一、心肌缺血预适应在急性心肌梗死中的临床意义（论文文献综述）
仲红艳[1]（2021）在《抑制miR-760-3p对H2O2诱导H9c2细胞凋亡的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:急性心肌梗死是世界上最严重的致命性疾病,再灌注可恢复缺血组织冠状动脉血流,有利于逆转心肌缺血,是最有效的治疗策略。但是通过冠状动脉介入或药物溶栓等再灌注治疗本身也可能会造成心肌损伤,导致心肌细胞凋亡甚至心脏骤停等严重后果。研究表明,心肌损伤的程度不仅取决于缺血期,也取决于再灌注引起的第二波细胞损伤,其占全部损伤的50%[1]。虽然有很多研究探索心肌缺血再灌注损伤的治疗措施,并在动物和细胞实验中得到证实,但是将这些有益的策略转化为临床应用时却往往令人失望。研究提示细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤的主要机制[2],抑制心肌细胞凋亡可减少心肌梗死范围。miRNA是一种小的非编码RNA分子,具有多种生物学功能,通过与靶基因3’-非翻译区完全或不完全互补配对,在转录后水平对靶基因表达进行负向调控或抑制其翻译,下调相应蛋白表达。miRNA的异常表达水平与多种心脏疾病的发病机制有关,越来越多的证据表明,miRNA在心肌缺血再灌注损伤过程中表达异常,提示其参与心肌缺血再灌注损伤的发展[3]。另外,PI3K/AKT是细胞内最强的促生存信号通路之一,研究表明激活PI3K/AKT信号通路可以减少再灌注引发的心肌细胞凋亡,缩小心肌梗死范围[4,5]。研究发现miR-26a-5p通过抑制其靶基因PTEN表达,促进PI3K/AKT磷酸化,从而减少心肌细胞凋亡,提高心肌细胞活力,发挥保护心肌细胞的作用[4]。研究发现miR-506在大鼠心肌损伤中异常表达,与正常对照组相比较,心肌I/R损伤组大鼠miR-506表达水平降低,而过表达miR-506可通过PI3K/AKT信号通路减轻心肌损伤[6]。但是,miR-760-3p在心肌I/R损伤中的作用尚不清楚。H2O2被广泛应用于体外细胞模型中,以诱导I/R损伤过程中的细胞凋亡[7],因此本研究使用H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡。目的:1.研究miR-760-3p在H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡模型中表达情况;2.研究miR-760-3p在H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡模型中的作用及机制,为探索心肌I/R损伤治疗方法提供一定的实验依据。方法:过氧化氢溶液诱导H9c2心肌细胞凋亡构建体外损伤模型,应用CCK8试剂盒检测确定合适的干预条件;接着通过蛋白质免疫印迹（Western Blot）实验测试凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）表达情况,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况,据此明确体外建模成功;利用RT-PCR检测H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡后miR-760-3p表达情况;应用细胞转染miR-760-3p inhibitor,通过Western Blot和流式细胞术检测细胞凋亡情况;应用TargetScan 7.2在线数据库预测miR-760-3p的靶基因,并且通过DAVID6.8数据库将这些靶基因进行GO和KEGG富集分析以此推测miR-760-3p可能的生物学功能;应用LY294002抑制PI3K及其下游AKT磷酸化从而阻断PI3K/AKT信号通路。结果:与正常对照组相比,miR-760-3p在H2O2诱导细胞凋亡中表达上调（P<0.05）,而抑制miR-760-3p表达,Western Blot检测促细胞凋亡蛋白（Cleaved caspase-3和Bax）减少,抗细胞凋亡蛋白（Bcl-2）增加,流式细胞术检测细胞凋亡减少（P<0.05）;与单独H2O2处理组相比,Western Blot 检测 H2O2+miR-760-3p inhibitor 组 p-AKT 蛋白增加,流式细胞术检测 H2O2+miR-760-3pinhibitor 组细胞凋亡减少（P<0.05）;TargetScan7.2在线数据库预测miR-760-3p靶基因共有347个,这些靶基因生物学过程主要涉及细胞代谢、黏附、磷脂酰肌醇3-激酶信号调节等过程,分子功能主要涉及细胞黏附、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸-3-激酶活性等,细胞定位主要在核小体、质膜、外泌体等,KEGG信号通路主要涉及系统性红斑狼疮、癌症转录调控失调、ErbB信号通路、磷脂酰肌醇信号通路等（P<0.05）;通过p-AKT蛋白和流式细胞检测,发现与H2O2+miR-760-3p inhibitor 干预组相比,H2O2+miR-760-3pinhibitor+LY294002 共同干预组p-AKT 蛋白减少,细胞凋亡增加（P<0.05）,提示LY294002抑制剂可能阻断miR-760-3pinhibitor的抗细胞凋亡作用。结论:miR-760-3p在H2O2诱导细胞凋亡中表达上调,这对细胞是有害的,而抑制miR-760-3p表达对细胞是有益的,且可能是通过激活PI3K/AKT通路减少细胞凋亡。
李宇炀[2]（2021）在《远隔缺血训练对冠心病血管新生、内皮功能及心功能的影响》文中进行了进一步梳理[目的]本项目旨在观察远隔骨骼肌缺血训练对稳定性冠心病患者血管新生因子（VEGF、bFGF）及内皮功能因子（ET-1、NO）、单光子发射计算机断层成像术（SPECT）的静息节段总评分（SRS）、总灌注缺损面积（TPD）及心脏彩超、心肺运动试验等心功能相关指标的影响,探索远隔骨骼肌缺血训练是否能促进稳定性冠心病（SCAD）患者血管新生、改善内皮功能及心功能,为冠心病患者寻找新的安全有效的运动康复方案提供依据。[方法]本研究选取2019年6月至2020年10月昆明市延安医院门诊体检及住院患者为研究对象,共46例,分为对照组（A组）10例,SCAD 36例;其中将SCAD分为亚运动康复组（B组）12例,运动康复组（C组）12例,运动康复+远隔缺血训练组（D组）12例,所有研究对象在研究前进行心肺运动试验进行运动评估,并为稳定性冠心病患者制定心脏康复运动处方,其中亚运动康复组未按照运动处方行运动康复,运动康复组规律进行传统运动康复,运动康复+远隔缺血训练组在传统运动康复基础上加用远隔缺血训练方案。测定各组试验前及试验3月后外周碱性成纤维生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）,一氧化氮（NO）,内皮素-1（ET-1）,并在各组试验前后行心脏彩超（echocardiography）,收集左室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期内径（LVED）数据,同时行心肺运动试验（CPET）,获得峰值摄氧量（V02peak）、每公斤体重峰值摄氧量（VO2peak/kg）、无氧阈时的摄氧量（VO2@AT）、每公斤体重无氧阈时摄氧量（VO2@AT/kg）、峰值代谢当量（Peak Mets）、无氧阈时代谢当量（Mets@AT）、峰值氧脉搏（Peak O2pulse）数据,并于试验3月后完善A、B、C、D组SPECT,收集各组间静息节段总评分（SRS）、总灌注缺损面积（TPD）,其中D组收集试验前后SRS、TPD,并进行以上数据的对比、分析。[结果]1.实验前,A、B、C、D组在一般情况资料的比较上差异无显着性（P>0.05）。2.比较A、B、C、D组试验前数据,结果示:①试验前,与A组相比,B、C、D组 ET-1 升高、NO 降低;VEFG、bFGF 升高;LVEF 升高、LVED降低,V02peak、VO2peak/kg、VO2@AT、VO2@AT/kg、PeakMets、Mets@AT、PeakO2pulse 降低（P<0.05）;②试验前B、C、D组组间上述数据差异均无显着性（P>0.05）。3.将B、C、D组试验3月前后数据进行比较,结果示:①B组试验后较试验前VEGF、bFGF、ET-1、NO、LVEF、LVED、V02peak、VO2peak/kg、VO2@AT、VO2@AT/kg、PeakMets、Mets@AT、PeakO2pulse均无显着差异（P>0.05）。②C组试验后较试验前,NO升高,ET-1 降低;VEGF、bFGF 升高;LVEF 升高;VO2peak、VO2peak/kg、VO2@AT、VO2@AT/kg、PeakMets、Mets@AT、PeakO2pulse 升高;③D 组试验后较试验前,NO升高、ET-1 降低;VEGF、bFGF 升高;LVEF 升高、LVED 降低;VO2peak、VO2peak/kg、VO2@AT、VO2@AT/kg、PeakMets、Mets@AT、PeakO2pulse 升高,差异具有显着性（P<0.05）。4.将B、C、D组试验前后差值进行组间对比,结果示:①与B组相比,C组试验后NO升高更多,ET-1降低更多;VEGF、bFGF均升高更多;LVEF升高更多;VO2peak、VO2peak/kg、VO2@AT、PeakMets升高更多;②与B组相比,D组试验后NO升高更多,ET-1降低更多;VEGF、bFGF均升高更多;LVEF升高更多、LVED降低更多;VO2peak、VO2peak/kg、VO2@AT、VO2@AT/kg、PeakMets、Mets@AT、PeakO2pulse升高更多。③与C组相比,D组试验后NO升高更多,ET-1降低更多;VEGF、bFGF升高更多;LVEF 升高更多、LVED 降低更多,VO2peak、VO2peak/kg、PeakO2pulse升高更多,差异具有显着性（P<0.05）。5.试验后,比较A、B、C、D组SRS、TPD数据,结果显示:与A组相比,B、C、D组SRS、TPD均升高;②与B组相比,C、D组SRS、TPD降低;③与C组相比,D组SRS、TPD降低,差异具有显着性（P<0.05）。6.D组试验3月后较试验前SRS、TPD降低（P<0.05）。[结论]1.稳定性冠心病患者可能存在血管内皮功能障碍、血管新生因子异常及心功能下降情况。2.未严格地进行运动康复可能不能帮助稳定性冠心病患者改善血管内皮功能及血管新生,且可能不能帮助其改善心功能。3.按照科学的运动处方进行运动康复可能能够让稳定性冠心病患者内皮功能及血管新生情况得以改善,并可能促进其心功能的改善。4.在按照科学的运动处方进行严格的运动康复基础上加上远隔缺血训练可能能够帮助稳定性冠心病患者的内皮功能及血管新生情况进一步改善,促进其心肌侧枝循环建立,并进一步帮助其改善心功能。
苑建齐[3]（2020）在《自噬相关蛋白在运动预适应内源性心肌保护效应中的变化及机制研究》文中指出研究目的:反复短时间大强度间歇有氧运动能提高心肌耐受缺血缺氧的能力,能够减轻后续长时间心肌缺血缺氧损伤,这种通过运动诱导机体产生内源性心肌保护效应的方式,称为运动预适应（exercise preconditioning,EP）。EP可分为EP诱导期（induction of exercise preconditioning,IEP）和EP保护期（protection of exercise preconditioning,PEP）。目前,EP内源性心肌保护效应已得到证实,但其机制一直在研究,其中EP与细胞自噬关系的研究尚待深入探讨。本研究目的在于在通过细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、Cathepsin D和p62,探讨细胞自噬与EP内源性心肌保护的关系,通过使用自噬阻滞剂渥漫青霉素Wormanmin,探讨细胞自噬是否参与EP心肌保护效应,为EP心肌保护效应的研究提供更新的理论和实验依据。研究方法:（1）150只雄性健康SD大鼠,建立EP降低大强度运动造成心肌损伤的EP心肌保护动物模型,包括C组（对照组）,早期EP组（EEP组）和晚期EP组（LEP组）采用4次30 m/min,0°坡度,运动10 min,休息10 min的间歇大强度跑台运动,建立EP模型;大强度运动组（HE组）采用35 m/min,0°坡度,3 h的跑台运动建立大强度运动心肌损伤模型;早期EP保护组（EEP+HE组）和晚期EP保护组（LEP+HE组）分别在EP运动后0.5 h和24 h实施大强度运动。通过检测血浆心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I,cTnI）浓度并结合心肌组织缺血缺氧C-2R BG染色,综合评价心肌缺血缺氧损伤与保护程度。通过心肌缺血缺氧C-2R BG染色与细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、Cathepsin D和p62免疫组化相邻切片比照,探讨缺血缺氧与细胞自噬的关系。通过免疫组织化学染色和免疫印迹实验观察和检测细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、Cathepsin D和p62在心肌组织的表达,探讨细胞自噬与EP减轻大强度运动心肌损伤内源性心肌保护之间的关系。（2）雄性健康SD大鼠220只,在构建EP减轻力竭运动心肌缺血缺氧损伤模型基础上,通过检测血浆心肌cTnI浓度、心肌组织缺血缺氧染色以及心肌细胞超微结构观察,综合评价心肌缺血缺氧损伤与保护程度。通过腹腔注射自噬阻滞剂Wormanmin,验证细胞自噬参与EP诱导的内源性心肌保护效应假设。动物分组包括C组,力竭运动组（EE组）实施30 m/min,0°坡度的力竭运动,EEP组和LEP组也是4次30 m/min,0°坡度,运动10 min,休息10 min的间歇大强度跑台运动,建立EP模型;EEP+EE组和LEP+EE组分别在EP运动后0.5 h和24 h实施力竭运动,建立EP减轻力竭运动心肌缺血缺氧损伤模型。Wormanmin早期运动预适应保护组（W+EEP+EE）组和Wormanmin晚期EP保护组（W+LEP+EE）组均在EP运动前0.5 h腹腔注射自噬抑制剂渥漫青霉素。在EP模型的基础上,用免疫荧光染色法和免疫印迹观察和测定自噬相关蛋白Beclin1、LC3、Cathepsin D和p62在IEP后的不同时相点心肌组织的表达,探讨自噬相关蛋白表达的变化规律和相互关系,分组包括C组、0.5h组,1h组、2h组、3h组、5h组和24h组。研究结果:（1）与C组相比,HE组血浆cTnI浓度,缺血缺氧染色面积IHA、积分光密度IOD和平均光密度MOD值明显升高,EEP组和LEP组上述指标无显着性差异。与HE组相比,EEP+HE组和LEP+HE组上述指标显着下降。相邻切片结果显示:心肌组织缺血缺氧与细胞自噬相关蛋白p62呈明显对应关系。免疫组化结果显示:与C组相比,HE组Beclin1、LC3和Cathepsin D MOD值显着升高,p62无差异;EEP组和LEP组Beclin1、LC3和Cathepsin D MOD值显着增高,p62显着降低。与HE组相比,EEP+HE组MOD值Beclin1无差异,LC3和Cathepsin D显着升高,p62显着降低;LEP+HE组MOD值Beclin1和Cat hepsin D显着降低,LC3显着升高,p62无差异。与EEP组相比,LEP组MOD值Beclin1显着降低,p62显着升高。与EEP+HE组相比,LEP+HE组MOD值Beclin1和Cathepsin D显着降低,p62显着升高。免疫印迹结果显示:与C组相比,HE组Beclin1、LC3II和Cathepsin D的表达显着升高;EEP组Beclin1、LC3II、LC3II/I和Cathepsin D的表达显着升高,p62显着降低;LEP组p62表达显着降低。与HE组相比,EEP+HE组p62显着降低,LEP+HE组Beclin1和Cathepsin D显着降低。（2）与C组相比,EE组血浆cTnI浓度、缺血缺氧染色面积IHA、积分光密度IOD和平均光密度MOD值显着升高;EEP组和LEP组上述指标无显着性差异。与EE组相比EEP+EE组和LEP+EE上述指标显着降低。与EEP+EE组相比,W+EEP+EE组血浆cTnI浓度显着降低,IHA、IOD和MOD有升高趋势,无显着性差异;与LEP+EE组相比,W+LEP+EE组血浆cTnI浓度、IHA、IOD和MOD显着升高。透射电镜结果EE组、W+EEP+EE组和W+LEP+EE组均可见心肌肌原纤维断裂,线粒体之间空隙增大,线粒体变形,线粒体外膜肿胀甚至破裂,线粒体嵴排列紊乱,偶见心肌横管扩张等心肌超微结构的损伤,EEP组、LEP组、EEP+EE组可见自噬体或自噬留下的空泡状结构。心肌组织免疫荧光图像分析积分光密度IOD结果显示,与C组相比,Beclin1在PEP2h组和PEP3h组显着升高;LC3在PEP1h组显着升高;Cathepsin D在PEP1h组显着升高PEP24h组显着降低;p62在PEP5h组和PEP24h组显着降低。免疫印迹结果显示,与C组相比,Beclin1的表达在PEP2h组显着升高;LC3I/GAPDH各组无显着性差异;LC3II/GAPDH在PEP1h组显着升高;LC3II/LC3I在PEP1h组显着升高;Cathepsin D的表达在PEP5h组和PEP24h组明显降低;p62的表达在PEP2h组,PEP3hr组、PEP5h组和PEP24h组明显降低。研究结论:（1）通过检测血浆cTnI和心肌组织缺血缺氧C-2R BG染色,EP能减轻大强度运动造成的心肌缺血缺氧损伤。通过C-2R BG缺血缺氧染色和自噬相关蛋白的免疫组化相邻切片染色,发现缺血缺氧诱导心肌细胞自噬。通过观察和检测自噬相关蛋白在大鼠心肌组织的表达,提示大强度运动可能通过持续性缺血缺氧诱导心肌细胞自噬,但细胞自噬降解过程可能存在受阻,这可能是造成心肌缺血缺氧损伤的因素;EP通过间歇性缺血缺氧诱导心肌细胞自噬,可能改善大强度运动诱导的细胞自噬受阻情况,细胞自噬可能参与EP诱导的内源性心肌保护。（2）通过血浆cTnI,以及心肌组织缺血缺氧染色和透射电镜心肌超微结构观察,进一步证实EP可以减轻力竭运动导致的心肌缺血缺氧损伤,具有早期和晚期保护效应。使用自噬阻滞剂Wormanmin后,发现力竭运动在EP晚期保护期造成的心肌组织损伤加重,证实细胞自噬参与EP晚期保护期内源性心肌保护;在EP早期保护期未见明显加重,提示细胞自噬参与EP早期心肌保护有待证实。通过分时观察和测定自噬相关蛋白Beclin1、LC3、Cathepsin D和p62在大鼠心肌组织的表达,提示EP诱导大鼠心肌组织细胞自噬水平存在先升高后降低这一过程,细胞自噬的降解过程在EP保护期2 h明显,可持续到EP保护期24h,细胞自噬可能在EP保护期参与EP内源性心肌保护。
邢小卫[4]（2020）在《miR-26a-5p通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路对心肌缺血再灌注损伤的作用研究》文中认为研究背景心血管疾病是世界上无论是发展中国家还是发达国家中最常见的死亡原因之一,而这其中急性ST段抬高型心肌梗死（ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI）首当其冲成为最为凶险、致死致残率最高的一类。虽然我国心血管疾病的预防和救治工作有了很大的改善,但急性心肌梗死的发病率及死亡率仍然在不断上升。再灌注治疗是STEMI患者最有效的治疗措施,可以向缺血区域提供及时有效的能量,从而减少梗死范围、维持心脏收缩功能。但是越来越多的基础和临床研究表明,缺血心肌在恢复血液再次灌注后会导致额外的心肌损伤,如心肌顿抑、心律失常、无复流、心肌坏死等的发生,这种现象称之为心肌缺血/再灌注损伤（myocardialischemia/reperfusion injury,MIRI）,MIRI 已成为影响再灌注治疗效果和STEMI患者预后的主要因素。既往研究MIRI的机制包括氧自由基学说、钙超载学说、心肌能量代谢障碍学说、细胞凋亡学说等;治疗策略包括非药物干预的方法如缺血预适应、缺血后适应和远程缺血预适应,药物干预方法包括腺苷、心房钠肽、环孢素A、极化液、胰高血糖素样肽-1等。虽然许多细胞实验、动物实验证实上述治疗措施有效,但转化成临床试验的结局确是令人失望的。单一的心脏保护策略对改善缺血再灌注损伤效果不佳,联合多种保护策略或者协同多靶点治疗却很有希望治疗缺血再灌注损伤,因此我们非常有必要进一步深入研究MIRI的分子机制,为我们探索新的诊断、治疗靶点提供依据。越来越多的证据表明缺血再灌注损伤的一种重要病理生理机制是细胞凋亡,细胞调亡是一个需要能量的过程,虽然冉灌注过程给缺血心肌提供赖以生存的氧气和能量,但同时也为细胞凋亡提供了能量。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase家族）在凋亡的执行阶段起主要作用,凋亡是多种Caspase共同完成的,Caspase-3被认为是各种凋亡刺激因子促进凋亡过程中的终末剪切酶,有研究表明Caspsase-3在缺血再灌注导致的心肌细胞凋亡过程中发挥重要作用。微小RNA（miRNA）是近年来发现的内源性非编码单链小分子RNA,通过结合靶mRNA的3’ UTR区从而降解靶mRNA或抑制其翻译,达到调控基因表达的目的。miRNA在各种细胞功能调控中具有重要作用,例如胚胎发育、细胞凋亡、细胞生长和分化以及肿瘤发生等。研究表明在心血管系统方面,miRNA与心肌梗死、心脏肥大、心肌重塑、心力衰竭和心律不齐等各种心脏病的发病机制有密切关系。miRNA具有细胞和组织特异性,有快速释放的动力学特点,在血清当中相对稳定存在,因此循环miRNA有望用于心血管疾病的早期诊断、危险分层、判断预后甚至治疗。目前miRNA研究颇多,一些研究表明miRNA在心肌细胞凋亡中发挥着重要的调控作用,但在心肌缺血再灌注损伤中的研究仍不成熟。miR-26a-5p作为新近发现的一种miRNA,在多种心血管疾病中存在差异表达。如有研究显示经过miR-26a-5p抑制剂转染的冠心病小鼠模型,分离出的内皮细胞生存力明显下降而凋亡率明显升高。另一项研究表明miR-26a-5p的过表达可以减轻冠状动脉微循环栓塞引起的无复流和心肌坏死。鉴于心肌缺血再灌注损伤与心肌细胞凋亡、冠脉微循环栓塞有着密切的关系,我们推测miR-26a-5p可能通过调节细胞凋亡参与心肌缺血再灌注损伤。目前,miR-26a-5p在心肌缺血再灌注损伤中的作用尚未见报道。我们通过心肌细胞缺氧/复氧模型、小鼠缺血再灌注模型分别在体外、体内模拟了心肌缺血再灌注损伤模型。然后,利用生物实验结合生物信息学方法来探索miR-26a-5p在心肌缺血再灌注损伤中的表达和调控作用,并进一步探讨miR-26a-5p影响缺血再灌注损伤可能的通路和机制,从而为更好的解释心肌缺血再灌注损伤的机制和提供可能的治疗策略奠定实验基础。第一章miR-26a-5p在缺氧/复氧心肌细胞中的表达及其调控作用目的关于心肌缺血再灌注损伤的分子机制仍未明确阐明,而关于miR-26a-5p在心肌缺血再灌注损伤当中的作用尚不清楚。第一章研究的目的是明确miR-26a-5p在细胞缺氧/复氧损伤中的表达水平,分析miR-26a-5p的过表达或抑制对缺血再灌注损伤程度的影响。方法1.生物信息学分析:从GEO数据库中搜索与心肌缺血再灌注相关的miRNAs的大数据,比较分析差异表达的miRNA。2.原代心肌细胞的分离和培养:取2日龄的C57BL/6乳鼠,消毒后开胸取心脏,分离出左心室后剪碎并胰酶消化,应用差速贴壁离心方法纯化心肌细胞,加入DMEM培养基,在37℃培养箱中培养。3.细胞转染:miR-26a-5p模拟物、miR-26a-5p抑制剂及相应对照物利用Lipofectamine█ RNAiMAX Reagent转染至原代心肌细胞中。4.建立心肌细胞缺氧/复氧模型:心肌细胞培养液置换为不含血清、不含糖的DMEM培养基,放置在37℃含5%C02、95%N2的低氧培养箱中缺氧培养4小时,之后置换上含糖、FBS的DMEM培养基并放置在37℃含95%空气和5%C02的培养箱中继续培养心肌细胞2小时,自此,缺氧/复氧（H/R）模型成功建立。5.细胞实验分组5.1实验一分组:1.对照组（Control group）;2.缺氧/复氧组（H/R group）。5.2 实验二分组:1.miRNA control+H/R 组;2.miR-26a-5p mimic+H/R组;3.inhibitor control+H/R 组;4.miR-26a-5p inhibitor+H/R 组。6.MTT法检测心肌细胞活力:各组心肌细胞培养孔中加入MTT、二甲基亚砜后测定心肌细胞存活率。7.流式细胞学技术测定细胞实验中心肌细胞凋亡率。8.实时萤光定量PCR检测各组心肌细胞中miR-26a-5p含量。9.Western Blot实验检测促凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达。结果1.GEO网站为https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/,识别出心肌缺血再灌注相关的miRNAs生物芯片数据,与正常组织对比,做差异分析。发现miR-26a-5p在心肌缺血再灌注组织中表达下调,差异明显（P=0.0004）。2.流式细胞学技术来检测H/R心肌细胞的凋亡率是12.65%,对照组心肌细胞凋亡率为0.71%,差异明显。Western Blot技术检测结果显示H/R心肌细胞中凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达量明显高于对照组（P=0.0003）。3.qRT-PCR检测结果显示H/R心肌细胞中miR-26a-5p的含量明显低于对照组（P=0.0003）。4.转染miR-26a-5pmimic后心肌细胞中miR-26a-5p的水平明显升高;而转染 miR-26a-5pinhibitor 后心肌细胞中 miR-26a-5p 含量明显降低（P<0.0001）。MTT检测结果显示与对照组相比,过表达miR-26a-5p显着增加了心肌细胞在缺氧/复氧后的细胞活力;miR-26a-5p表达受抑制后显着降低心肌细胞在缺氧/复氧后的细胞活力（P<0.01）。5.流式细胞学技术检测结果显示:过表达miR-26a-5p组H/R心肌细胞凋亡率显着低于对照组,miR-26a-5p mimic组的细胞凋亡率为7.54%,mimic control组的细胞凋亡率为20.86%,差异明显;受抑制miR-26a-5p组H/R心肌细胞凋亡率显着高于对照组,miR-26a-5p inhibitor组的细胞凋亡率为35.89%,inhibitor control组的细胞凋亡率为23.25%,差异明显。Western Blot结果显示:过表达miR-26a-5p组H/R心肌细胞中cleaved caspase-3的含量显着低于对照组;受抑制miR-26a-5p组H/R心肌细胞中cleaved caspase-3的含量显着高于对照组（P<0.001）。结论及意义1.与正常对照组相比,miR-26a-5p在缺氧/复氧细胞中的表达明显下降;心肌细胞凋亡率明显升高。2.在缺氧/复氧心肌细胞模型中,miR-26a-5p的过表达可以通过降低心肌细胞凋亡率来减轻心肌缺血再灌注损伤;而miR-26a-5p低表达可以通过增加心肌细胞凋亡来加重心肌缺血再灌注损伤。3.我们的研究结果可能有助于发现心肌缺血再灌注损伤中发生、进展的新机制,有助于开发心肌缺血再灌注损伤新的早期诊断生物标志物或新的治疗手段。第二章miR-26a-5p调控PTEN/PI3K/AKT通路改善心肌缺血再灌注损伤目的miRNA是一类内源性非编码的单链小分子RNA,它通过结合靶基因mRNA的3’非翻译区,降解靶基因或抑制其翻译。miRNA具有功能多样性的特点,研究miRNA的靶基因功能较为复杂,近些年随着TargetScan、miRBase等大型miRNA分析数据库的发展,方便了科学家进行miRNA靶基因预测。我们在第一章的研究结果表明,miR-26a-5p在心肌缺血再灌注细胞中表达下调,且过表达miR-26a-5p可以减轻心肌缺血再灌注损伤,但具体机制尚不明确。本章目的是对miR-26a-5p的靶基因进行预测,研究miR-26a-5p调控心肌缺血再灌注损伤可能的通路机制并进一步验证。方法1.生物信息学分析:利用Targetscan数据库对miR-26a-5p的靶基因进行预测（http://www.targetscan.org/vert72）。2.利用双萤光素酶报告基因检测验证miR-26a-5p与PTEN的3’UTR是否存在互补结合关系。我们构建PTEN野生型和突变型的双萤光报告载体pMIR-REPORTTM-PTEN-WT和pMIR-REPORTTM-PTEN-Mut,分别与 miR-26a-5p 模拟物（miR-26a-5pmimcs）以及阴性对照共同转染心肌细胞,观察各组萤光素酶活性的变化,从而验证PTEN是否是miR-26a-5p的靶基因。3.细胞培养、转染miRNA以及模拟缺氧/复氧模型（H/R）:同第一章。4.细胞实验分组:4.1实验一分组:萤光素酶报告基因检测1.转染 pMIR-REPORTTM-PTEN-WT+miR-26a-5p mimics 组。2.转染 pMIR-REPORTTM-PTEN-WT+miRNA control 组。3.转染 pMIR-REPORTTM-PTEN-Mut+miR-26a-5p mimics 组。4.转染 pMIR-REPORTTM-PTEN-Mut+miRNA control 组4.2实验二分组:1.对照组（Control group）;2.缺氧/复氧组（H/R group）。4.3 实验三分组:1.miRNA control+H/R 组;2.miR-26a-5p mimic+H/R组;3.inhibitor control+H/R 组;4.miR-26a-5p inhibitor+H/R 组。5.qRT-PCR技术检测PTEN基因含量;Western Blot技术检测PTEN/PI3K/AKT蛋白表达量,方法类同第一章。结果1.Targetscan 预测 PTEN 是 miR-26a-5p 的靶基因。2.双萤光素酶报告实验显示与对照组相比,转染了野生型PTEN-3’UTR和miR-26a-5pmimics的萤光素酶活性显着降低（P=0.0003）;而共转染突变型PTEN-3’ UTR和miR-26a-5p mimics组与对照组相比萤光素酶活性无显着性差异（P>0.9999）。结果表明miR-26a-5p可直接与PTEN的3’ UTR作用。3.qRT-PCR检测H/R心肌细胞中PTEN基因含量,结果显示H/R组PTEN基因含量明显高于正常对照组（P=0.0038）。Western Blot检测H/R心肌细胞中PTEN蛋白表达含量,结果显示H/R组PTEN蛋白表达含量明显高于对照组（P=0.0001）。4.通过心肌细胞转染,分别构建过表达miR-26a-5p组、敲低miR-26a-5p组以及相应对照组,Western Blot检测显示过表达miR-26a-5p显着下调了 PTEN的蛋白表达水平,同时显着提高了 PI3K和AKT的表达水平;相反的,敲低miR-26a-5p显着上调了 PTEN的蛋白表达水平,同时显着降低了 PI3K和AKT的表达水平（P<0.001）。结论及意义1.在心肌缺血再灌注过程中,PTEN是miR-26a-5p的靶基因。2.过表达miR-26a-5p可以通过与PTEN的3’UTR结合而负性调控PTEN蛋白表达,PTEN受抑制后反向激活PI3K/AKT通路,达到抗心肌细胞凋亡目的,从而改善心肌缺血再灌注损伤。3.通过研究miR-26a-5p具体调控机制有助于我们更深入的理解缺血再灌注损伤的机制,有助于开发心肌缺血再灌注损伤新的药物或非药物治疗手段。第三章miR-26a-5p在缺血再灌注小鼠心肌组织中的表达及其调控机制目的在之前的研究中,我们通过体外实验建立心肌细胞缺氧/复氧（H/R）模型,发现H/R组心肌细胞凋亡率增高,miR-26a-5p在H/R组心肌细胞中表达下降,过表达miR-26a-5p减轻了心肌细胞缺血再灌注损伤。同时发现PTEN是miR-26a-5p的靶基因,miR-26a-5p通过PTEN/PI3K/AKT通路改善心肌缺血再灌注损伤。在这一章中,在小鼠体内心脏实验中,我们进一步验证miR-26a-5p对心肌缺血再灌注损伤是否会有相同的影响。方法1.缺血再灌注损伤小鼠模型的建立:C57BL/6小鼠麻醉后取仰卧位,气管插管后连接动物呼吸机,小鼠四肢通过电极连接到心电图仪。碘伏消毒胸前区后,第三和第四肋间行开胸手术。在左冠状动脉前降支距离左心耳下缘1-2mm处对冠状动脉左前降支进行结扎,发现明显的ST段抬高时表示结扎成功,阻断血流后30分钟,缝合线被释放,冠状动脉重新恢复血流,小鼠心肌缺血再灌注模型建立成功。在假手术组中,缝线只穿过小鼠的心脏,不进行结扎。2.小鼠心肌转染:构建腺相关病毒AAV9-miRNA载体,8周龄C57BL/6小鼠随机分组后,通过尾静脉注射AAV9-miRNA-26a-5p或AAV9-control构建转染模型。3.动物实验分组3.1实验一分组:1.假手术组（Shamgroup）;2.缺血再灌注损伤组（I/R group）。3.2 实验二分组:1.miRNA control+I/R 组;2.miR-26a-5pmimic+I/R组;3.inhibitor control+I/R 组;4.miR-26a-5p inhibitor+I/R 组。4.TTC-Evans blue双染法检测各组小鼠心肌梗死面积。5.流式细胞学技术测定动物实验中各组小鼠心肌细胞凋亡率。6.实时萤光定量PCR检测各组小鼠心肌组织中miR-26a-5p、PTEN含量。7.Western Blot 实验检测 cleaved caspase-3、PTEN、PI3K、AKT 的表达。结果1.Evans blue/TTC染色观察I/R组小鼠的心肌梗死面积大于对照组（P=0.0058）。流式细胞学技术显示I/R组小鼠心肌组织中心肌细胞凋亡率明显高于对照组,I/R组小鼠心肌细胞的凋亡率是40.24%,对照组心肌细胞凋亡率为8.83%,差异明显。Wesetern Blot检测显示I/R组小鼠心肌cleaved caspase-3蛋白含量明显高于对照组（P=0.0015）。2.qRT-PCR方法检测结果显示I/R组小鼠心肌细胞中miR-26a-5p的表达量显着低于正常对照组（P<0.0001）。3.qRT-PCR的方法检测各组转染小鼠心肌中miR-26a-5p的表达,结果显示转染miR-26a-5p mimic小鼠心肌中miR-26a-5p的水平明显升高;而转染miR-26a-5p inhibitor 小鼠心肌中 miR-26a-5p 含量明显降低（P<0.01）。Evans blue/TTC染色观察发现过表达miR-26a-5p显着减少了小鼠心肌I/R后梗死面积,受抑制miR-26a-5p组小鼠心肌I/R后梗死面积显着大于对照组（P<0.05）。4.qRT-PCR检测发现I/R组小鼠心肌PTEN基因含量明显高于正常对照组（P=0.0080）。Western Blot检测结果显示I/R组心肌组织中PTEN蛋白表达含量明显高于对照组（P<0.0001）。5.Western Blot检测显示在小鼠I/R损伤模型中,与对照组相比,过表达miR-26a-5p显着下调了 PTEN的蛋白表达水平,同时显着提高了 PI3K和AKT的蛋白表达水平;相反的,抑制miR-26a-5p组显着上调了 PTEN的蛋白表达水平,同时显着降低了 PI3K和AKT的蛋白表达水平,组间差异具有统计学意义（P<0.001）。结论及意义1.与正常对照相比,缺血再灌注小鼠模型中,心肌细胞凋亡和cleaved caspase-3表达量升高,缺血再灌注组织中miR-26a-5p的表达明显下降;miR-26a-5p的过表达减轻了心肌缺血再灌注损伤;而miR-26a-5p低表达可以增加心肌凋亡来加重心肌缺血再灌注损伤。2.体内实验进一步验证了缺血再灌注组织中PTEN基因及蛋白表达量明显升高,PTEN 是 miR-26a-5p 的靶基因;miR-26a-5p 可以通过 PTEN/PI3K/AKT 通路调控心肌缺血再灌注损伤。3.我们体内实验的研究结果进一步验证miR-26a-5p对心肌缺血再灌注损伤的调控作用和机制,为开发心肌缺血再灌注损伤新的早期诊断生物标志物或新的治疗手段提供实验基础。
王书凡[5]（2020）在《金丝桃苷通过激活PKC/mitoKATP信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究》文中研究指明目的:探讨金丝桃苷（Hyperoside,Hyp）改善大鼠心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）与心肌组织PKC（Protein kinase C）/mitoKATP（mitochondrial ATP channel）信号通路之间的关系。方法:1.在体实验:健康雄性SD大鼠72只适应性喂养一周后,采用结扎冠状动脉左前降支制备大鼠急性心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型,随机分为9组,分别是假手术组（Sham）、模型组（MIRI）、金丝桃苷组（Hyp,50 mg/kg）、Hyp+PKCα阻断剂BisI组（50 mg/kg+2.5 mg/kg）、Hyp+PKCε阻断剂CHE组（50mg/kg+8 mg/kg）、Hyp+mitoKATP阻断剂5-HD组（50 mg/kg+10 mg/kg）、PKCα抑制剂BisI组（2.5 mg/kg）、PKCε抑制剂CHE组（8 mg/kg）、mitoKATP抑制剂5-HD组（10 mg/kg）。除Sham、MIRI组大鼠给予生理盐水（Normal saline,NS）灌胃外,Hyp组及Hyp联用各抑制剂组均给予Hyp 50 mg/kg,灌胃10天。于第10天灌胃结束后,Hyp联用各抑制剂组及各单用抑制组于术前1 h腹腔注射上述各相应抑制剂。采用BL-420生物机能采集系统记录仪记录在缺血前,缺血30 min及再灌注2 h的大鼠心电图;再灌注2 h后腹主动脉取血,离心分离血清,运用ELISA法检测大鼠心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶（CK-MB）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,氧化应激标志物丙二醛（MDA）以及腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量;采用HE、TTC及TUNEL染色观察大鼠心肌组织病理学变化、心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率。运用蛋白印迹免疫分析法（Western blot,WB）分别观察Hyp及PKCα、PKCε、mitoKATP特异性信号通路抑制剂对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中Nrf2、Caspase-3、PKCε及Kir6.2蛋白表达水平的影响。2.离体实验:体外细胞培养H9c2心肌细胞,随机分为9组,分别是正常组（Normal）、缺氧复氧组（Model）、Hyp组（50μmol/L）、Hyp+PKCα阻断剂BisI组（50μmol/L+1μmol/L）、Hyp+PKCε阻断剂CHE组（50μmol/L+4μmol/L）、Hyp+mitoKATP抑制剂GB组（50μmol/L+3 nmol/L）、PKCα抑制剂BisI组（1μmol/L）、PKCε抑制剂CHE组（4μmol/L）、mitoKATP抑制剂格列本脲（GB）组（3 nmol/L）。运用ELISA法检测缺氧复氧H9c2心肌细胞上清ATP和MDA含量及SOD和CK-MB活性。采用蛋白印迹免疫分析法分别观察Hyp及PKCα、PKCε、mitoKATP信号通路抑制剂对H9c2心肌细胞中Nrf2、Caspase-3、PKC?及Kir6.2蛋白表达水平的影响;采用流式细胞仪检测Hyp及PKC/mitoKATP信号通路抑制剂对缺氧复氧H9c2心肌细胞凋亡程度的影响;采用激光共聚焦技术检测Hyp及PKC/mitoKATP信号通路阻断剂对缺氧复氧H9c2心肌细胞Ca2+浓度的变化。结果:1.在体实验:（1）与Sham组相比,MIRI组大鼠在心肌缺血再灌注期间ST明显抬高（P<0.01）,肉眼可见结扎区心室壁呈灰白色,再灌注后ST段逐渐回落,表明造模成功。（2）ELISA检测法结果显示,与Sham组相比,MIRI组大鼠血清中MDA含量、CK-MB活性显着升高,SOD活性与ATP含量均显着降低（P<0.01）;与MIRI组比较,Hyp可显着降低血清MDA含量和CK-MB活性,升高SOD活性及ATP含量（P<0.01）。相比于Hyp组,Hyp联用各抑制剂组大鼠血清中MDA含量明显升高,SOD活性及ATP含量均显着降低（P<0.05,P<0.01）;相比于各相应单用抑制剂组,Hyp联用各抑制剂组大鼠血清中MDA含量和CK-MB活性下降,SOD活性及ATP含量上调（P<0.01）。（3）HE染色结果显示,MIRI组心肌前壁可见大面积白色区域,嗜酸性变明显,细胞排列紊乱,细胞质充血,淡染;TUNEL染色结果显示,MIRI组大鼠心肌细胞凋亡指数明显上升;TTC染色结果显示,MIRI组心肌梗死面积较大。而用药后,与MIRI组比较,Hyp组及Hyp联合各阻断剂组心肌组织的病理损伤均明显好转,心肌细胞凋亡指数明显下降,心肌梗死面积显着减少。与Hyp组比较,Hyp联合各阻断剂组病理损伤仍较明显。（4）Western blot结果显示,相比于Sham组,MIRI组大鼠心肌组织中Nrf2、PKCε蛋白表达水平明显下降（P<0.01）,Kir6.2蛋白表达无明显变化（P>0.05）,Caspase-3蛋白表达水平明显上升（P<0.01）。相比于MIRI组,Hyp组大鼠心肌细胞中Nrf2、PKCε、Kir6.2蛋白表达水平明显上升（P<0.01）,Caspase-3蛋白表达水平明显下调（P<0.01）。相比于Hyp组,Hyp联用各抑制剂组的Nrf2、PKCε及Kir6.2蛋白表达水平均有一定程度的下调（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3蛋白表达水平有一定程度的上调（P<0.05）;相比于各相应单用抑制剂组,Hyp联用各抑制剂组的Nrf2、PKCε、Kir6.2蛋白表达水平均有一定程度的上调（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3蛋白表达水平有一定程度的下调（P<0.01）。2、离体实验:（5）ELISA检测法结果显示,与Normal组相比,Model组H9c2心肌细胞上清中MDA含量及CK-MB活性显着升高,SOD活性及ATP含量均显着降低（P<0.01）;与Model组比较,Hyp可显着降低缺氧复氧H9c2心肌细胞上清中MDA含量及CK-MB活性,升高SOD活性及ATP含量（P<0.01）。相比于Hyp组,Hyp联用各抑制剂组H9c2心肌细胞上清中ATP含量明显降低（P<0.05）;相比于各相应单用抑制剂组,Hyp联用各抑制剂组H9c2心肌细胞上清中MDA含量及CK-MB活性显着降低,SOD活性及ATP含量明显升高（P<0.01）。（6）相比于Normal组,Model组H9c2心肌细胞中Nrf2、PKCε蛋白表达水平明显下降（P<0.01）,Kir6.2蛋白表达无明显变化（P>0.05）,Caspase-3蛋白表达水平明显上升（P<0.01）。相比于Model组,Hyp组缺氧复氧H9c2心肌细胞中Nrf2、PKCε、Kir6.2蛋白表达水平明显上升,Caspase-3蛋白表达水平明显下调（P<0.01）。与Hyp组相比,Hyp联用各抑制剂组H9c2心肌细胞Nrf2、PKCε、Kir6.2蛋白表达水平有一定程度下调（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3蛋白表达水平有一定程度上调（P<0.01）。相比于各相应单用抑制剂组,Hyp联用各抑制剂组H9c2心肌细胞Nrf2、PKCε及Kir6.2蛋白表达水平明显上升（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3蛋白表达水平明显下调（P<0.01）。（7）流式细胞仪检测结果显示,相较于Normal组,Model组H9c2心肌细胞凋亡率显着升高（P<0.01）;相较于Model组,Hyp组H9c2心肌细胞凋亡率呈下降趋势（P<0.01）;与Hyp组比较,Hyp联用各抑制剂组细胞凋亡率均显着提高（P<0.05,P<0.01）;相比于各相应抑制剂组,Hyp联用各抑制剂组心肌细胞凋亡率显着降低（P<0.05,P<0.01）。（8）激光共聚焦检测结果显示,相比于Normal组,Model组H9c2心肌细胞Ca2+荧光强度明显上升（P<0.01）;相比于Model组,Hyp组心肌细胞Ca2+荧光强度显着下降（P<0.01）;相较于Hyp组,Hyp联用各阻断剂组H9c2心肌细胞的Ca2+荧光强度明显上升（P<0.05）。相比于各相应单用抑制剂组,Hyp联用各抑制剂组H9c2心肌细胞Ca2+荧光强度显着降低（P<0.05,P<0.01）。结论:Hyp具有改善MIRI大鼠心肌组织损伤的作用,其机制可能与其激活大鼠心肌组织PKC/mitoKATP信号通路有关,进一步研究发现,其可能一方面是直接激活PKCα信号通路,另一方面是通过激活PKCε,继而开放mitoKATP通道,调节多种心肌细胞及其亚细胞的结构和功能,清除氧自由基,维持线粒体功能,恢复能量代谢,抑制Ca2+流向胞内,减少心肌细胞凋亡,从而发挥改善心肌损伤的保护作用。
徐海南[6]（2020）在《经局部缺血后适应的心肌再灌注治疗对STEMI患者预后影响及机制探讨》文中研究表明目的:针对接受急诊经皮冠状动脉介入（percutaneous transluminal coronary intervention,PCI）治疗的急性ST段抬高型心肌梗死（ST-segment Elevation Myocardial Infarction,STEMI）患者,在心肌再灌注前予以局部缺血后适应（ischemic postconditioning,IPOC）处理,了解患者血清可溶性凋亡因子（Soluble factor related apoptosis,sFas）及可溶性凋亡因子配体（Soluble factor related apoptosis ligand,sFasL）浓度变化和1年内主要心血管不良事件（Major adverse cardiovascular event,MACE）发生率,探讨患者预后的变化及其可能机制。方法:随机选取2018年5月1日以来在南华大学附属长沙中心医院急诊科就诊,确诊为STEMI,并行急诊PCI术治疗的患者90例,根据是否经IPOC干预及其干预时限,随机分为3组:常规组（n=30）;IPOC45s组（n=30）和IPOC60s组（n=30）。其中,常规组直接行PCI术;IPOC45s组:导丝通过罪犯血管病变,在重新恢复血流的1分钟内,将预扩球囊位于罪犯血管病变上游实施低压（46个标准大气压）扩张充气45s/放气45s,重复3个周期;IPOC60s组,操作方法同IPOC45s组,但每次充气或放气持续时间均为60s。收集所有患者的年龄、性别、体重、吸烟史、既往史、术前生化指标等一般资料,以及患者胸痛时间、门球时间（Door to balloon,D2B）、冠脉造影等临床资料。观察所有患者术前0h至术后72h血清肌酸磷酸激酶同工酶（Creatine phosphokinase isoenzyme,CK-MB）浓度并计算曲线下面积,观察术后1h心电图ST段回落情况,术后1月、3月、6月、1年超声心动图下左室射血分数（Left ventricular ejection fraction,LVEF）的变化,术前、术后0h、术后24h、术后48h血清sFas及sFasL浓度变化。术后随访1年,了解患者MACE事件发生情况（包括心源性死亡、心绞痛、非致死性再发急性心肌梗死、脑卒中、非致死性心力衰竭反复住院、非致死性心律失常等）。结果:1.三组患者在年龄、性别、体重指数、高血压史、糖尿病史、冠心病家族史、吸烟史、术前血脂、血糖、心肌肌钙蛋白I（Cardiac troponin I,cTnI）、血清C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、脑利钠肽（Brain natriuretic peptide,BNP）、CK-MB水平、胸痛时间、门球时间、冠脉造影相关资料、术后用药等方面,差异均无统计学意义（均P>0.05）;2.三组患者血清sFas浓度比较:术前、术后0h及术后24h三组患者血清sFas浓度比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）;术后48h,与常规组相比,IPOC60s组和IPOC45s组患者血清sFas浓度均明显降低[（20.50±12.68）ng/ml、（35.00±19.78）ng/ml vs（57.35±30.87）ng/ml],差异均有统计学意义（均P<0.05）,且IPOC60s组患者血清sFas浓度较IPOC45s组患者血清sFas浓度降低更明显,差异有统计学意义（P<0.05）;3.三组患者血清sFasL浓度比较:术前、术后0h及术后24h三组患者血清sFasL浓度比较,差异均无明显统计学意义（均P>0.05）;术后48h,与常规组相比,IPOC60s组和IPOC45s组患者血清sFasL浓度均明显降低[（22.91±14.77）ng/ml、（40.66±30.82）ng/ml vs（63.21±34.70）ng/ml],差异均有统计学意义（均P<0.05）,且IPOC60s组患者血清sFasL浓度较IPOC45s组患者血清sFasL浓度降低更明显,差异有统计学意义（P<0.05）;4.三组患者血清CKMB曲线下面积比较:与常规组相比,IPOC60s组和IPOC45s组患者血清CKMB曲线下面积明显下降[（4548.68±2182.85）、（5410.92±2514.06）vs（7090.57±3770.46）],差异均有统计学意义（均P<0.05）,但IPOC60s组与IPOC45s组比较差异无统计学意义（P>0.05）;5.三组患者术后1h心电图ST段完全回落情况比较:与常规组相比,IPOC60s组和IPOC45s组患者术后1h心电图ST段完全回落明显增多（23、22vs13）,差异均有统计学意义（均P<0.05）,但IPOC60s组与IPOC45s组比较差异无统计学意义（P>0.05）;6.三组患者术后1周、术后1月、术后3月超声心动图下LVEF值比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）;但术后6月,IPOC60s组、IPOC45s组患者LVEF值均高于常规组[（63.85±6.75）、（59.28±8.27）vs（54.67±9.76）,均P<0.05],且IPOC60s患者LVEF值较IPOC45s组增高更明显（P<0.05）;术后1年IPOC60s组、IPOC45s组患者LVEF值均高于常规组[（66.00±6.81）、（60.41±10.85）vs（56.07±10.97）,均P<0.05],但IPOC60s组与IPOC45s组比较差异无统计学意义（P>0.05）;7.术后随访1年,与常规组相比,IPOC60s组和IPOC45s组患者出现非致死性心力衰竭的情况均明显减少（2、4vs11）,差异均有统计学意义（均P<0.05）;IPOC60s组患者出现心绞痛的情况明显低于IPOC45s组和常规组（2vs 8、13）,差异均有统计学意义（均P<0.05）,而出现致死性心律失常、再发心肌梗死及脑卒中的情况三组患者比较无明显差异（均P>0.05）;随访期间,未曾出现因心衰、再发心梗、恶性心律失常等原因所致的死亡事件。结论:1.经IPOC的心肌再灌注治疗能明显改善STEMI患者1年内的预后,主要表现在非致死性心力衰竭和心绞痛明显减少;2.影响机制可能与IPOC能抑制心肌再灌注诱导的细胞凋亡,减轻心肌损伤,改善心功能有关;3.干预60秒的时限可能较45秒效果更显着。
刘明明[7]（2020）在《PI3K/Akt通路在miR-499基因敲减小鼠心肌缺血/再灌注损伤中作用及机制的研究》文中研究指明背景急性心肌梗死在紧急开通血管恢复血流灌注的同时,其带来的缺血-再灌注损伤可导致恶性心律失常、心力衰竭等而增加死亡风险,使获益大大降低。因此,急性心肌梗死不仅仅要尽早恢复血流灌注,同时降低缺血-再灌注所带来的心肌损伤风险。PI3K/Akt是细胞内重要信号通路,激活PI3K/Akt信号通路可抗细胞凋亡坏死,减轻缺血再灌注损伤。研究发现microRNA与心血管疾病发生发展有密切联系,其中microRNA-499可能通过PI3K/Akt发挥心肌保护作用。目的1.研究miRNA-499低表达对心肌-缺血再灌注损伤的影响2.研究miRNA-499及PI3K/Akt信号通路对心肌-缺血再灌注损伤的调控作用方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组（AAV9-miR-499）、心肌缺血-再灌注组（MIRI+AAV9-miR-499）、PI3K抑制剂（LY294002）预处理后缺血-再灌注组（LY294002+MIRI+AAV9-miR-499）及阴性对照组（MIRI+AAV9）。首先,利用尾静脉注射将携带miRNA-499基因敲减序列的腺相关病毒9型（AAV9）注入小鼠体内构建miR-499基因敲减小鼠模型。其次,结扎小鼠冠状动脉30min,恢复血流灌注2h建立心肌缺血再灌注模型,其中假手术组仅穿线过前降支;PI3K抑制剂干预组于建立心肌缺血-再灌注模型前1h注射PI3K抑制剂LY294002。最后,在小鼠心肌缺血-再灌注末摘取小鼠心脏,利用RT-PCR检测miRNA-499表达量、Western Blot检测Akt及磷酸化Akt（P-Akt）表达量、TTC染色法测定心肌梗死面积,以研究心肌梗死面积、miR-499及Akt蛋白表达之间的相关性。结果1.各组miR-499表达量比较与对照组（1.50±048）相比,sham组miR-499表达量（0.61±0.26）减少（P<0.05）;与对照组比较,miR-499敲减手术组的miR-499表达量（0.84±0.39）减少（P<0.05）;LY294002干预组（0.69±0.19）与对照组相比miR-499表达也明显降低（P<0.05）;同时sham组、miR-499基因敲减手术组及LY294002干预组之间miR-499基因表达量无统计学差异（P>0.05）2.各组Akt磷酸化活性的比较Akt蛋白磷酸化活性主要由P-Akt与Akt的比值来表示:与假手术组（0.36±0.35）相比,miR-499敲减手术组Akt磷酸化活性（0.17±0.29）明显降低（P<0.05）;与假手术组比较,LY294002干预组Akt磷酸化活性（0.16±0.87）明显降低（P<0.05）,而同miR-499敲减手术组相比,Akt磷酸化活性无统计学差异（P>0.05）3.各组心肌梗死面积的比较与miR-499基因敲减手术组（12.43±1.77）%相比,对照组心肌梗死面积（8.47±1.67）%减少（P<0.05）;同假手术组（0±0.00）%相比,miR-499基因敲减手术组心肌梗死面积明显增加（P<0.05）:但与LY294002干预组（18.67±5.09）%相比心肌梗死面积减小（P<0.05）结论MiRNA-499低表达及PI3K/Akt活性下调加重心肌缺血-再灌注损伤
秦伟彬[8]（2019）在《瓜蒌薤白半夏汤加味联合前列地尔对冠心病PCI术后心肌微循环的研究》文中提出目的:本研究旨在通过评估中药复方瓜蒌薤白半夏汤加味结合前列地尔对冠心病患者冠脉介入术后心肌微循环状态的影响,为心血管疾病介入术后的中医药治疗提供理论依据。方法:本研究为随机对照的前瞻性临床试验,根据随机数字表方法抽取广西中医药大学第一附属医院心内科明确诊断为冠心病（急性ST段抬高型心肌梗死）且行经皮冠状动脉介入术治疗的患者为研究对象,根据治疗方案将患者分为瓜蒌薤白半夏汤结合前列地尔组（GQZ组）、瓜蒌薤白半夏汤组（GLZ组）、前列地尔组（QLZ组）。三组患者入院明确诊断后均给予抗凝、抗血小板、调脂、营养心肌、抑制心肌重塑等常规治疗,GQZ组患者在常规治疗的基础上,予前列地尔注射液20ug+生理盐水100ml静脉内缓慢静注,2次/日,术前30min开始应用至术后第7天,并于术前30min开始予瓜蒌薤白半夏汤加味（瓜蒌实20g、薤白10g、半夏10g、茯苓10g、丹参15g、党参15g、川芎15g、赤芍10g、桃仁10g、炙甘草10g,剂型均为免煎颗粒）,每日一剂,水冲100ml,术后坚持服用3个月;QLZ组患者在常规治疗基础上予前列地尔注射液20ug+生理盐水100ml静脉内缓慢静注,2次/日,术前30min开始应用至术后第7天;GLZ组患者术前30min开始予瓜蒌薤白半夏汤加味,每日一剂,水冲100ml,术后坚持服用3个月。分别记录三组研究对象的一般资料,疗效观察指标有心脏功能、术后3个月健康调查简表（SF-36）评估、中医证候评定、心电图ST段回落评估、TIMI血流分级及校正后TIMI帧计数、心肌灌注评价、肌钙蛋白及肌酸激酶同工酶峰值等心肌微循环状态评估指标。最后汇总资料分析。结果:本次研究中共计纳入研究对象90例,其中终止试验1例,试验脱落2例,最终纳入完成试验者共计87例,分别为GQZ组29例、QLZ组28例、GLZ组30例。结果显示三组患者一般资料无差异,术后三个月复查超声心动图提示三组患者左室射血分数差异有统计学意义（57.93±3.68VS 55.03±4.48 VS 56.29±5.07）%,P<0.05,而GLZ组与QLZ组两组组间相比较差异没有统计学意义（F=0.48,P=0.91）;术后3个月SF36量表评估结果显示三组研究对象在躯体疼痛、生理功能、一般健康状况、情感职能、活力、社会功能以及精神健康七个方面评分差异均有统计学意义（P<0.05）;中医证候评分结果显示除了QLZ组在心悸方面（P=0.06）,其它各组在胸闷方面、胸痛、心悸、身体困重感、舌苔方面治疗前后组内比较均存在显着差异（P<0.05）;心电图ST段回落方面,GQZ组术后ST段回落明显较好,ST段回落>70%的患者较其它两组多（P=0.048）,QLZ组、GLZ组患者两两比较差异没有统计学意义（P=0.16）;心肌灌注评价,GQZ组术后的MBG分级达到MBG 3级的患者所占比例比QLZ组、GLZ组较多,差异有统计学意义（P=0.17）,QLZ组、GLZ组患者两两比较差异没有统计学意义（P=0.12）;心脏标志物方面,三组患者cTnI、CK-MB达到峰值的时间差异有统计学意义,而QLZ组、GLZ组患者两两比较在cTnI、CK-MB达到峰值时间方面差异均没有统计学意义（P=0.85 VS P=0.21）,且从各组患者cTnI水平变化趋势来看,GQZ组患者在到达峰值后下降趋势明显快于其它两组;TIMI血流分级评估,GQZ组术后的TIMI3级获得率比其它两组高（P=0.048）,而QLZ组、GLZ组患者两两比较差异无统计学意义;术后CTFC评估,GQZ组效果优于其它两组,且GLZ组疗效同样优于QLZ组;试验过程中均无明显不良反应出现。结论:瓜蒌薤白半夏汤加味结合前列地尔对于改善痰瘀型冠心病患者PCI术后心肌微循环状态有显着疗效。
李武[9]（2019）在《“按之则热气至”理论内涵及效应机制探讨》文中研究指明通过对按法文献回顾研究,从古代理论论述、现代临床应用和实验探索来分析按之则热气至的基本内涵。《黄帝内经》中基于先秦两汉时期大量的临床实践确立了按之则热气至理论框架,魏晋南北朝时期进一步将理论用于临床实践,隋唐时期结合再次积累的临床实践对理论升华,宋金元时期将理论机制进一步深挖,明清时期理论和临床实践快速发展。此理论从实践中产生,经历了数次的实践检验和理论提升,是一个拥有丰富内涵的推拿理论。现在推拿的临床工作者结合中医脏腑经络、阴阳气血理论将按之则热气至理论继续用于临床实践,将行气、活血、温经、散寒、补虚为主的作用应用到伤科、内科、妇科、儿科的各种疾病的治疗。推拿的科研工作者,基于按法的临床效果,从人体生理、病理及细胞分子机制各个方面探索了“按之则热气至”理论实质。通过梳理古代文献中对按法操作记载,按法力量的大小、操作方向和作用方式是首要考虑的因素,手指温度是按法发挥作用不可缺少的条件,拇指外形和质地也是与按法作用效果有关。设计一个符合中医特色的按法刺激器,除了力学原理之外,必须要充分认识人操作手法的特性。我们在设计时,既分析了按法的运动学和动力学规律,也充分考虑按法所包含的人体因素。按法的运动学和动力学参数主要涉及到力量的大小和方向的控制,以及作用方式的选择。人操作按法的特性主要有拇指的外形和质地,以及指腹的温度。目的:1.探索指按法力度和拇指温度对按法热效应的影响;2.观察指按法的不同力度、不同停留时间、不同操作总时间对按法热效应的影响规律;3.观察不同指按法参数对按法热效应的影响,探索指按法力量、操作时间、频率的最佳参数组合;4.观察指按法的不同操作方式对按法热效应的影响,探索指按法热效应最佳操作方式。方法:1.24名志愿者分为三组,分别以拇指指腹直接按压（温度+压力）、拇指指腹紧贴皮肤（温度）、拇指带隔热套按压（压力）其左侧心俞穴,观察按压前后穴位局部温度的变化情况,从而得出拇指温度和力度对按法热效应的影响,验证古人提出按法操作“爪苦手毒”的科学性;2.24名志愿者分为三组,以指按法按压其左侧心俞穴,分别以不同力度（极轻度、轻度、中度、重度、超重度）、不同停留时间（2s、4 s、6 s、8 s、10 s）、不同总按压时间（2.5min、5 min、7.5 min、10 min、15 min）按压,观察其穴位局部温度的变化情况,从而得出力度、停留时间、总操作时间与按法热效应的量效关系;3.正交试验筛选按法热效应最佳参数:参考前部分实验及文献选定按法参数,即力量（1.5kg、2.0Kg、2.5Kg）、频率（7.5次/分、10.0次/分、15.0次/分）、操作时间（2.5min、5min、7.5min）,然后按照L9（34）正交表规定的试验顺序进行三因素三水平的正交试验,6名志愿者为受试对象,用中医按法刺激器按压其左侧心俞穴,观察其穴位局部温度的变化情况,从而得出热效应最佳的参数组合;4.17名志愿者为受试对象,用中医按法刺激器分别以有节奏的按压（第2.3部分最佳参数）、持续按压（第2.3部分最佳的力度和总按压时间,停留时间为1min）,观察其穴位局部温度的变化情况,从而得出“热气至”效应最佳的按法刺激方式。结果:1.拇指指腹直接按压后温度升高2.33℃,拇指指腹紧贴皮肤温度升高1.94,拇指指腹隔热按压后温度升高1.47℃;2.不同力度按压后即刻温度变化分别是1.88±0.64、2.05±0.68、2.25±0.59、2.35±0.61、2.32±0.69,按压后15min温度变化分别是-0.11±0.11、0.03±0.14、0.59±0.58、1.38±0.70、2.09±0.98;不同按压时间按压后即刻温度变化分别是1.94±0.37、2.33±0.29、2.49±0.31、2.51±0.39、2.41±0.55,按压后15min温度变化分别是0.53±0.49、0.33±0.30、0.52±0.33、0.55±0.38、0.76±0.36;不同停留时间按压后即刻温度变化分别是2.21±0.48、2.37±0.46、2.26±0.51、2.33±0.57、2.47±0.47;3.在力量、操作时间和频率三个因素中,不同力量对温差的影响有显着性差异（F=32.843,P<0.05）且力量2.5kg对其影响最显着;不同操作时间对温差的影响有显着性差异（F=54.102,P<0.05）且操作时间7.5min对其影响最显着;频率对温差的影响无统计学意义（F=2.181,P>0.05）;4.节律性按压对温差的影响优于持续性按法（P<0.05）,但持续时间两者的差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.拇指压力和拇指温度对热效应均有影响,两者组合的热效应最佳;2.（1）随着按压力度的增加,按压后即刻温度升高值也增加,到中度力度温度升高2.25℃,接近平稳,但随着按压力度的增加,热效应的持续时间增长;（2）随着按压时间的延长,按压后即刻温度升高值也增加,到7.5 min时温度升高了2.49℃,接近平稳;（3）不同停留时间对局部温度的影响差异不大;3.对温差影响较大的按法参数为力量与操作时间。最佳热效应参数组合为力量2.5kg,操作时间7.5分钟,频率10次/分;4.节律性按压的局部热效应优于持续性按压。目的:1.观察按压心俞穴对MIRI模型兔心肌损伤的影响;2.观察按压心俞穴对MIRI模型兔梗死区心肌组织腺苷和HSP70含量的影响;3.观察按压心俞穴对MIRI模型RISK通路相关激酶的影响;方法:通过结扎冠脉左前降支40min后再恢复供血3h复制缺血再灌注损伤模型,以中医按法刺激器按压心俞穴为干预手段,以按压大杼穴为对照,设置正常组、模型组、假手术组、模型+按压心俞组、模型+按压大杼组。模型组、模型+按压心俞组、模型+按压大杼组在实验前给予造模处理,假手术组只做开胸,不结扎冠脉,模型成功后分别给予D、E两组按压心俞穴和大杼操作方法。结扎前、结扎后10min和再灌注2h分别做心电图观察ST抬高情况;结扎前、再灌注3h后分别心脏采血检测血清CK-MB、c Tn I含量;再灌注3h后处死,一部分兔取心脏标本做HE染色和Akt、p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2、PI3K、p-PI3K和HSP70免疫组化,另一部分兔取左前降支结扎下方梗死区心肌组织标本做腺苷含量,以及Akt、p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2、PI3K、p-PI3K和HSP70蛋白Western Blot检测。结果:1.模型组、模型+按压心俞组、模型+按压大杼组心电ST段在结扎后均抬高,再灌注后均回落,差异无统计学意义;三组均有血清c Tn I升高,模型组升高幅度最大;三组均有血清CK-MB升高,模型组升高最大,且差异有统计学意义;2.模型+按压心俞组、模型+按压大杼组缺血心肌组织腺苷含量均增高,与模型组比较差异有统计学意义;模型组、模型+按压心俞组、模型+按压大杼组HSP70表达均增加,按压心俞和按压大杼组增高幅度大,但差异无统计学意义;3.模型组、模型+按压心俞组、模型+按压大杼组均能提高免疫组化和WB蛋白检测的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-ERK/ERK比值,按压心俞和按压大杼提高的更加明显,其中按压心俞组对免疫组化的p-Akt/Akt比值提高更大,按压大杼对蛋白WB检测的p-ERK/ERK比值提高更大。结论:1.按压心俞和大杼均能减少缺血再灌注损伤;2.按压心俞和大杼均能产生HSP70蛋白发挥心肌保护效应;3.按压心俞和大杼均能通过诱发内源性触发物质腺苷来激发RISK通路发挥心肌保护效应。
汪砚雨[10]（2018）在《VEGF165基因转染血管内皮祖细胞治疗心肌缺血再灌注损伤的实验研究》文中研究说明背景随着对急性心肌梗死后心肌缺血/再灌注损伤的深入研究,研究者发现血管内皮细胞（endothelial cells,ECs）在缺血/再灌注损伤的发生发展中扮演着重要的角色。ECs是缺血/再灌注损伤时受损的靶细胞;同时通过其广泛的生物学功能主动地参与了器官功能的损伤。成熟的内皮细胞增殖能力低,且不具有分化能力,不能修复受损的血管内皮。研究发现,血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）不仅参与人胚胎血管生成,也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程,在一定的条件下,EPCs细胞在体外能增殖,可诱导分化为成熟的内皮细胞。骨髓中获取EPCs数量和质量有限,外周血液中EPCs的数量也很少。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）是调控EPCs向内皮细胞分化的重要细胞因子,VEGF165是高度特异性的细胞刺激因子,能有效动员EPCs,增加EPCs的数量、提升EPCs的功能。VEGF因其强大的促进新血管形成的作用,一直是心肌缺血促血管新生基础与临床研究中的热点。VEGF基因治疗心肌疾病动物模型得到初步证实。由于载体缘故,VEGF基因治疗只能较少的修复血管内皮细胞。经转基因手段VEGF基因对EPCs进行修饰,将基因治疗和干细胞治疗方法联合应用在血管损伤的内皮修复治疗,可提高二者促血管新生和修复血管内皮的能力。目的构建与鉴定携带绿色荧光蛋白标记的人VEGF 165基因的重组腺病毒载体Ad-hVEGF165-GFP,继而将Ad-hVEGF165-GFP转染大鼠EPCs,探讨hVEGF165基因转染EPCs的方法及效果。并将hVEGF165基因转染EPCs移植入心肌缺血/再灌注损伤大鼠体内,观察实验动物心肌组织病理学、心肌结构及梗死面积、心肌组织血管免疫荧光染色的变化,同时观察对大鼠血浆TNF-α、心肌组织NF-κB和TLR-4表达的影响,探讨hVEGF 165基因转染的EPCs对心肌缺血/再灌注损伤心肌的保护作用及其可能存在的机制。方法一、hVEGF 165基因重组腺病毒载体的构建。将hVEGF165基因进行扩增,并同源重组入表达质粒pAV-MCMV-HA-P2A-GFP,转化入DH5a感受态细胞,得到的转化子经菌落PCR鉴定和测序鉴定后,通过Ad Max腺病毒包装系统转染HEK293细胞,进行病毒的包装和扩增。包装后镜下观察HEK293细胞,测定腺病毒滴度,Western Blot检测重组腺病毒的表达。二、hVEGF 165基因重组腺病毒载体转染大鼠血管内皮祖细胞。大鼠骨髓单核细胞分离,骨髓内皮祖细胞诱导、扩增培养及鉴定,将Ad-hVEGF165转染EPCs,转染后用荧光显微镜观察细胞生长情况,用Western blot检测VEGF的蛋白。三、Ad-hVEGF165转染EPCs移植对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制。48只大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注组、心肌缺血再灌注注入EPCs组、心肌缺血再灌注注入Ad-hVEGF165转染EPCs组（转染组）共4组,每组12只。缺血再灌注组使用大鼠左冠状动脉前降支结扎/开放法建立。左冠状动脉前降支结扎30分钟后松开后再灌注2小时。于建模后,将前7天培养的EPCs、转染的EPCs细胞经尾静脉注入动物体内,保证注入的量一致。再灌注2小时后分别取心肌观察缺血区和梗死区面积,并将心肌组织固定,包埋,切片后,HE染色后观察病理改变。取心肌组织血管免疫荧光染色,逆转录聚合酶链反应技术方法检测心肌组织TLR4mRNA含量,免疫组化SP法检测心肌组织NF-κB p65蛋白表达水平。经右侧颈动脉放血采集血样,ELISA法检测血浆细胞因子TNF-α水平。结果一、hVEGF 165基因重组腺病毒载体的构建:成功构建了 hVEGF 165基因重组腺病毒,转染的HEK 293细胞出现了明显的细胞病变效应,获得hVEGF 165基因重组腺病毒的滴度为1.106×108（ifu/ml）,Western Blot检测在25KD左右。二、hVEGF 165基因重组腺病毒载体转染大鼠血管内皮祖细胞:hVEGF165重组腺病毒转染EPCs后24 h,检测VEGF蛋白表达。结果显示大部分EPCs中有hVEGF蛋白表达,感染效率大约80%。和转染前相比,转染后24 hhVEGF蛋白表达随时间显着增加。三、Ad-hVEGF165转染EPCs移植对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制:1、心肌细胞梗死面积:与缺血/再灌注组47.72±9.77%比较,Ad-hVEGF165转染EPCs组心肌细胞梗死面积32.26±10.44%明显减小,差异有统计学意义（P<0.01）;EPCs组（梗死面积44.19±8.15%）、与缺血/再灌注组比较,梗死面积较其稍大,差异无统计学意义（P>0.05）;而与Ad-hVEGF165转染EPCs组相比较,有明显差异,梗死面积较大,有统计学意义（P<0.05）。2、2小时心肌组织病理改变:缺血/再灌注组在显微镜下观察到多处坏死灶,坏死处原有心肌结构消失,周围散布着大量坏死的心肌细胞。Ad-hVEGF165转染EPCs组可见一些散在的坏死灶,未见大片心肌坏死细胞,炎性细胞浸润减少;单注入EPCs组与缺血/再灌注组相比较,心肌坏死细胞稍减少,炎性细胞浸润程度也有所较少,但无统计学意义。3、心肌组织血管免疫荧光染色:缺血再灌注组（血管面积密度0.67±0.15）可见血管分布稀疏,Ad-hVEGF165转染EPCs组（血管面积密度2.7 6±=0.14）血管数量明显增多,差异显着（P<0.01）;EPCs组（血管面积密度1.39±0.30）与缺血再灌组比较,血管分布稍多,差异无统计学意义（P>0.05）,与Ad-hVEGF165转染EPCs组比较少,差异有统计学意义（P<0.05）。4、血浆TNF-α水平:缺血/再灌注组大鼠注入生理盐水2h血浆TNF-α 水平 518.09±79.24 pg·ml-1 明显高于假手术组 103.23±12.33 pg·ml-1,差异有明显统计学意义（P<0.01）。Ad-hVEGF165转染EPCs组2h血浆TNF-α水平256.18±7.26pg·ml-1明显低于缺血/再灌注组,差异有明显统计学意义（P<0.01）;EPCs组与Ad-hVEGF165转染EPCs组相比,TNF-α水平升高,差异有统计学意义,与缺血再灌注组相比较低,差异不显着,无统计学意义（P>0.05）。5、心肌组织TLR4 mRNA含量:缺血/再灌注组心肌组织TLR4 mRNA积分吸光度比值0.737±0.025,明显高于对照组0.268±0.006,差异有明显统计学意义（P<0.01）。Ad-hVEGF165转染EPCs组心肌组织TLR4 mRNA积分吸光度比值0.347±0.071明显低于缺血/再灌注组,差异有明显统计学意义（P<0.01）;EPCs组与缺血再灌注组比较,积分吸光度比值稍低,差异无统计学意义（P>0.05）,EPCs组与Ad-hVEGF165转染EPCs组,积分吸光度比值较高,差异显着,有统计学意义（P<0.05）。6、心肌组织NF-κBp65表达水平:缺血/再灌注组心肌组织NF-κB p65表达积分值5.33±0.61明显高于对照组0.67±0.82,差异有明显统计学意义（P<0.01）;Ad-hVEGF165 转染 EPCs 组心肌组织 NF-κB p65 表达积分值 2.75±0.42明显低于缺血/再灌注组,差异有明显统计学意义（P<0.01）。EPCs组（积分值4.38±0.29）与Ad-hVEGF165转染EPCs组比较,明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,与缺血再灌注组比较,有所降低低,差异无统计学意义（P>0.05）。结论成功地获得重组腺病毒Ad-hVEGF165-GFP,并转染大鼠EPCs。Ad-hVEGF165转染EPCs移植对心肌缺血再灌注损伤具有明显保护作用,能够明显促进血管新生,减少心肌细胞坏死,减少心肌梗死面积。其重要机制在于抑制TNF-α等炎症因子表达水平,减轻炎症反应,并且是通过抑制其上游调控基因NF-κB p65及信号通路分子TLR4等的表达而起作用的。
二、心肌缺血预适应在急性心肌梗死中的临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、心肌缺血预适应在急性心肌梗死中的临床意义（论文提纲范文）
（1）抑制miR-760-3p对H2O2诱导H9c2细胞凋亡的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 前言 |
| 1.1心肌缺血再灌注损伤概念及病理生理学 |
| 1.2 miRNA生物学 |
| 1.3 miRNA作为潜在治疗靶点在心肌缺血再灌注损伤中研究进展 |
| 1.4 PI3K/AKT信号通路与心肌缺血再灌注损伤 |
| 第2章 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要实验试剂 |
| 1.2 主要实验试剂详细配置 |
| 1.3 主要设备与仪器 |
| 1.4 各种实验用品的准备 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 H9c2细胞培养及处理 |
| 2.2 H9c2细胞转染 |
| 2.3 CCK8检测细胞活力 |
| 2.4 TUNEL检测细胞凋亡情况 |
| 2.5 流式细胞术检测细胞凋亡情况 |
| 2.6 RT-PCR检测miR-760-3p相对表达情况 |
| 2.7 Western Blot检测 |
| 3 统计学处理 |
| 第3章 结果 |
| 1 过氧化氢对H9c2细胞活力影响 |
| 2 miR-760-3p在过氧化氢诱导H9c2细胞损伤中表达增加 |
| 3 构建miR-760-3p低表达模型 |
| 4 抑制miR-760-3p对过氧化氢导致H9c2细胞凋亡影响 |
| 5 抑制miR-760-3p可能通过调节PI3K/AKT信号通路缓解过氧化氢诱导的H9c细胞凋亡 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 非编码RNA在心肌缺血再灌注损伤中研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）远隔缺血训练对冠心病血管新生、内皮功能及心功能的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 缺血预适应心脏保护效应的临床应用 |
| 参考文献 |
| 远隔缺血适应心肌保护作用的机制及临床应用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）自噬相关蛋白在运动预适应内源性心肌保护效应中的变化及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一部分 细胞自噬和运动预适应内源性心肌保护效应及机制研究的综述 |
| 1 前言 |
| 2 缺血预适应 |
| 2.1 缺血预适应概述 |
| 2.2 缺血预适应的心肌保护机制 |
| 3 运动对心肌的保护作用 |
| 3.1 一次运动对心肌的保护作用 |
| 3.2 短期运动对心肌的保护作用 |
| 3.3 长期运动对心肌的保护作用 |
| 4 运动预适应 |
| 4.1 运动预适应概述 |
| 4.2 运动预适应的心肌保护效应 |
| 5 细胞自噬 |
| 5.1 细胞自噬概述 |
| 5.2 细胞自噬过程中的相关蛋白 |
| 6 心肌缺血缺氧与细胞自噬 |
| 6.1 心肌缺血/再灌注与细胞自噬 |
| 6.2 缺血预适应与细胞自噬 |
| 6.3 心肌缺血耐受与细胞自噬 |
| 7 运动与心肌细胞自噬研究现状 |
| 7.1 运动诱导心肌细胞自噬 |
| 7.2 运动与细胞自噬诱导蛋白Beclin 1 |
| 7.3 运动与自噬体形成蛋白LC3 |
| 7.4 运动与细胞自噬溶酶体蛋白酶Cathepsin D |
| 7.5 运动与细胞自噬体底物蛋白p62 |
| 7.6 EP诱导细胞自噬过程的途径 |
| 8 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 自噬相关蛋白在运动预适应诱导细胞自噬和心肌保护中的变化及机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要实验试剂与配制 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 技术路线 |
| 2.4 动物分组及实验方案 |
| 2.5 取材 |
| 2.6 心肌组织石蜡切片制备 |
| 2.7 血浆心肌肌钙蛋白I检测 |
| 2.8 心肌组织缺血缺氧C-2R BG染色与图像分析 |
| 2.9 心肌组织自噬相关蛋白免疫组织化学染色及图像分析 |
| 2.10 缺血缺氧染色与自噬相关蛋白免疫组织化学染色相邻切片观察 |
| 2.11 心肌组织自噬相关蛋白免疫印迹实验及图像分析 |
| 2.12 数据统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 运动预适应降低了大强度运动造成的心肌缺血缺氧损伤 |
| 3.2 相邻切片揭示心肌缺血缺氧与自噬相关蛋白表达之间的关系 |
| 3.3 心肌组织自噬相关蛋白表达结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 运动预适应减轻大强度运动导致的心肌缺血缺氧损伤 |
| 4.2 运动预适应通过间歇性心肌缺血缺氧诱导细胞自噬 |
| 4.3 细胞自噬参与运动预适应诱导的心肌保护 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 自噬参与运动预适应心肌保护及其相关蛋白在心肌保护期的变化及机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要实验试剂与配制 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 技术路线 |
| 2.4 动物分组及实验方案 |
| 2.5 取材 |
| 2.6 血浆心肌肌钙蛋白I检测 |
| 2.7 心肌组织缺血缺氧HBFP染色与图像分析 |
| 2.8 心肌组织透射电镜观察 |
| 2.9 心肌组织自噬相关蛋白免疫荧光实验及图像分析 |
| 2.10 心肌组织自噬相关蛋白免疫印迹实验及图像分析 |
| 2.11 数据统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 血浆心肌肌钙蛋白I检测结果 |
| 3.2 心肌组织缺血缺氧HBFP染色与图像分析结果 |
| 3.3 心肌组织透射电镜观察结果 |
| 3.4 心肌组织自噬相关蛋白免疫荧光实验结果 |
| 3.5 心肌组织自噬相关蛋白免疫印迹实验结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 运动预适应减轻力竭运动导致的心肌缺血缺氧损伤 |
| 4.2 细胞自噬参与运动预适应内源性心肌保护效应 |
| 4.3 细胞自噬在运动预适应心肌保护期的作用及机制 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 附录 |
（4）miR-26a-5p通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路对心肌缺血再灌注损伤的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一章 miR-26a-5p在缺氧/复氧心肌细胞中的表达及其调控作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第二章 miR-26a-5p调控PTEN/PI3K/AKT通路改善心肌缺血再灌注损伤 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 第三章 miR-26a-5p在缺血再灌注小鼠心肌组织中的表达及其调控机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 创新性与局限性 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况 |
| 英文全文 |
（5）金丝桃苷通过激活PKC/mitoKATP信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1.实验试剂与仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2.实验内容 |
| 2.1 体内实验 |
| 2.2 体外实验 |
| 3.统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 |
| 致谢 |
（6）经局部缺血后适应的心肌再灌注治疗对STEMI患者预后影响及机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 内容与方法 |
| 2.1 研究对象及分组 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 纳入标准 |
| 2.1.3 排除标准 |
| 2.2 主要设备和仪器 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 急诊PCI术 |
| 2.3.2 研究资料的收集 |
| 2.3.3 具体观测指标 |
| 2.3.4 统计学分析 |
| 第3章 研究结果 |
| 3.1 三组患者一般基线资料比较 |
| 3.2 三组患者冠脉造影相关数据比较 |
| 3.3 三组患者术后用药情况比较 |
| 3.4 三组患者血清sFas、sFasL浓度比较 |
| 3.4.1 三组患者血清sFas浓度比较 |
| 3.4.2 三组患者血清sFasL浓度比较 |
| 3.5 三组患者血清CK-MB浓度曲线下面积比较 |
| 3.6 三组患者术后1h心电图ST段完全回落情况比较 |
| 3.7 三组患者心功能变化情况比较 |
| 3.8 三组患者随访1年后MACE事件发生情况比较 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 局限性 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 缺血后适应在急性ST段抬高型心肌梗死中的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间的科研成果 |
| 致谢 |
（7）PI3K/Akt通路在miR-499基因敲减小鼠心肌缺血/再灌注损伤中作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:MicroRNA及PI3/Akt通路与缺血-再灌注损伤之间的联系 |
| 参考文献 |
| 常见英文缩写 |
| 附件 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）瓜蒌薤白半夏汤加味联合前列地尔对冠心病PCI术后心肌微循环的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分:理论研究 |
| 1、中医病理产物在冠心病中研究进展 |
| 1.1 中医“痰邪”在冠心病的病理内涵 |
| 1.2 中医“瘀邪”在冠心病的病理内涵 |
| 1.3 痰瘀型胸痹的现代研究 |
| 2、中医对冠心病心肌微循环的研究 |
| 3、冠心病心肌微循环的治疗 |
| 3.1 中医治疗 |
| 3.2 西医治疗 |
| 4、基于循证医学对“化瘀祛痰”类中药改善胸痹PCI术后微循环的研究 |
| 4.1 资料与方法 |
| 4.2 文献检索结果 |
| 4.3 Meta分析结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第二部分:临床实验 |
| 1、临床资料与研究方法 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.4 病例纳入标准与排除标准 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.6 观察项目 |
| 1.7 统计方法 |
| 2、结果与分析 |
| 3、讨论 |
| 3.1 立法思想 |
| 3.2 组方解析 |
| 3.3 前列地尔在改善微循环的研究 |
| 3.4 “瓜蒌-薤白”与前列地尔在心肌缺血预适应的相关性研究 |
| 3.5 心肌微循环的现代研究与中医“痰瘀”相关性 |
| 3.6 “化瘀祛痰”在改善心肌微循环的研究 |
| 3.7 心肌微循环的评估 |
| 4、不足与展望 |
| 第三部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表1 痰瘀型胸痹中医证候疗效评价量表 |
| 附表2 中英文缩略词表 |
| 综述 冠心病心肌微循环障碍诊疗新进展概述 |
| 1、发生机制 |
| 2、主要评估方法 |
| 2.1 冠脉造影 |
| 2.2 血管内多普勒超声技术 |
| 2.3 微循环阻力指数 |
| 2.4 心脏磁共振显像 |
| 2.5 心脏核磁灌注成像 |
| 3、心肌微循环障碍的主要改善方法 |
| 3.1 经皮冠状动脉介入治疗 |
| 3.2 中医药治疗 |
| 3.3 其他 |
| 4、展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间主要的研究成果 |
（9）“按之则热气至”理论内涵及效应机制探讨（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 绪论 |
| 第一部分 “按之则热气至”理论源流和应用探析 |
| 1. 古代医家对“按之则热气至”理论的探讨及贡献 |
| 1.1 先秦两汉时期积累了丰富临床经验,奠定按之则热气至理论基础 |
| 1.2 魏晋南北朝时期将按之则热气至理论进一步丰富发展 |
| 1.3 隋唐时期按之则热气至理论和实践得到规范发展 |
| 1.4 宋金元时期再次全面总结内经以来的按法理论 |
| 1.5 明清时期是按之则热气至理论的全面发展阶段 |
| 2. 现代推拿临床对“按之则热气至”理论的应用 |
| 2.1“按之热气至”能温经散寒,可治疗寒邪导致的经脉促急、经筋拘挛.. 62.2“按之热气至”能温阳补虚,可治疗气血不足、肝肾亏虚的病症 |
| 2.2“按之热气至”能温阳补虚,可治疗气血不足、肝肾亏虚的病症 |
| 2.3“按之热气至”能行气活血,可治疗经脉闭阻、气滞血瘀的痛疼 |
| 2.4“按之热气至”能舒筋活络,可治疗急慢性损伤导致的筋伤 |
| 2.5“按之热气至”能调和气血,可治疗脏腑气血不和的病症 |
| 2.6“按之热气至”能通经络止痛,可治疗经络不通的各型疼痛 |
| 3. “按之则热气至”理论的实验研究 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 按之则热气至理论在解决临床实践问题中逐步形成 |
| 4.2 现代推拿临床对按之则热气至理论的实践离不开中医基本理论指导.. 124.3 用现代科学阐释按之则热气至理论实质是实验研究的重点 |
| 4.3 用现代科学阐释按之则热气至理论实质是实验研究的重点 |
| 第二部分 指按法操作要素分析及中医按法刺激器的研发 |
| 1. 指按法操作要素探索 |
| 1.1 力量的大小、方向和作用方式是指按法操作首要考虑的因素 |
| 1.2 手指温度是指按法发挥作用的重要条件 |
| 1.3 按摩头模拟手指外形和质地是保留指按法特色的重要途径 |
| 1.4 指按法操作的力和时间参数收集及分析 |
| 2. 中医按法刺激器的研发 |
| 2.1 如何实现按法作用力的大小、方向和作用方式的控制 |
| 2.2 按摩头如何模拟人拇指的温度 |
| 2.3 如何保证按摩头拥有人拇指的外形和质地感 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 研发中医按法刺激器必须要符合中医理论要求和特色 |
| 3.2 中医按法刺激器的研发必须要借助现代科技 |
| 3.3 中医按法刺激器的研发有助于推拿学科发展 |
| 第三部分 指按法操作参数与热效应之间的规律 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 拇指指腹操作温度和压力对按法热效应的影响 |
| 1.2.1.1 分组 |
| 1.2.1.2 各组操作方法 |
| 1.2.1.3 观察指标 |
| 1.2.1.4 实验步骤 |
| 1.2.1.5 技术路线 |
| 1.2.2 按压力度、停留时间、总操作时间对按法热效应的影响 |
| 1.2.2.1 分组 |
| 1.2.2.2 各组操作方法 |
| 1.2.2.3 观察指标 |
| 1.2.2.4 实验步骤 |
| 1.2.2.5 技术路线 |
| 1.2.3 按之则热气至操作的最佳组合参数 |
| 1.2.3.1 分组 |
| 1.2.3.2 各组操作方法 |
| 1.2.3.3 观察指标 |
| 1.2.3.4 实验步骤 |
| 1.2.3.5 技术路线 |
| 1.2.4 有节律的按压和持续性按压对按法热效应的影响 |
| 1.2.4.1 分组 |
| 1.2.4.2 各组操作方法 |
| 1.2.4.3 观察指标 |
| 1.2.4.4 实验步骤 |
| 1.2.4.5 技术路线 |
| 1.2.5 实验环境及技术控制 |
| 1.2.6 测量部位及检测方法 |
| 1.2.7 统计方法 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 拇指指腹操作温度和压力对按法热效应的影响 |
| 2.2 按压力度、停留时间、总操作时间对按法热效应的影响 |
| 2.2.1 不同力度按压对心俞穴温度变化的影响 |
| 2.2.2 不同停留时间按压对心俞穴温度变化的影响 |
| 2.2.3 不同总操作时间按压对心俞穴温度变化的影响 |
| 2.2.4 不同总时间和力度按压后即刻和 15min心俞穴温度变化情况 |
| 2.3 按之则热气至操作的最佳组合参数结果 |
| 2.3.1 按法L_9(3~4)正交试验结果 |
| 2.3.2 按法力量、操作时间、频率主效应方差分析结果 |
| 2.4 有节律的按压和持续性按压对按法热效应的影响 |
| 2.4.1 节律按法与持续按法不同时间点的局部热效应比较 |
| 2.4.2 节律按法与持续按法热效应持续时间的比较 |
| 3.讨论 |
| 3.1 按压力量和拇指温度是指按法产生热效应的重要因素 |
| 3.2 按压力度、停留时间、总操作时间对按法热效应的影响不同 |
| 3.3 指按法最佳压力、时间、频率组合参数 |
| 3.4 节律性按压是指按法热效应的最佳刺激方式 |
| 第四部分 按压心俞对MIRI模型兔心肌保护效应及机制研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 中医按法刺激器、兔子按摩台 |
| 1.1.3 主要仪器及试剂 |
| 1.1.4 主要器械 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物分组 |
| 1.2.2 模型制作 |
| 1.2.2.1 缺血再灌注损伤造模方法 |
| 1.2.2.2 造模评价 |
| 1.2.3 干预方法 |
| 1.2.3.1 腧穴选择与定位 |
| 1.2.3.2 按压操作方法 |
| 1.2.4 实验步骤 |
| 1.2.5 实验技术路线 |
| 1.2.6 检测指标 |
| 1.2.6.1 心肌组织形态检测 |
| 1.2.6.2 心肌损伤的指标 |
| 1.2.6.3 梗死区心肌相关蛋白含量Western Blot检测 |
| 1.2.6.4 梗死区心肌相关蛋白免疫组化检测 |
| 1.2.6.5 心肌细胞保护蛋白HSP70 检测 |
| 1.2.6.6 梗死区心肌组织腺苷含量检测 |
| 1.2.6.7 心电图检测 |
| 1.2.7 统计方法 |
| 2. 结果与分析 |
| 2.1 各组兔心电图ST段抬高情况 |
| 2.2 各组兔心肌损伤指标血清含量情况 |
| 2.3 各组兔心肌组织病理学情况 |
| 2.4 各组兔梗死区心肌组织腺苷含量情况 |
| 2.5 各组兔心肌梗死区RISK激酶表达的免疫组化检测情况 |
| 2.5.1 PI3K及P-PI3K表达的免疫组化检测情况 |
| 2.5.2 Akt及p-Akt表达的免疫组化检测情况 |
| 2.5.3 ERK及p-ERK表达的免疫组化检测情况 |
| 2.6 各组兔心肌梗死区HSP-70 表达的免疫组化检测情况 |
| 2.7 各组兔心肌梗死区RISK激酶表达的W-B检测情况 |
| 2.7.1 PI3K及p-PI3K蛋白的表达情况 |
| 2.7.2 AKT及p-AKT蛋白的表达情况 |
| 2.7.3 ERK及P-ERK蛋白的表达情况 |
| 2.8 各组兔心肌梗死区HSP-70 表达的W-B检测情况 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 按压心俞穴和大杼穴能减少缺血再灌注对心肌的损伤 |
| 3.2 按压心俞和大杼穴可通过增加HSP70 表达来保护缺血心肌 |
| 3.3 按压心俞和大杼穴能激活RISK通路发挥缺血后适应效应 |
| 3.4 心俞和大杼穴按压均可产生“热气至”效应 |
| 第五部分 全文讨论 |
| 1. 按法的作用机制研究有利于规范推拿操作和解释推拿治病的科学性 |
| 2. “按之则热气至”是中医传统理论对按法作用机制的阐述 |
| 3. 现代医学对“按之则热气至”理论实质的认识 |
| 3.1 按法在体表操作产生的作用效果属于机械性刺激 |
| 3.2 现代医学对按法刺激后局效应的认识 |
| 3.3“按之则热气至”理论包含按法的局部效应和远端效应 |
| 3.4“按之则热气至”效应对再灌注损伤心肌保护效应认识 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录A 中医按法刺激器附图 |
| 附录B 热效应红外检测图 |
| 附录C 各组心电图图 |
| 附录D 各组免疫组化图 |
| 附录E 各组Western-Blot蛋白 |
| 附录F 正文第四部分实验过程图 |
| 攻读博士学位期间论文、科研、学习及获奖情况 |
| 发表论文 |
| 主持和参与科研 |
| 交流学习 |
| 获奖情况 |
（10）VEGF165基因转染血管内皮祖细胞治疗心肌缺血再灌注损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 血管内皮生长因子165基因重组腺病毒载体的构建 |
| 2.1.1 实验材料及主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 血管内皮生长因子165基因重组腺病毒载体转染大鼠血管内皮祖细胞 |
| 2.2.1 实验动物和主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 Ad-VEGF165转染EPCs移植对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其机制 |
| 2.3.1 主要试剂 |
| 2.3.2 主要仪器 |
| 2.3.3 实验方法 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 VEGF 165基因重组腺病毒载体的构建 |
| 3.2 VEGF 165基因重组腺病毒载体转染大鼠血管内皮祖细胞 |
| 3.3 Ad-VEGF165转染EPCs移植对心肌缺血再灌注损伤大鼠的影响 |
| 4. 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
四、心肌缺血预适应在急性心肌梗死中的临床意义（论文参考文献）
- [1]抑制miR-760-3p对H2O2诱导H9c2细胞凋亡的影响及机制研究[D]. 仲红艳. 扬州大学, 2021(08)
- [2]远隔缺血训练对冠心病血管新生、内皮功能及心功能的影响[D]. 李宇炀. 昆明医科大学, 2021
- [3]自噬相关蛋白在运动预适应内源性心肌保护效应中的变化及机制研究[D]. 苑建齐. 上海体育学院, 2020
- [4]miR-26a-5p通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路对心肌缺血再灌注损伤的作用研究[D]. 邢小卫. 山东大学, 2020(08)
- [5]金丝桃苷通过激活PKC/mitoKATP信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究[D]. 王书凡. 皖南医学院, 2020(01)
- [6]经局部缺血后适应的心肌再灌注治疗对STEMI患者预后影响及机制探讨[D]. 徐海南. 南华大学, 2020(01)
- [7]PI3K/Akt通路在miR-499基因敲减小鼠心肌缺血/再灌注损伤中作用及机制的研究[D]. 刘明明. 新乡医学院, 2020(12)
- [8]瓜蒌薤白半夏汤加味联合前列地尔对冠心病PCI术后心肌微循环的研究[D]. 秦伟彬. 广西中医药大学, 2019(03)
- [9]“按之则热气至”理论内涵及效应机制探讨[D]. 李武. 湖南中医药大学, 2019
- [10]VEGF165基因转染血管内皮祖细胞治疗心肌缺血再灌注损伤的实验研究[D]. 汪砚雨. 郑州大学, 2018(12)