减Mcl-1后诱导人视网膜母细胞瘤细胞Y79早期凋亡的作用。0.25μmol/L奥沙利铂作用于人视网膜母细胞瘤细胞Y7924h,诱导Y79细胞的凋亡率为10.8%,与阴性对照组5.8%比较,差异无统计学意义（P>0.05）。将Mcl-1进行敲减,并且敲减后用0.25μmol/L奥沙利铂处理24h,诱导人视网膜母细胞瘤细胞Y79的凋亡率分别为21.0%和48.2%,与阴性对照组及奥沙利铂组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。上述表明,奥沙利铂本身并不诱导细胞产生凋亡,但敲减Mcl-1后可增加奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞产生的凋亡。结论1.奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞Y79具有增殖抑制作用,且随着剂量浓度的加大和作用时间的延长,细胞存活率随之降低,但在低浓度下作用不明显,作用机制可能与凋亡关键蛋白Mcl-1的抗凋亡作用相关。2.奥沙利铂诱导后,人视网膜母细胞瘤细胞Y79中Mcl-1的表达明显增加,其作用机制可能与Mcl-1的抗凋亡作用有关,由此产生了耐药。3.下调Mcl-1后,人视网膜母细胞瘤细胞Y79的细胞存活率明显下降,凋亡率明显上升,由此证明Mcl-1在人视网膜母细胞瘤细胞Y79具有保护作用。
郭慧丽,张明昌,李宝华,李金萍,吴景兰[10]（2010）在《纳米脂质体槲皮素联合8-Br-cAMP诱导人Rb44细胞恶性逆转化效应》文中研究表明目的纳米脂质体槲皮素（nanoliposomal quercetin,nLQ）可抑制PI3K/AKt信号途径,8-Br-cAMP为PKAII型激动剂,探讨二者协同诱导人视网膜母细胞瘤（retinoblasto-ma,Rb）44细胞的恶性逆转化效应。方法将培养的Rb44细胞分为4组:（1）加纳米脂质体槲皮素（终浓度为40μmol.L-1）组（nLQ组）;（2）加8-Br-cAMP（终浓度为20μmol.L-1）组（Br组）;（3）联合药物组（nLQ+Br组）;（4）不加药物培养的对照组。以MTT实验检测培养的各组Rb44细胞生长抑制率,采用免疫细胞化学和蛋白质免疫斑点印迹检测PTEN、cyclinD1、c-myc、p21waf1、MMP9及VEGF的表达,原位杂交技术检测p16、Rb抑癌基因的表达。结果 MTT实验显示联合药物组的细胞生长抑制率显着高于任何单个药物组。与对照组相比,nLQ和8-Br-cAMP组明显抑制培养的Rb44细胞的生长,并呈现协同抑制效应。免疫细胞化学及蛋白质免疫斑点印迹显示:与对照组相比,cyclinD1、c-myc、MMP9、VEGF的表达下调,PTEN、p21waf1表达上调。原位杂交显示:与对照组相比,药物组的p16及Rb抑癌基因的表达上调。结论 nLQ或8-Br-cAMP可诱导人Rb44细胞恶性逆转化,且呈协同效应。
二、8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞抑癌基因表达的效应（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞抑癌基因表达的效应（论文提纲范文）
（1）姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 532nm倍频激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型的建立 |
| 1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器及耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 532nm倍频激光建立CNV模型 |
| 2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
| 2.4 制备病理学标本 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组织化学检测 |
| 3. 图像分析与统计学方法 |
| 3.1 眼底照、FFA及ICGA图像 |
| 3.2 HE染色图像 |
| 3.3 免疫组化图像 |
| 3.4 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
| 4.2 HE染色结果 |
| 4.3 CD105免疫组化结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 CNV模型建立的方法 |
| 5.2 532nm倍频激光诱导BN大鼠建立实验性CNV模型的机制 |
| 5.3 532nm倍频激光诱导BN大鼠CNV模型的评价 |
| 6. 结论 |
| 第二章 姜黄素通过AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路抑制BN大鼠CNV的实验研究 |
| 1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.0 实验药物配制 |
| 2.1 实验分组及给药 |
| 2.2 532nm倍频激光建立实验性CNV模型 |
| 2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
| 2.4 病理学标本制备 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组织化学检测 |
| 2.7 RT-qPCR检测mRNA表达 |
| 2.8 Westernblot检测蛋白表达 |
| 3. 图像分析与统计学方法 |
| 3.1 眼底照、FFA与ICGA图像 |
| 3.2 HE染色图像 |
| 3.3 免疫组化图像 |
| 3.4 RT-qPCR结果分析 |
| 3.5 Westernblot结果分析 |
| 3.6 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
| 4.2 HE染色结果 |
| 4.3 免疫组化结果 |
| 4.4 RT-qPCR结果 |
| 4.5 Westernblot结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 新生血管与中药单体 |
| 5.2 姜黄与姜黄素 |
| 5.3 姜黄素与眼部新生血管 |
| 5.4 CNV的中医认识 |
| 5.5 姜黄素抑制CNV的机制 |
| 6. 结论 |
| 第三章 姜黄素对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型中AKT、HIF-1α和VEGF因子的影响 |
| 1. 实验细胞、试剂、药物及仪器 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验药物及溶液的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 ARPE-19细胞复苏、传代与冻存 |
| 2.2 造模试剂CoCl_2、实验药物姜黄素及阳性对照药雷珠单抗浓度的筛选 |
| 2.3 实验分组与干预 |
| 2.4 CCK-8法检测实验各组ARPE-19细胞的活性 |
| 2.5 RT-qPCR检测 |
| 2.6 Westernblot检测 |
| 3. 结果分析与统计学方法 |
| 3.1 CCK-8检测细胞活性结果分析 |
| 3.2 RT-qPCR结果分析 |
| 3.3 Westernblot结果分析 |
| 3.4 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 正常ARPE-19细胞形态 |
| 4.2 CoCl_2对ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.3 姜黄素对ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.4 雷珠单抗对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.5 RT-qPCR结果 |
| 4.6 Westernblot结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 细胞缺氧模型的建立 |
| 5.2 CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧模型的机制 |
| 5.3 姜黄素对CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧的保护作用 |
| 6. 结论 |
| 第四章 非接触共培养体系观察ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对HUVEC细胞形态学的影响 |
| 1. 实验细胞、药物、试剂及仪器 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验试剂的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 HUVEC细胞株复苏培养、传代与冻存 |
| 2.2 CCK-8检测 |
| 2.3 划痕实验检测细胞水平迁移 |
| 2.4 Transwell小室法检测细胞垂直迁移 |
| 2.5 Transwell小室法检测细胞侵袭 |
| 2.6 Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成 |
| 3. 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 正常HUVEC细胞形态 |
| 4.2 CCK-8结果 |
| 4.3 划痕实验细胞水平迁移结果 |
| 4.4 Transwell小室实验细胞垂直迁移结果 |
| 4.5 Transwell小室实验细胞侵袭结果 |
| 4.6 Matrigel基质胶实验细胞管腔形成结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 细胞迁移 |
| 5.2 细胞侵袭 |
| 5.3 细胞管腔形成 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 创新性 |
| 不足与展望 |
| 综述一 脉络膜新生血管的发病机制及中西医治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 姜黄素在眼科疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间学术表现 |
| 致谢 |
| 附: 查新报告 |
（2）水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 水蛭提取液的制备和主要成分分析的初步研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 主要试剂和耗材 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 试剂配制 |
| 1.2 实验方法与步骤 |
| 1.2.1 水蛭提取液的制备和含量检测 |
| 1.2.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液成分 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 水蛭提取液的制备和水蛭素含量测定 |
| 1.3.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液主要成 |
| 1.4 讨论 |
| 1.4.1 水蛭提取液的制备和检测的初步研究 |
| 1.4.2 高分辨液质联用-QE分析水蛭提取液成分 |
| 第二部分 水蛭提取液对WERI-Rb-1 细胞活性、周期、凋亡、侵袭的影响 |
| 2.1 实验细胞、试剂及配制、仪器设备和耗材 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 2.1.3 主要实验设备仪器 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.2 细胞培养、传代和冻存 |
| 2.2.1 细胞培养和传代 |
| 2.2.2 细胞冻存 |
| 2.3 实验方法与步骤 |
| 2.3.1 CCK-8法检测水蛭提取液对细胞的活性影响 |
| 2.3.2 水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞周期的影响 |
| 2.3.3 水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞凋亡的影响 |
| 2.3.4 水蛭提取液对 WERI-RB-1 侵袭能力的影响 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 不同浓度药物对WER-Rb-1细胞活性的影响 |
| 2.5.2 流式细胞技术检测药物对细胞周期的影响 |
| 2.5.3 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞凋亡的影响 |
| 2.5.4 transwell 实验检测水蛭提取液对 WER-Rb-1 细胞侵袭能力的影响 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞活性的影响 |
| 2.6.2 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞周期的影响 |
| 2.6.3 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞凋亡影响 |
| 2.6.4 细胞凋亡与增殖 |
| 2.6.5 水蛭提取液对WER-Rb-1细胞侵袭能力的影响 |
| 第三部分 水蛭提取液对WER-Rb-1 细胞表达VEGF的影响及相关分子机制研究 |
| 3.1 实验细胞、试剂、耗材和仪器设备 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 3.1.3 主要实验设备仪器 |
| 3.2 实验方法与步骤 |
| 3.2.1 Elisa 实验检测水蛭提取液对 WERI-RB-1 细胞表达 VEGF 的影响 |
| 3.2.2 HIF-1a、MMP-9、VEGFR2 的实时定量RT-PCR检测 |
| 3.2.3 Western Blot法检测HIF-1a、MMP-9、PI3K、p-AKT蛋白表达 |
| 3.3 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Elisa 检测培养基上清中 VEGF 蛋白的表达 |
| 3.4.2 HIF-1a基因表达 |
| 3.4.3 MMP-9基因表达 |
| 3.4.4 Western Blot 检测各组 PI3K 和 p-AKT 蛋白的表达 |
| 3.4.5 Western Blot 检测各组 HIF-1a 和 MMP-9 蛋白的表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 VEGF、HIF-1a和 MMP-9 在肿瘤生成中的作用 |
| 3.5.2 PI3K/AKT信号通路在肿瘤疾病中的作用 |
| 3.5.3 水蛭素通过VEGF/PI3K/AKT通路及HIF-1a、MMP-9 因子抑制RB细胞 |
| 第四部分 水蛭提取液对HUVEC细胞活性及表达VEFG和VEGFR2的影响 |
| 4.1 实验细胞、试剂和仪器设备 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 主要实验试剂 |
| 4.1.3 主要实验设备仪器 |
| 4.2 实验方法与步骤 |
| 4.2.1 CCK-8法检水蛭提取液对测细胞活性的影响 |
| 4.2.2 RT- PCR 检测 VEGF 和 VEGFR2 基因表达 |
| 4.2.3 Western Blot法检测VEGF、VEGFR2 的蛋白表达 |
| 4.3 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 CCK-8法检水蛭提取液对测细胞活性及抑制率的影响 |
| 4.4.2 VEGFR2基因表达 |
| 4.4.3 VEGF基因表达 |
| 4.4.4 水蛭提取液对 HUVEC 细胞表达 VEGF 和 VEGFR2 蛋白的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 VEGF和 VEGFR2对血管生成的调控 |
| 4.5.2 水蛭提取液对HUVEC细胞表达VEGF和 VEGFR2的影响 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件 1 文献综述 水蛭的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件二 文献综述 视网膜母细胞瘤的生物标志物 |
| 参考文献 |
| 附件3 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 附件4 倒置显微镜下细胞形态 |
（3）榄香烯联合化疗药物对食管癌细胞增殖及PD-L1、PTEN/PI3K/AKT相关蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在研期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）氧化苦参碱对肿瘤抑制作用的研究进展（论文提纲范文）
| 1 抑制肿瘤细胞增殖 |
| 2 诱导肿瘤细胞分化凋亡 |
| 3 抑制肿瘤新生血管的形成 |
| 4 抑制肿瘤细胞黏度与浸润转移 |
| 5 抑制端粒酶的活性 |
| 6 增强化疗药物的敏感性 |
（5）氧化苦参碱对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 Rb细胞株的复苏培养 |
| 1.3 CHA最适浓度的筛选 |
| 1.4 实验分组并测定各组培养基LDH水平 |
| 1.5 Western |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 HXO-RB44细胞的培养情况 |
| 2.2 CHA最适浓度的筛选结果 |
| 2.3 CHA对培养基中LDH含量的影响 |
| 2.4 各组细胞Rb蛋白、p16、cyclin |
| 3 讨论 |
（7）视网膜母细胞瘤的发生机制及诊断和治疗进展（论文提纲范文）
| 1 视网膜母细胞瘤的发生机制 |
| 2 视网膜母细胞瘤的诊断和鉴别诊断 |
| 3 视网膜母细胞瘤的病理表现 |
| 4 视网膜母细胞瘤的MRI表现 |
| 5 视网膜母细胞瘤的B超表现 |
| 6 视网膜母细胞瘤的治疗进展 |
| 6. 1 放射治疗 |
| 6. 2 化学减容法 |
| 6. 3 激光光凝 |
| 6. 4 经瞳孔温热疗法 |
| 6. 5 冷冻疗法 |
| 6. 6 光动力疗法 |
| 6. 7 巩膜敷贴器放疗 |
| 6. 8 选择性动脉灌注化疗 |
| 6. 9 眼球摘除术 |
| 6. 10 新生血管形成抑制疗法 |
| 6. 11 基因治疗 |
| 6. 12 中药治疗 |
| 6. 13 音乐疗法 |
| 6. 14 转铁蛋白与细胞穿膜肽对视网膜母细胞瘤的靶向治疗 |
| 7 结论与展望 |
（8）沉默缺氧诱导因子HIF-1α基因对视网膜母细胞瘤生长与凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 缺氧诱导因子 HIF-1α在视网膜母细胞瘤中的表达及其意义 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 针对 HIF-1α基因的 RNA 干扰质粒的构建及其抑制效果检测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 质粒介导的 HIF-1α基因沉默对视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1 细胞生长、凋亡及下游基因的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 质粒介导的 HIF-1α基因沉默对裸鼠 RB 移植瘤生长、凋亡及新生微血管形成的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读学位期间已发表及待发表论文 |
| 致谢 |
（9）奥沙利铂体外对人视网膜母细胞瘤细胞Y79增殖及凋亡的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 在学期间的研究成果目录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
四、8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞抑癌基因表达的效应（论文参考文献）
- [1]姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究[D]. 陈水龄. 中国中医科学院, 2020(01)
- [2]水蛭提取液对视网膜母细胞瘤的抑制作用及相关分子机制研究[D]. 李园媛. 成都中医药大学, 2020(01)
- [3]榄香烯联合化疗药物对食管癌细胞增殖及PD-L1、PTEN/PI3K/AKT相关蛋白表达的影响[D]. 甄庆宇. 辽宁中医药大学, 2018(08)
- [4]氧化苦参碱对肿瘤抑制作用的研究进展[J]. 熊旋,李磊,王庆才. 海南医学, 2018(08)
- [5]氧化苦参碱对胃癌SGC-7901细胞株Ras/Raf通路的影响[D]. 熊旋. 泰山医学院, 2018(06)
- [6]绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用[J]. 赵静滨,何熹微,姚素艳,刘建生,郑德宇. 西安交通大学学报(医学版), 2016(05)
- [7]视网膜母细胞瘤的发生机制及诊断和治疗进展[J]. 陆烨,童剑萍. 现代肿瘤医学, 2016(06)
- [8]沉默缺氧诱导因子HIF-1α基因对视网膜母细胞瘤生长与凋亡的影响[D]. 夏天. 郑州大学, 2013(02)
- [9]奥沙利铂体外对人视网膜母细胞瘤细胞Y79增殖及凋亡的影响[D]. 周琦. 安徽医科大学, 2013(02)
- [10]纳米脂质体槲皮素联合8-Br-cAMP诱导人Rb44细胞恶性逆转化效应[J]. 郭慧丽,张明昌,李宝华,李金萍,吴景兰. 眼科新进展, 2010(07)