一、旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究（论文文献综述）
庄金秋,梅建国,张颖,姚春阳,李峰[1]（2017）在《猪旋毛虫病诊断方法研究进展》文中研究表明猪旋毛虫病是严重危害人类健康和畜牧业发展的人畜共患寄生虫病。猪旋毛虫对于肉品卫生影响严重,是我国肉品首检和必检项目。文章从病原学、血清学和分子生物学方面概述了猪旋毛虫病最新诊断方法,以期为肉品检疫人员、广大养殖业主及兽医科研工作者更好地诊断和防治该病提供参考。
葛兰云,耿明杰,周淑芹,周启扉,加春生,姜文博[2]（2013）在《肉用动物旋毛虫检测方法研究进展》文中认为旋毛虫病（trichinosis）是一种严重的人兽共患寄生虫病,肉品卫生检验中将旋毛虫检疫列为首要、必要项目。本文对肉用动物旋毛虫检测方法进行了综述,对更好地进行旋毛虫检验,做好动物性食品的卫生管理,控制人畜共患病的发生具有重要意义。
雷帅[3]（2009）在《旋毛虫P53ES基因重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定》文中研究说明旋毛虫病是由旋毛形线虫（Trichinella spiralis）引起的一种人兽共患寄生虫病,主要寄生于猪、野猪、鼠、熊等150多种动物及人体。人体主要因生食或半生食含有旋毛虫肌幼虫囊包的猪肉或其他动物肉类而感染。由于其病原传播的复杂性,以致该病发现一百多年来,不仅没有得到完全有效的控制,而且发生范围反而逐渐扩大。要迅速、有效地控制和预防旋毛虫病的流行,必须有快速准确的检测技术。本研究选用旋毛虫P53ES基因重组蛋白免疫小鼠制备McAb,为进一步研制旋毛虫病诊断试剂盒提供理想、必备的试验材料。以旋毛虫P53ES基因的重组蛋白免疫BALB/c鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA筛选和有限稀释法克隆,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水。Southern Biotechnology Associates,Inc的SBA ClonotypingTMSystem/AP对单克隆抗体进行亚类鉴定;采用ELISA间接法测定杂交瘤细胞上清液和小鼠腹水效价;Western-blot检测单克隆抗体的特异性;测定杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性;间接ELISA检测单克隆抗体与隐孢子虫、猪鞭虫、猪囊尾蚴囊液抗原、多头蚴囊液、日本血吸虫抗原是否存在交叉反应;间接免疫荧光方法检测单克隆抗体与肌幼虫的免疫学反应。结果表明:得到两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2H5和3D2;试剂盒鉴定两株McAb均属IgM亚类,其轻链均为κ链;腹水效价分别为1:24000和1:12000;Western-blot证实两株McAb均能与约53ku处的ES抗原反应,出现特异性条带;杂交瘤细胞株连续传20代,细胞生长良好,效价稳定;所得单抗与隐孢子虫、猪鞭虫、猪囊尾蚴囊液抗原、多头蚴囊液、日本血吸虫抗原均无交叉反应;间接免疫荧光试验结果表明单克隆抗体与肌幼虫发生免疫学反应。本研究成功制备了两株抗旋毛虫P53ES重组蛋白的单克隆抗体,为旋毛虫病的研究和研制旋毛虫病诊断试剂盒奠定了基础。
于艳玲[4]（2008）在《旋毛虫早期识别性单克隆抗体的制备及鉴定》文中认为旋毛虫病是由旋毛虫（Trichinella spiralis）引起的一种呈全球性分布的人兽共患寄生虫病,可感染人及150多种动物,在我国该病仍有发生,不仅给畜牧业生产和肉品工业造成巨大的经济损失,而且严重威胁着人民群众的身体健康。旋毛虫病的临床表现症状一般不具典型特征,临床诊断较为困难,易与其他传染病相混淆。虽然肌肉活检发现幼虫或包囊虽可确诊,但在轻度感染早期往往不易检出,即使是感染晚期,因组织局限性的影响,活检阳性率也只有50%左右,且不易被人们接受。为此,寻找一种特异性强、敏感性高的诊断方法对旋毛虫病的防治具有重要意义。免疫学方法ELISA是目前最为敏感的方法,其敏感性可检测至每克肉0.01条虫体即每公斤肉含虫量少于10条,这一敏感性可完全确保肉类的安全,然而实验表明,用旋毛虫肌幼虫ES抗原为诊断抗原检测血清中抗旋毛虫抗体在感染2周后才可检出,而循环抗原（CAg）即排泄分泌（ES）抗原在最初几天就可检测到。因此,检测CAg是解决旋毛虫病早期诊断一个很有效的方法。为实现旋毛虫病的早期诊断,我们选用旋毛虫新生幼虫ES抗原作为筛选抗原,通过反复攻虫的免疫方法和单克隆抗体的制备技术获得了三株抗旋毛虫新生幼虫ES的单克隆抗体。通过免疫荧光实验我们发现这三株单克隆抗体可以与新生幼虫裸虫及感染早期的旋毛虫发生反应。证明我们所制备的单克隆抗体可以用于旋毛虫病的早期诊断。此外,我们还用所制备的单克隆抗体建立了旋毛虫病早期诊断双抗体夹心ELISA方法,为建立检测旋毛虫CAg早期诊断旋毛虫病的诊断试剂盒和试纸条奠定了基础。
杜军,李树清[5]（2008）在《浅谈旋毛虫病》文中研究指明旋毛虫病是由毛形科的旋毛虫成虫和幼虫引起的人畜共患寄生虫病。其成虫寄生于宿主的肠内（肠旋毛虫）,幼虫寄生于各部（横纹肌）肌肉（肌旋毛虫）,且形成包囊,当人和动物食用生的或未烧熟的旋毛虫病畜肉后,即可感染旋毛虫病。包括人类在内,旋毛虫可侵害的动物达150多种。在我国猪、狗、猫都有感染,是禽间旋毛虫病传播的重要来源。该病至今尚未得到完全有效的控制,并且发生的范围有扩大的趋势,成为一种全球性疾病,严重危害着人身健康,给畜收业及食品工业带来重大的经济损失。
陈莹,徐明显,梁益溢,黄树兴[6]（2007）在《屠宰猪旋毛虫检疫的现状》文中认为近20多年内随着人们肉食的增加旋毛虫感染率有增高的趋势,世界许多地区又出现了人体旋毛虫病,我国人旋毛虫病发病率也正呈上升和扩散趋势,猪肉及其制品目前仍是世界上本病的主要传染源,尤其是在发展中国家。旋毛虫病作为肉类食品安全性的一个重要指标已越来越受到关注,各国为预防和控制人、畜旋毛虫病都加强了对旋毛虫感染肉食品的兽医卫生检验及无害化处理,因此,为预防和控制人、畜旋毛虫病,屠宰猪旋毛虫的检疫,尤其最大限度地减少漏检变得更为重要。本文对屠宰猪检疫现状、检疫方法及今后发展做一综述。
马金友,余燕[7]（2007）在《免疫学方法在旋毛虫病诊断中的应用》文中认为旋毛虫病是一种重要的人畜共患寄生虫病,主要是由未加工熟的受感染肉食食品传给人类。综述了在传统病原学检测的基础上,利用现代免疫学方法对旋毛虫病检测的发展过程,对旋毛虫病新的诊断方法进行了展望。
王君[8]（2007）在《黑龙江猪旋毛虫43ku ES抗原基因的克隆与表达》文中认为旋毛虫病（Trichinosis）是在世界范围内流行的人兽共患寄生虫病。旋毛虫相对分子质量43000分泌-排泄抗原（Trichinella Spiralis 43 Excretory-Secretory antigen，Ts43 ES）是旋毛虫ES抗原中主要功能性抗原之一，且与旋毛虫包囊的形成相关。根据GenBank中编码旋毛虫Ts43基因的cDNA序列（M95499），设计并合成引物，利用RT-PCR方法获得黑龙江猪旋毛虫Ts43基因后，成功克隆Ts43基因，与参考序列的同源性为99.61％，氨基酸序列同源性为99.13％；在此基础上成功地构建了旋毛虫肌幼虫ES抗原基因Ts43基因片段（不含信号肽）的原核表达载体pET32a-Ts43和真核表达载体pcDNA3.1／CT-GFP-Ts43。成功构建Ts43基因的原核表达载体pET32a-Ts43后，重组子转化大肠杆菌BL-21，经IPTG诱导后获得高效表达，产物为55ku的融合蛋白，并以包涵体的形式存在，表达量达到菌体总蛋白的22.6％，间接ELISA分析证明纯化复性后的原核表达产物活性有所提高，但不是很理想。真核表达载体pcDNA3.1／CT-GFP-Ts43经Lipofectamine 2000脂质体转染在Vero E6（非洲绿猴肾细胞）中进行了表达，GFP标签证明真核表达载体pcDNA3.1-CT-GFP-Ts43质粒转染Vero E6细胞24h后，目的基因即在Vero E6细胞中有所表达，72h达到高峰；Western-blotting分析显示Vero E6细胞中表达的融合蛋白可被黑龙江省猪源旋毛虫阳性小鼠血清识别，目的条带位置与预测基本一致，约66ku，说明表达产物具有一定的免疫学活性。本研究发现Ts43基因结构基因保守性很高，在旋毛虫分类上具有重要意义；原核重组表达载体表达的蛋白复性后活性提高不多；真核重组表达载体pcDNA3.1-CT-GFP在Vero E6细胞中表达的融合蛋白可为旋毛虫的免疫诊断、疫苗研制和旋毛虫包囊形成机理的研究进一步提供分子生物学基础，也可成为获得天然结构的Ts43蛋白以研究其在旋毛虫包囊形成的过程中起到的作用和机理的一个途径。
杨志东[9]（2007）在《旋毛虫、伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库的构建及其免疫学筛选》文中进行了进一步梳理旋毛虫病是一种危害非常严重的食源性人兽共患病,是世界各国屠宰动物首检和强制性必检的人兽共患病病种。在我国其不但被列为三大人重要食源性人兽共患寄生虫病之首（旋毛虫,囊虫及棘球蚴）,同时也是烈性人兽共患病（如SARS、禽流感）流行之后突现出来的可长期和经常制造突发性重大公共卫生事件的典型病种。本研究通过分子生物学技术构建旋毛虫、伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库,利用免疫学方法对两个文库进行筛选,分离其特异性基因,从而为旋毛虫的诊断性及保护性抗原的筛选及大量制备奠定基础。本研究从旋毛虫肌幼虫中提取总RNA,并分离mRNA,通过ZAP表达载体成功构建了中国河南猪旋毛虫分离株肌幼虫cDNA文库。鉴定结果表明:库容量为1.92×106,重组率为98. 6 %,文库扩增后的滴度为1.6×109 pfu/mL。然后,以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对本文库进行免疫学筛选,经初筛、复筛,共筛选出15个阳性克隆,得到一个强反应原性高拷贝的旋毛虫肌幼虫cDNA分子（WM5）,其编码丝氨酸蛋白酶抑制剂（serine protease inhibitor）,与日本Nagano注册的cDNA相比同原性很高,仅有3个核苷酸不同,2个氨基酸发生变化。本研究者等人认为这两个核苷酸的变异可能是由旋毛虫不同分离株的单核苷酸多态性（SNP）所致,且该三个核苷酸的变异是我国旋毛虫T. spiralis种分离株该cDNA的特异性和特征性SNP标记。本实验获得了大量丝氨酸蛋白酶抑制剂,有望成为旋毛虫病的诊断抗原基因,并为基因重组诊断抗原的进一步研究奠定基础。同时,对研究国内外物种侵入及肉类进出口具有重要意义。利用上述方法我们又成功构建了罗马尼亚猪伪旋毛虫分离株T4肌幼虫cDNA文库。鉴定结果表明:容量为4.0×106,重组率为95.4 %,文库扩增后的滴度为1.5×109pfu/ mL。应用伪旋毛虫感染猪血清对伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫筛选,获得44个阳性噬菌斑。选择其中27个反应信号相对较强的阳性克隆噬菌斑进行测序。发现11个克隆编码同一个未曾报道过的新基因;即编码蛋白酶激活因子亚基（Proteasome activator subunit）,根据筛选实验中反应信号强弱情况及序列分析结果推断,强反应原性高拷贝的编码蛋白酶激活因子亚基的cDNA分子,有望成为伪旋毛虫病的诊断抗原基因,为筛选和克隆伪旋毛虫功能性抗原基因的深入研究奠定基础。
来利红[10]（2006）在《实验感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体水平的观察》文中研究指明旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病，主要因生食或半生食含有旋毛虫幼虫囊包的猪肉或其它动物肉类而感染。因此，对肉类及肉制品中进行旋毛虫检疫是旋毛虫病防治工作的重要内容。目前用于肉类中旋毛虫检疫的方法有旋毛虫镜检查法和人工消化法，但前者的敏感性低，而后者操作较复杂不易推广应用。由于IgG抗体在宿主血液和组织液内均有分布，应用免疫学方法从动物肉汁中进行抗旋毛虫抗体的检测有望用于旋毛虫的检疫。然而，关于动物感染旋毛虫后肉汁中抗体水平的动态变化尚未见报道。鉴于此，本文应用旋毛虫小鼠动物模型，通过间接ELISA对不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间血清和肉汁的抗体水平进行了研究；并对小鼠肌肉在不同温度下保存不同时间后肉汁抗体水平的动态变化进行了观察。 材料和方法 1．对ELISA检测旋毛虫感染小鼠肉汁抗体的最适条件进行了选择，包括抗原的最适包被浓度及血清最佳稀释度，酶标二抗、肉汁最佳稀释液及最佳稀释度的选择。 2．将300只健康昆明小鼠随机分成3组，每组100只。每组分别感染旋毛虫100条／只（轻度感染组）、300条／只（中度感染组）和500条／只（重度感染组），观察小鼠感染不同剂量旋毛虫后不同时间（1-18周）血清及肉汁抗体水平的变化。 3．将32只健康昆明小鼠随机分为4组，每组8只。每只分别感染50、100、300、500条旋毛虫，感染6后周观察小鼠膈肌虫荷与血清及肉汁抗体水平的关系。 4．将70只健康昆明小鼠随机分成5组，每组14只。5组分别感染不同种的旋毛虫（旋毛虫、乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫），每只感染500条幼虫。感染后
二、旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究（论文提纲范文）
（1）猪旋毛虫病诊断方法研究进展（论文提纲范文）
| 1 病原学诊断方法 |
| 1.1 压片镜检法 |
| 1.2 集样消化法 |
| 2 血清学诊断方法 |
| 2.1 凝集试验 |
| 2.2 间接荧光抗体试验 |
| 2.3 沉淀试验 |
| 2.4 免疫酶染色试验 |
| 2.5 酶联免疫吸附试验 |
| 2.6 胶体金免疫层析试纸条法 |
| 3 分子生物学诊断方法 |
| 4 小结 |
（2）肉用动物旋毛虫检测方法研究进展（论文提纲范文）
| 1 引言 |
| 2 旋毛虫检测方法 |
| 2.1 压片镜检法 |
| 2.2 集样消化法 |
| 2.3 液相基因芯片检测 |
| 2.4 ELISA检测 |
| 2.5 免疫荧光技术 |
| 2.6 胶体金检测技术 |
| 2.7 DNA检测技术 |
| 3 结语 |
（3）旋毛虫P53ES基因重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 旋毛虫及旋毛虫病 |
| 1.2 旋毛虫病的流行状况 |
| 1.3 旋毛虫诊断方法的研究进展 |
| 1.3.1 病原学诊断 |
| 1.3.2 免疫学诊断 |
| 1.4 旋毛虫诊断抗原的研究进展 |
| 1.4.1 虫体抗原 |
| 1.4.2 表面抗原 |
| 1.4.3 杆细胞颗粒相关抗原 |
| 1.4.4 排泄-分泌抗原(ES 抗原) |
| 1.4.5 旋毛虫重组抗原 |
| 1.5 旋毛虫单克隆抗体的研究 |
| 1.6 本课题研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 实验动物和细胞 |
| 2.1.3 旋毛虫虫种 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要溶液的配制 |
| 2.1.6 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 P53 重组蛋白的表达与纯化 |
| 2.2.2 ES 抗原制备方法 |
| 2.2.3 旋毛虫阴性及阳性血清的制备 |
| 2.2.4 动物的免疫 |
| 2.2.5 间接ELISA 检测方法的建立 |
| 2.2.6 单克隆抗体的制备 |
| 2.2.7 单克隆抗体及杂交瘤细胞的特性鉴定 |
| 3 结果 |
| 3.1 P53 重组蛋白的表达与纯化 |
| 3.1.1 P53 重组蛋白的SDS-PAGE 分析 |
| 3.1.2 纯化后P53 重组蛋白浓度的测定 |
| 3.1.3 重组蛋白的Western-blot 分析 |
| 3.2 细胞融合与筛选 |
| 3.2.1 ELISA 筛选方法的建立 |
| 3.2.2 细胞融合率的计算 |
| 3.2.3 阳性杂交瘤细胞的筛选与建立 |
| 3.3 杂交瘤细胞的鉴定 |
| 3.3.1 杂交瘤细胞的染色体分析 |
| 3.3.2 杂交瘤分泌抗体稳定性鉴定 |
| 3.4 单克隆抗体的鉴定 |
| 3.4.1 杂交瘤细胞培养上清液效价的测定 |
| 3.4.2 腹水单抗效价测定 |
| 3.4.3 抗体亚类鉴定结果 |
| 3.4.4 Western-blot 鉴定 |
| 3.4.5 单克隆抗体交叉反应 |
| 3.4.6 间接免疫荧光试验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 免疫原的选择 |
| 4.2 细胞的融合和克隆 |
| 4.3 单克隆抗体的特异性 |
| 4.4 间接免疫荧光试验 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）旋毛虫早期识别性单克隆抗体的制备及鉴定（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 旋毛虫病诊断方法研究进展 |
| 1.1 酶联免疫吸附试验（ELISA） |
| 1.2 免疫印迹技术（ＷESTERN–BLOTTING） |
| 1.3 间接荧光抗体试验（IFAT） |
| 1.4 斑点免疫金渗滤法 |
| 1.5 免疫聚合酶链反应法(IMMUNO-PCR) |
| 1.6 DNA 检测技术 |
| 1.7 一步快速诊断试纸法 |
| 第二章 旋毛虫病诊断抗原的研究进展 |
| 2.1 虫体抗原 |
| 2.2 表面抗原 |
| 2.3 杆细胞颗粒相关抗原 |
| 2.4 旋毛虫排泄/分泌(EXCRETORY-SECRETORY，ES)抗原 |
| 2.4.1 ES 抗原的成分组成 |
| 2.4.2 ES 抗原在免疫诊断中的应用 |
| 2.4.3 ES 抗原在免疫预防中的应用 |
| 2.5 旋毛虫重组抗原 |
| 2.5.1 旋毛虫基因重组抗原在免疫诊断方面的研究 |
| 2.5.2 旋毛虫基因重组抗原在免疫预防方面的研究 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 人工感染旋毛虫昆明小鼠血清抗体动态变化研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 旋毛虫虫株 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 试剂及耗材 |
| 1.1.4 液体配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 抗原制备 |
| 1.2.2 血清制备 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 抗原的制备 |
| 1.3.2 抗原包被量和二抗工作浓度的确定 |
| 1.3.3 三种不同的抗原检测旋毛虫感染小鼠血清抗体应答 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 旋毛虫新生幼虫排泄分泌抗原单克隆抗体的制备及鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 旋毛虫新生幼虫ES 抗原的制备 |
| 2.2.2 免疫小鼠血清抗体效价的测定 |
| 2.2.3 细胞融合、杂交瘤细胞的选择性培养及单克隆抗体类型鉴定 |
| 2.2.4 杂交瘤细胞及单克隆抗体特性鉴定 |
| 2.2.5 腹水中单克隆抗体（IgG）的纯化和纯度测定 |
| 2.2.6 亲和力测定 |
| 2.2.7 特异性和交叉性检测 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 关于小鼠的免疫 |
| 2.3.2 关于细胞融合及培养 |
| 2.3.3 关于杂交瘤细胞株的筛选 |
| 2.3.4 关于杂交瘤细胞的克隆 |
| 2.3.5 关于单克隆抗体的纯化 |
| 2.3.6 关于单抗亲和力和特异性 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 抗旋毛虫新生幼虫ES 单克隆抗体的免疫学定位研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 免疫荧光染色检测三株单克隆抗体分别在旋毛虫不同发育时期的定位情况 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 旋毛虫病早期诊断双抗体夹心ELISA 方法的建立 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 酶标反应板均一性检测 |
| 4.2.2 多抗最适包被浓度和单克隆抗体最适工作浓度的确定 |
| 4.2.3 多抗包被条件的确定 |
| 4.2.4 酶标二抗反应浓度的确定 |
| 4.2.5 酶标二抗反应时间的确定 |
| 4.2.6 底物反应时间的确定 |
| 4.2.7 敏感性检测 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师及作者简介 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
（7）免疫学方法在旋毛虫病诊断中的应用（论文提纲范文）
| 1 病原学诊断 |
| 2 免疫学诊断及存在的问题 |
| 2.1 免疫学诊断 |
| 2.2 存在的问题 |
| 3 结语 |
（8）黑龙江猪旋毛虫43ku ES抗原基因的克隆与表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 我国旋毛虫病的流行分布情况 |
| 1.2 旋毛虫肌幼虫ES抗原的研究进展 |
| 1.2.1 抗原的分类 |
| 1.2.2 旋毛虫肌幼虫ES抗原在诊断应用 |
| 1.2.3 旋毛虫肌幼虫ES抗原在保护方面的研究 |
| 1.3 Ts43ku ES抗原的研究进展 |
| 1.4 研究的目的与意义 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 虫种 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 引物 |
| 2.1.4 克隆与表达所用材料 |
| 2.1.5 旋毛虫ES抗原、阳性与阴性血清 |
| 2.1.6 ELISA所需溶液 |
| 2.1.7 主要试剂 |
| 2.1.8 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 旋毛虫肌幼虫的收集 |
| 2.2.2 旋毛虫阳性血清及阴性血清的制备 |
| 2.2.3 目的基因的分子克隆和鉴定 |
| 2.2.4 Ts43ku ES抗原基因原核表达与鉴定 |
| 2.2.5 Ts43ku ES结构基因的真核表达与鉴定 |
| 3 结果 |
| 3.1 虫体收集 |
| 3.2 总RNA检测 |
| 3.3 目的基因的RT-PCR扩增 |
| 3.4 目的基因的分子克隆和鉴定 |
| 3.5 目的基因的原核表达 |
| 3.5.1 重组质粒pET32a-Ts43的鉴定 |
| 3.5.2 诱导表达蛋白的分析 |
| 3.5.3 复性前后的蛋白间接ELISA分析 |
| 3.6 目的基因的真核表达 |
| 3.6.1 重组质粒pcDNA3.1-CT-GFP-Ts43的鉴定 |
| 3.6.2 pcDNA3.1-CT-GFP-Ts43在Vero E6细胞中的瞬时表达 |
| 3.6.3 Western-blotting检测目的基因 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Ts43基因的克隆与重组质粒的构建 |
| 4.2 相关表达载体的选择 |
| 4.2.1 原核表达载体的选择 |
| 4.2.2 真核表达载体的选择 |
| 4.3 Ts43目的基因的表达 |
| 5.结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（9）旋毛虫、伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库的构建及其免疫学筛选（论文提纲范文）
| 提要 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 旋毛虫分子生物学研究进展 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 旋毛虫肌幼虫cDNA 文库的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 伪旋毛虫肌幼虫cDNA 文库的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 旋毛虫肌幼虫cDNA 文库的免疫学筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 伪旋毛虫肌幼虫cDNA 文库的免疫学筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| CURRICULUM VITAE |
| Personal Date of Master Candidate |
（10）实验感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体水平的观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 旋毛虫病的简介 |
| 1.2 旋毛虫病的危害及流行现状 |
| 1.3 旋毛虫病的检测方法 |
| 1.4 本实验研究的目的、内容及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 主要试剂的配置 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 实验动物 |
| 2.5 旋毛虫虫株 |
| 2.6 实验血清 |
| 2.7 旋毛虫肌幼虫的收集 |
| 2.8 抗原的制备 |
| 2.9 ELISA最适条件的选择 |
| 2.10 感染旋毛虫小鼠血清及肉汁抗体检测 |
| 2.11 小鼠感染不同种旋毛虫后血清及肉汁抗体检测 |
| 2.12 感染旋毛虫小鼠肌肉保存不同时间后肉汁抗体检测 |
| 2.13 间接法ELISA的操作步骤 |
| 2.14 统计学分析方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 ELISA检测旋毛虫抗体最适条件的选择 |
| 3.2 小鼠感染旋毛虫后不同时间血清及肉汁抗体水平的动态变化 |
| 3.3 感染旋毛虫小鼠膈肌虫荷与抗体水平的关系 |
| 3.4 感染不同种旋毛虫小鼠每克膈肌虫荷及抗体水平的比较 |
| 3.5 感染旋毛虫小鼠肌肉在保存不同时间后肉汁中抗体水平的变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 旋毛虫病的ELISA检测 |
| 4.2 ES抗原及可溶性抗原的比较 |
| 4.3 HRP-SPA及HRP-羊抗鼠IgG的比较 |
| 4.4 肉汁样本在ELISA检测中的应用 |
| 4.5 小鼠感染旋毛虫后不同时间抗体水平的动态变化 |
| 4.6 感染旋毛虫小鼠每克膈肌虫荷与抗体水平的比较 |
| 4.7 感染不同种旋毛虫小鼠虫荷与抗体水平的比较 |
| 4.8 感染旋毛虫肉样保存不同时间后的抗体水平变化 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 附录 |
| 致谢 |
四、旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究（论文参考文献）
- [1]猪旋毛虫病诊断方法研究进展[J]. 庄金秋,梅建国,张颖,姚春阳,李峰. 猪业科学, 2017(09)
- [2]肉用动物旋毛虫检测方法研究进展[J]. 葛兰云,耿明杰,周淑芹,周启扉,加春生,姜文博. 中国动物检疫, 2013(11)
- [3]旋毛虫P53ES基因重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[D]. 雷帅. 东北农业大学, 2009(02)
- [4]旋毛虫早期识别性单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 于艳玲. 吉林大学, 2008(07)
- [5]浅谈旋毛虫病[A]. 杜军,李树清. 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集, 2008
- [6]屠宰猪旋毛虫检疫的现状[A]. 陈莹,徐明显,梁益溢,黄树兴. 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集, 2007
- [7]免疫学方法在旋毛虫病诊断中的应用[J]. 马金友,余燕. 贵州农业科学, 2007(04)
- [8]黑龙江猪旋毛虫43ku ES抗原基因的克隆与表达[D]. 王君. 东北农业大学, 2007(02)
- [9]旋毛虫、伪旋毛虫肌幼虫cDNA文库的构建及其免疫学筛选[D]. 杨志东. 吉林大学, 2007(02)
- [10]实验感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体水平的观察[D]. 来利红. 郑州大学, 2006(11)