一、双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后不同部位淋巴细胞表型的变化（论文文献综述）
刘阳,殷丽天,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣[1]（2011）在《弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察》文中研究指明目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen,STAg）联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后不同黏膜部位抗体水平及其持续时间,为黏膜疫苗研制提供实验依据。方法 84只56周龄BALB/c小鼠随机分为免疫组和对照组,每组42只。免疫组以STAg（20μg/只）为抗原加IFN-γ（1 000 U/只）为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS 20μl滴鼻。共滴鼻2次,间隔2周。首次免疫后第0、2、4、6、8、10、12周每组处死6只小鼠,ELISA法测定鼻咽、肺和小肠冲洗液sIgA、IgG水平。结果小鼠用弓形虫STAg联合IFN-γ首次免疫后鼻咽冲洗液sIgA和IgG水平均增高,其中第2、4、6、8周sIgA水平显着高于对照组（P<0.05）,第2、4、6周IgG水平高于对照组（P<0.05）;首次免疫后第6、8周小鼠肺冲洗液sIgA水平显着高于对照组（P<0.05）,第4、6、8周IgG水平高于对照组（P<0.05）;首次免疫后第2、4、6周小肠冲洗液sIgA水平高于对照组（P<0.05）,第2、4、6、8周IgG水平高于对照组（P<0.05）。免疫后不同黏膜部位抗体均以sIgA为主,且以肠道冲洗液最高。结论 STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可诱导鼻咽、肺和小肠黏膜部位产生高水平sIgA和IgG抗体应答,并可持续68周。表明滴鼻免疫是弓形虫疫苗的适宜接种途径。
袁源[2]（2008）在《黏膜佐剂与鼠疫融合F1-V重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的初步研究》文中研究表明鼠疫是由鼠疫耶尔森菌（Y.pestis）引起重要烈性传染病,主要分为腺鼠疫、败血症鼠疫和肺鼠疫,其中肺鼠疫具有传染性强和致死率高的特点。特别是近年鼠疫呈死灰复燃之势,同时它又是重要的生物恐怖制剂之一,因此鼠疫已成为潜在威胁人类健康和国家安全的重大现实问题。疫苗是有效防控传染病的手段之一。由于传统的鼠疫疫苗存在对肺鼠疫无效,并且副反应大,至今没有实用的人用疫苗。基于肺鼠疫通过呼吸道感染的特点,激发黏膜免疫反应是预防肺鼠疫的研究重点。而传统的铝佐剂,注射后不能诱导粘膜免疫来阻断和中和毒素;霍乱毒素等黏膜佐剂,黏膜免疫效果好,但副作用大等问题。因此,寻找安全、有效的黏膜佐剂用于鼠疫黏膜疫苗的研究非常重要。蛋白体（Proteosome）是脑膜炎奈瑟氏双球菌的外膜蛋白,是多个孔道蛋白形成的囊泡样大小不同的豪微粒结构体,具有疫苗投递载体和佐剂的特征。PorB蛋白是脑膜炎双球菌的重要外膜孔道蛋白之一,是蛋白体的主要组成成分,约占其组成的60%。PorB蛋白也有类似蛋白体的免疫增强剂活性。近几年,国内外把蛋白质佐剂和从蛋白体中提取的PorB蛋白作为黏膜佐剂应用在很多疫苗的研制中,主要用于鼻内接种疫苗,并且具有实质性进展,但是对PorB重组蛋白作为佐剂的研究还未见报道。诸多研究发现,鼠疫F1、V已成为鼠疫新一代疫苗研制的首选保护性抗原分子,也是鼠疫新型疫苗研究的重点。本研究以制备的蛋白体、PorB重组蛋白粘膜佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按一定比例配置黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,从粘膜免疫角度探讨鼠疫F1-V融合重组蛋白黏膜疫苗诱导的黏膜和系统应答效果,为筛选安全、有效鼠疫粘膜疫苗佐剂奠定坚实的基础。首先,通过优化的条件,从脑膜炎B群2b型奈瑟氏双球菌中成功提取了高纯度的蛋白体,其主要由PorA,PorB和4类孔道膜蛋白三种成分组成,相对分子质量分别为41 ku,38 ku和34 ku。并且蛋白体中脂多糖、荚膜多糖和核酸的含量都符合生物制品佐剂的要求,且通过了异常毒性试验。证明了蛋白体作为疫苗佐剂的安全性,为疫苗的研究提供了黏膜佐剂。然后,通过基因工程技术,根据基因文库中提供的目的基因序列设计引物,从B群2b型脑膜炎奈瑟氏双球菌中扩增porB的基因序列,将其克隆入表达质粒,构建porB-pET28a（+）表达载体,通过IPTG诱导实现PorB重组蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中的高表达,并对纯化的表达蛋白产物了进行纯化和Western blot鉴定,获得了高纯度的PorB重组蛋白,为进一步深入研究黏膜佐剂效应奠定了结实基础。最后,将PorB重组蛋白佐剂和蛋白体佐剂分别与鼠疫F1-V融合重组蛋白制备滴鼻疫苗剂型,并与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原做对照。分别滴鼻免疫Balb/c小鼠三次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIgA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化。在本试验中,PorB重组蛋白佐剂和蛋白体佐剂均可诱导小鼠在肺、鼻咽喉和阴道中产生较高的黏膜分泌型IgA抗体而且小鼠血清IgG抗体水平显着高于鼠疫F1-V抗原组对照组,引起IgG1抗体为主,主要诱导Th2型免疫反应;同时PorB重组蛋白佐剂和蛋白体佐剂还可显着提高在脾脏中的CD4+细胞数,免疫反应趋向Th2反应。而且在各项检测中PorB重组蛋白佐剂疫苗组与蛋白体佐剂疫苗组无显着性差异。试验结果表明,PorB重组蛋白佐剂和蛋白体佐剂均可显着提高鼠疫F1-V融合重组蛋白疫苗的系统免疫应答和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂的免疫效果可与蛋白体佐剂相媲美。结论,PorB重组蛋白佐剂可用于鼠疫F1-V融合重组蛋白黏膜疫苗的研究,为鼠疫安全、有效免疫预防奠定了理论基础。同时也为其它黏膜感染性疾病疫苗的研究提供了保证。
崔萍[3]（2007）在《鼠疫亚单位疫苗和黏膜佐剂的初步研究》文中研究指明鼠疫是由鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）引起的人畜共患烈性传染病。由于鼠疫的高致病性和能够通过气溶胶在人与人之间传播,所以鼠疫因为可以作为生物武器和生物恐怖手段而引起广泛的关注。所以有效的鼠疫疫苗的研究是必要的。目前,鼠疫疫苗的发展主要集中在荚膜抗原（F1）及低钙反应蛋白（LcrV）。最近许多研究表明,重组的LcrV、F1及F1-V亚单位疫苗对肺鼠疫有很好的保护效果。F1亚单位疫苗的局限性表现在它仅仅适合于F1阳性株,而LcrV亚单位疫苗容易引起免疫抑制作用。所以,其它抗原和LcrV/F1重组的亚单位疫苗能够对多种Y. pestis感染提供保护性,或者新的抗原能成为更有效的候选疫苗抗原,这些是鼠疫疫苗研究的方向和重点。理想的候选疫苗就是能够包括更多的独毒力因子,多个III分泌系统的结构蛋白和功能蛋白混合起来将能够满足理想候选苗的要求。因此本试验研究III分泌系统的孔道蛋白YscF的免疫保护性。在各种鼠疫疾病之中,尤以肺鼠疫破坏最大。为了达到长期有效地抗肺鼠疫的目的,加强鼠疫黏膜佐剂疫苗的研究是十分必要的。本研究从B群2b型脑膜炎奈瑟氏双球菌中提取蛋白体佐剂;基因重组了组成蛋白体的三个分子PorA,PorB和Class 4,为制备黏膜佐剂疫苗提供可靠的黏膜佐剂,进一步探讨滴鼻免疫Balb/c小鼠后诱导的免疫效果。通过比较筛选出黏膜佐剂蛋白体更有效的成分。1.从Y. pestis EV76株的质粒中钓取编码YscF抗原的基因片段,原核融合表达载体pET32a上,转入宿主菌E. coli BL21,用IPTG诱导表达重组融合蛋白rYscF,采用Ni2+亲和层析方法,对用工程化E. coli BL21（DE3）表达的重组Y. pestisYscF抗原进行纯化,目标蛋白纯度达到80%以上。以蛋白体作为佐剂吸附疫苗,分别经三针肌内注射免疫和滴鼻免疫Balb/c小鼠后,结果显示,以蛋白体为佐剂滴鼻免疫后能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫。对鼻内Y. pestis的攻毒显示了有效的免疫保护力,存活率20%。所以,YscF是Y. pestis的一个很好的有免疫原性的抗原,重组Y. pestisYscF抗原有望作为改进的F1 + V亚单位疫苗的辅助成分。2.从B群2b型脑膜炎奈瑟氏双球菌中成功提取了高纯度的蛋白体,经检测蛋白体中内毒素含量、核酸含量和荚膜多糖的含量都低于样品的1%。Y. pestisYscF抗原与蛋白体佐剂分别以3∶1,在4℃疏水合成疫苗,滴鼻免疫小鼠。结果显示,蛋白体佐剂组和铝佐剂组比较,不仅提高了Y. pestisYscF抗原的系统免疫应答,而且能诱导小鼠呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜免疫应答,所以蛋白体将很有可能成为有效的黏膜免疫佐剂。3.PorA、PorB和Class 4类蛋白分子是蛋白体佐剂的主要成分,所以对它们佐剂作用的研究将会成为疫苗佐剂领域研究的新热点。将本室构建好的PorA/pET-28a（+）、PorB/pET-28a（+）和Class 4/pET-28a（+）,在IPTG诱导下,在E. coli中诱导表达,获得了高纯度的重组蛋白,免疫印迹试验表明其具有良好的免疫原性。禽流感H5N1裂解疫苗与PorA、PorB和Class 4重组蛋白疏水混合成黏膜疫苗,滴鼻免疫小鼠。通过比较,抗原和佐剂剂量比例在3:1时免疫效果最佳。试验结果显示,PorA蛋白的免疫增强效果虽然没有蛋白体的好,但也能显着提高H5N1裂解病毒黏膜疫苗的系统免疫应答和黏膜免疫应答,而PorB和Class 4的免疫佐剂作用不显着。这在疫苗佐剂的研究中将是一个新的视点。
弓鸿飞[4]（2006）在《STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答》文中指出实验目的观察可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen, STAg）和IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及持续时间,研究其抗弓形虫感染的能力,探讨STAg和IFN-γ滴鼻免疫诱导的免疫应答机制,为鼻内弓形虫复合疫苗的研制提供实验依据。实验方法本研究分三部分:第一部分观察鼻内给予IFN-γ对小鼠的抗弓形虫感染的保护作用。将6～7周龄BALB/c小鼠45只随机分为3个组,每组15只,分别经口感染弓形虫速殖子前或后鼻内给予IFN-γ或感染前鼻内给予注射用水（对照组）,观察小鼠健康状况及死亡情况,在感染后第30天处死小鼠,计数肝、脾、脑组织内弓形虫速殖子。第二部分观察IFN-γ作为佐剂的弓形虫STAg疫苗免疫效果。将5～6周龄雌性BALB/c小鼠45只随机分为3个组,分别用20μg STAg、20μg STAg+1000U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,对照组用等量PBS滴鼻,间隔14天。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日记录小鼠体重,观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部小鼠,分离计数脑、肝组织速殖子;计数IEL、PP结和脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液、粪便中弓形虫特异性IgA和血清IgG抗体。第三部分观察STAg抗原联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答持续时间。将BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg（20ug/只）为抗原、IFN-γ（1000U/只）为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次,间隔2周,分别于未免疫时、首次免疫后第2周、加强免疫后第2、4、6、8、10周处死小鼠。ELISA法测定血清及鼻咽、肺、肠冲洗液IgA、IgG变化;称取胸腺、脾脏重量;分离脾、肠上皮内淋巴细胞（intestinal intraepithelial lymphocytes, IEL）并计数。结果第一部分小鼠感染前和感染后鼻内给予IFN-γ,存活率（P>0.05）和体重（P<0.01）高于对照组,肝、脾、脑中速殖子的数量显着低于对照组（P<0.01）。第二部分STAg+IFN-γ组小鼠存活率显着高于STAg组和对照组（P<0.05）;脑、肝组织内速殖子虫荷比STAg组和对照组显着减少（P<0.01）;IEL、PP结和脾T淋巴细胞都发生了显着增殖性应答,与STAg和对照组相比增生明显（P<0.05）;鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液弓形虫特异性IgA显着增高,显着高于对照组（P<0.05）;血清IgG抗体显着高于STAg和对照组（P<0.01）。第三部分实验中小鼠胸腺重量减轻,但组间无差异。小鼠脾脏在首次免疫后第2周和
吴秀芳[5]（2006）在《鼠疫黏膜佐剂疫苗的初步研究》文中认为大多数感染因子是通过黏膜进入动物和人体的。因此,黏膜免疫的预防接种技术显得很重要。研究表明霍乱毒素B亚单位（cholera toxin B,CTB）、蛋白体（proteosomes）和protollin是比较有效的黏膜佐剂。蛋白体中的PorA、PorB和Class 4类蛋白分子佐剂效应的研究对于开发新黏膜佐剂和对蛋白体作用机制的研究有重要的意义。鼠疫在全世界范围内有死灰复燃之势,近年来中国已暴发数次小规模的人间鼠疫。在各种鼠疫疾病之中,尤以肺鼠疫破坏最大。为了能达到长期起效的目的,对肺鼠疫提供全面和长久的保护,鼠疫黏膜佐剂疫苗的研究是十分必要和重要的。本研究从B群2b型脑膜炎奈瑟氏双球菌中提取蛋白体佐剂;从福氏2a痢疾杆菌中提取脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）,与蛋白体复合制备protollin佐剂;基因重组了CTB佐剂和用于黏膜佐剂研究的PorA,PorB和Class 4蛋白,为制备鼠疫F1-V黏膜佐剂疫苗提供可靠的黏膜佐剂,进一步探讨滴鼻免疫Balb/c小鼠后诱导的免疫效果。通过比较筛选出最有效的鼠疫黏膜佐剂疫苗和佐剂分子。1.通过不同条件的优化,从B群2b型脑膜炎奈瑟氏双球菌中成功提取了高纯度的蛋白体,经蛋白质指纹图谱（MALDI-TOF-MS）鉴定鉴定为脑膜炎B群2b型奈瑟氏双球菌外膜蛋白的PorA,PorB和Class 4孔道膜蛋白,相对分子量分别为41 ku,38 ku和34 ku。经检测蛋白体中内毒素含量,核酸含量,荚膜多糖的含量都低于样品的1%。鼠疫F-V抗原与蛋白体佐剂分别以4∶1,2∶1,1∶1,1∶2和1∶4在4℃疏水合成疫苗,滴鼻免疫小鼠。结果蛋白体佐剂不仅提高鼠疫F1-V抗原的系统免疫应答,而且能诱导小鼠呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜免疫应答。通过比较,抗原和佐剂剂量比例在4∶1时免疫效果最佳。用100 LD50的鼠疫141强毒株进行腹腔攻毒,蛋白体佐剂疫苗获得了67%的保护。2.从福氏2a痢疾杆菌中提取了LPS,将LPS脱毒,经检测其中的蛋白质含量,核酸含量符合生物制品要求,具有良好的抗原性。将LPS与蛋白体制备成protollin佐剂,与鼠疫F1-V抗原制备疫苗滴鼻免疫小鼠,结果protollin佐剂比蛋白体能显着提高鼠疫F1-V抗原的系统免疫水平和黏膜免疫水平,而单独的LPS不具有免疫增强作用。3.通过PCR技术从埃尔托霍乱弧菌获得CTB的基因序列,将其克隆入表达质粒pET-32a（+） ,基因测序正确。在IPTG诱导下,在大肠杆菌中表达,获得纯化的CTB蛋白。免疫印迹试验鉴定具有良好的免疫原性。鼠疫F1-V抗原与rCT-B佐剂以5∶2、5∶1、1∶
张晓文[6]（2006）在《禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道局部和全身免疫水平的影响》文中提出将禽流感H5N2灭活抗原分别与CpG和重组IL-2配合鼻腔免疫SPF鸡，研究对鸡呼吸道局部和全身免疫水平的影响。试验分为4组，第一组为CpG佐剂组，禽流感H5N2灭活抗原与cpG配合鼻腔免疫动物；第二组为IL佐剂组，禽流感H5N2灭活抗原与重组IL-2配合鼻腔免疫动物；第三组为H5免疫纽，单独应用禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫动物；第四组为对照组，鼻腔免疫生理盐水；免疫期为56天。首先，通过检测呼吸道中上皮内淋巴细胞（IEL）数量、肥大细胞数量和CD3+T细胞数量来探讨禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道局部细胞免疫的影响；通过检测呼吸道各段IgA和IgG分泌细胞数量来探讨禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对呼吸道局部体液免疫的影响；然后，通过检测血清中特异性IgG和IgA抗体水平来探讨禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对全身免疫水平的影响；最后，通过攻毒试验来验证禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫后，鸡群对H5N1强毒株攻击的抵抗力。 1．禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道局部细胞免疫水平的影响 应用HE染色法显示呼吸道各段上皮内淋巴细胞，结果发现：CpG佐剂组和IL佐剂组气管和气管叉IEL数量比对照组显着或极显着增多（P＜0.05或P＜0.01）；而单独使用禽流感灭活抗原气管和气管叉IEL数量则无显着变化。提示禽流感H5N2灭活抗原与佐剂配合鼻腔免疫对鸡气管和气管叉IEL数量有明显的促进作用。 应用ABC染色法显示呼吸道各段CD3+T细胞，结果发现：在气管、气管叉和肺CpG佐剂组和IL佐剂组CD3+T细胞比对照组显着或极显着增多（P＜0.05或P＜0.01）；单独使用禽流感灭活抗原对CD3+T细胞数量影响不显着。提示禽流感H5N2灭活抗原与佐剂配合鼻腔免疫动物亦能明显提高鸡气管、气管叉及肺的CD3+T细胞数量。 应用甲苯胺蓝染色法显示呼吸道各段肥大细胞，结果发现：在喉部、气管、气管叉和肺CpG佐剂组和IL佐剂组肥大细胞比对照组显着或极显着增多（P＜0.05或P＜0.01）；单独使用禽流感灭活抗原呼吸道各段肥大细胞数量无明显变化。提示禽流感H5N2灭活抗原与佐剂配合鼻腔免疫对喉部、气管、气管叉及肺的肥大细胞数量有显着
刘成芳,殷国荣,刘娟娟,管志玉,石蓉,张宇斌[7]（2006）在《不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答》文中提出目的比较IFN-γ、蜂胶佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助可溶性速殖子抗原（STAg）增强机体黏膜免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组（各15只）:20μgSTAg,20μgSTAg+40μg蜂胶,20μgSTAg+1000UIFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1000UIFN-,γ均溶于总体积为20lμ的PBS中,滴鼻免疫（10lμ/鼻孔）,免疫2次,间隔14d。末次免疫后第10天用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击。攻击后第43天处死全部存活小鼠,比较各组小鼠肠黏膜小肠上皮内淋巴细胞（IEL）、PP结T淋巴细胞数;检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液中弓形虫特异性sIgA含量。结果各佐剂组小鼠IEL、PP结T淋巴细胞数显着高于STAg组,黏膜sIgA含量显着高于STAg组;蜂胶+IFN-γ联合组小鼠黏膜免疫应答水平高于单独佐剂组,其中显着高于蜂胶组（P<0.05）。结论IFN-γ作为弓形虫黏膜疫苗佐剂的效应优于蜂胶,IFN-γ+蜂胶作为复合黏膜佐剂鼻内免疫效果优于两者单独应用。
吴秀芳,于三科,谢应国,王栋,袁源,刑丽,武素琴,王希良[8]（2006）在《鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究》文中进行了进一步梳理目的以重组霍乱毒素B亚单位（rCT-B）为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgGI、gA抗体比正常对照组显着升高（P<0.01）,同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显着（P<0.01）。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgGI、gA和黏膜sIgA,其中1∶2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5∶1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显着提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。
刘成芳[9]（2005）在《STAg联合IFN-γ和蜂胶鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答》文中研究指明目的本研究首先探讨STAg 分别联合不同剂量IFN-γ、蜂胶鼻内免疫对小鼠的保护作用及IFN-γ、蜂胶作为佐剂鼻内免疫抗弓形虫感染的最佳剂量。再比较IFN-γ、蜂胶两种佐剂最佳剂量以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助STAg增强机体抗弓形虫攻击的能力,并探索两种佐剂联合应用的免疫效果。方法确定IFN-γ、蜂胶最佳剂量的实验方法:分别将70 只、60 只56 周龄BALB/c小鼠随机分为5个组,用20μg STAg分别联合不同剂量IFN-（γ250U,500U,1000U,2000U）、蜂胶（5μg,10μg,20μg, 40μg）鼻内免疫小鼠2 次,间隔14 天,末次免疫后第10 天,用RH 株弓形虫速殖子4×104 个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠健康存活情况。攻击后第29 天处死全部小鼠,分离计数脑、肝组织速殖子;计数肠系膜淋巴结（MLN）和脾T 淋巴细胞;ELISA 法检测小鼠粪便、肺冲洗液弓形虫特异性IgA 和血清IgG 抗体水平。比较IFN-γ、蜂胶佐剂作用的实验方法:将56 周龄雌性BALB/c 小鼠60 只随机分为4 个组,每组15 只,分别用20μg STAg、20μg STAg+40μg蜂胶、20μg STAg+1000U IFN-γ以及20μg STAg+40μg 蜂胶+1000U IFN-γ鼻内免疫小鼠2 次,间隔14 天,末次免疫后第10 天,用RH 株弓形虫速殖子4×104 个/只灌胃攻击,逐日记录小鼠体重,观察小鼠存活情况。攻击后第43 天处死全部小鼠,分离计数脑、肝组织速殖子;计数IEL、PP 结和脾T 淋巴细胞,免疫细胞化学（ICC）法检测其T 细胞亚群水平;ELISA 法检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液和血清中弓形虫特异性IgA 和血清IgG 抗体水平。结果随佐剂IFN-γ剂量的增加,小鼠存活率有升高趋势,1000U IFN-γ剂量组小鼠存活率最高达93%;脑、肝速殖子数呈下降的趋势, 其中STAg
孟晓丽[10]（2005）在《STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答》文中研究说明实验目的观察可溶性速殖子抗原（soluble tachyzoite antigen, STAg）和霍乱毒素（cholera toxin, CT）佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答及其抗弓形虫感染的能力,探讨STAg 和CT 滴鼻免疫诱导的免疫应答机制,为弓形虫鼻内复合疫苗研制奠定理论基础。实验方法本研究分三部分:第一部分观察STAg 不同剂量滴鼻免疫诱导小鼠的抗弓形虫感染作用,寻找STAg 滴鼻免疫最佳剂量。分别以5μg、10μg、20μg、30μg STAg/只或PBS 滴鼻免疫10 只BALB/c 小鼠2 次,间隔2 周。末次免疫后第14 天用4×104个速殖子/只攻击,观察攻击后小鼠健康状况,体重变化及存活率,攻击后第30 天处死小鼠计数脾、脑内速殖子,检测血清IgG、粪便sIgA 抗体及肠上皮内淋巴细胞（intestinal intraepithelial lymphocytes, IEL）数。第二部分观察STAg和CT不同程序滴鼻免疫诱导小鼠的抗弓形虫感染作用,寻找STAg 和CT 滴鼻免疫最佳程序。BALB/c 小鼠60 只,随机分为3 组。用20μg STAg+1μg CT/只分别滴鼻免疫1 次,2 次或3 次,前2次间隔2 周,末次间隔1 周。末次免疫后第14 天用4×104个速殖子/只攻击,观察攻击后小鼠健康状况和存活率,攻击后第30 天处死小鼠计数肝、脑内速殖子,检测血清IgG、粪便sIgA 抗体及脾、派伊尔氏结（Peyer’s patches, PP）淋巴细胞数。第三部分观察STAg和CT滴鼻免疫后黏膜和系统免疫应答的变化及其持续时间。20μg STAg+1μg CT/只滴鼻免疫BALB/c 小鼠48 只,PBS 滴鼻为对照组。滴鼻2 次（间隔2 周）后第1、2、3、4、6、8、10、12 周分别处死小鼠。ELISA 法测定血清IgG、粪便sIgA 及鼻咽冲洗液sIgA;称取胸腺、脾脏重量;计数PP 结数目;制备PP 结、脾、IEL 及鼻相关淋巴组织（nasal-associated lymphoid tissue, NALT）和鼻通道（nasal cavity, NC）淋巴细
二、双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后不同部位淋巴细胞表型的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后不同部位淋巴细胞表型的变化（论文提纲范文）
（1）弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 1 动物及弓形虫株 |
| 2 主要试剂 |
| 3 STAg的制备 |
| 4 动物分组与免疫 |
| 5 鼻咽、肺、小肠冲洗液收集 |
| 6 抗体测定 |
| 7 统计方法 |
| 结果 |
| 1 鼻咽冲洗液sIgA、IgG水平动态变化 |
| 2 肺冲洗液sIgA、IgG水平动态变化 |
| 3 小肠冲洗液sIgA、IgG水平动态变化 |
| 讨论 |
（2）黏膜佐剂与鼠疫融合F1-V重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 1. 鼠疫疫苗的研究现状 |
| 1.1 鼠疫流行概况 |
| 1.2 传统鼠疫疫苗 |
| 1.3 重组亚单位疫苗 |
| 1.4 重组DNA疫苗 |
| 1.5 结语 |
| 2. 黏膜疫苗的研究进展 |
| 3. 黏膜疫苗佐剂的研究进展 |
| 3.1 蛋白体佐剂的研究进展 |
| 3.2 PorB蛋白佐剂的研究进展 |
| 4. 鼻黏膜免疫研究进展 |
| 4.1 鼻黏膜免疫机理 |
| 4.2 鼻腔免疫与其它黏膜免疫途径比较 |
| 第一部分 蛋白体佐剂的制备 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 菌种和实验动物 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 培养基和溶液 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 蛋白体的制备和纯化 |
| 2.2 蛋白体组分鉴定 |
| 2.3 蛋白体中LPS的检测 |
| 2.4 核酸含量测定 |
| 2.5 荚膜多糖的测定 |
| 2.6 异常毒性试验 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 蛋白体的提纯结果 |
| 3.2 蛋白体组分鉴定结果 |
| 3.3 蛋白体中LPS的检测结果 |
| 3.4 核酸含量测定结果 |
| 3.5 荚膜多糖的测定结果 |
| 3.6 异常毒性试验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二部分 PorB重组蛋白佐剂的制备 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 菌株和质粒 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 PorB蛋白编码序列的获取 |
| 2.2 porB-pGEM-T克隆载体的构建 |
| 2.3 porB-pGEM-T克隆载体的转化 |
| 2.4 porB-pGEM-T阳性克隆的鉴定 |
| 2.5 porB-pET28a(+)重组质粒的构建 |
| 2.6 PorB重组蛋白的表达 |
| 2.7 PorB重组蛋白的纯化 |
| 2.8 PorB重组蛋白的免疫印迹检测 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 脑膜炎双球菌porB基因扩增及鉴定 |
| 3.2 PorB重组蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 |
| 3.3 PorB重组蛋白的Western印迹鉴定 |
| 四、讨论 |
| 第三部分 不同成分黏膜佐剂的鼠疫F1-V融合蛋白疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠免疫应答效果的研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 材料 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 仪器 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 动物分组与免疫 |
| 2.2 黏膜冲洗液的收集和淋巴细胞的制备 |
| 2.3 ELISA检测小鼠血清抗体效价 |
| 2.4 抗体亚型分类 |
| 2.5 ELISA 检测呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA |
| 2.6 T淋巴细胞亚群分类 |
| 三、实验结果 |
| 3.1 不同佐剂的鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原免疫Balb/c小鼠血清IgG的水平 |
| 3.2 不同佐剂的鼠疫F1-V融合重组蛋白免疫Balb/c小鼠血清抗体亚型分析 |
| 3.3 不同佐剂的鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原免疫Balb/c小鼠呼吸道、消化道、 生殖道sIgA的水平 |
| 3.4 不同佐剂的鼠疫F1-V融合重组蛋白免疫Balb/c小鼠淋巴细胞亚群的分析 |
| 四、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（3）鼠疫亚单位疫苗和黏膜佐剂的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 黏膜免疫的研究进展 |
| 1.1 黏膜佐剂 |
| 1.1.1 CT 和E. coli 不耐热肠毒素 |
| 1.1.2 细胞因子佐剂 |
| 1.1.3 N. meningitides 的外膜蛋白（OMP） |
| 1.1.4 减毒沙门氏菌 |
| 1.1.5 CpG 序列 |
| 1.2 黏膜免疫途径 |
| 1.3 展望 |
| 第二章 鼠疫新型疫苗的研究进展 |
| 2.1 Y. PESTIS 的主要抗原成分 |
| 2.2 鼠疫疫苗的研究 |
| 2.1.1 减毒活疫苗 |
| 2.1.2 亚单位疫苗 |
| 2.1.3 组分疫苗 |
| 2.4 展望 |
| 第三章 蛋白体的研究进展 |
| 3.1 N. MENINGITIDES 外膜蛋白的研究进展 |
| 3.1.1 Ⅰ类外膜蛋白（PorA） |
| 3.1.2 Ⅱ类外膜蛋白（PorB） |
| 3.1.3 Ⅳ类外膜蛋白（Class 4 protein） |
| 3.2 蛋白体作为黏膜佐剂的研究进展 |
| 3.2.1 蛋白体增强免疫反应的基本原理 |
| 3.2.2 蛋白体的应用 |
| 3.3 蛋白体的研究前景 |
| 第四章 鼠疫菌YSCF 抗原基因在E. COLI 中的表达及纯化鉴定 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 溶液和培养基 |
| 4.1.3 菌种及质粒 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 Y. pestisYscF 结构基因的PCR 扩增 |
| 4.2.2 表达质粒pET32α-YscF 的构建及鉴定 |
| 4.2.3 pET32α-YscF 的诱导表达及表达产物的检测 |
| 4.2.4 表达产物的初步纯化 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 Y. pestisYscF 抗原结构基因的PCR 扩增 |
| 4.3.2 重组质粒pMD18-T/ YscF 测序及双酶切鉴定 |
| 4.3.3 重组表达质粒pET32α-YscF 的鉴定 |
| 4.3.4 YscF 融合蛋白的表达及鉴定 |
| 4.3.5 YscF 融合蛋白Western-blotting 鉴定 |
| 4.3.6 rYscF 抗原活性鉴定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 蛋白体的制备和鼠疫黏膜免疫的应用研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 菌种 |
| 5.1.3 培养基和溶液 |
| 5.1.4 ELASA 试剂 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 蛋白体的制备 |
| 5.2.2 蛋白体的纯化 |
| 5.2.3 蛋白体某些物质的检测 |
| 5.3 动物试验 |
| 5.3.1 蛋白体-鼠疫YscF 重组蛋白疫苗的制备 |
| 5.3.2 实验动物和免疫方案 |
| 5.3.3 YscF 攻毒实验 |
| 5.3.4 检测样品的收集 |
| 5.3.5 ELISA 测血清效价 |
| 5.3.6 ELISA 检测血清IgA 和呼吸道和消化道特异性sIgA |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 蛋白体的制备和纯化鉴定结果 |
| 5.4.2 蛋白体中某些物质的检测结果 |
| 5.4.3 小鼠血清总IgG 的检测结果 |
| 5.4.4 小鼠呼吸道及消化道特异性sIgA 的测定 |
| 5.4.5 淋巴细胞亚群分析 |
| 5.4.6 免疫保护力试验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 蛋白体三分子的原核表达、纯化及免疫佐剂的研究 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 菌株和质粒 |
| 6.1.2 实验动物 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 重组蛋白的表达 |
| 6.2.2 重组蛋白的纯化 |
| 6.2.3 SDS-PAGE 鉴定外源蛋白的表达 |
| 6.2.4 Western-blotting 鉴定目的蛋白 |
| 6.2.5 蛋白体- H5N1裂解病毒疫苗的制备 |
| 6.2.6 实验动物和免疫方案 |
| 6.2.7 ELISA 测血清IgG 效价 |
| 6.2.8 ELISA 检测呼吸道和消化道特异性sIgA |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 pET28a(+)-PorA、pET28a(+)-PorB、pET28a(+)-Class 4 重组质粒在E. coli 中表达、纯化 |
| 6.3.2 Western-blotting 鉴定表达的重组蛋白 |
| 6.3.4 小鼠血清总 IgG 水平的检测结果 |
| 6.3.5 小鼠血清 IgA 和呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA 的测定结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略语英文对照表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 肠上皮内淋巴细胞抗弓形虫感染的免疫功能研究进展 |
| 正文 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验 |
| 鼻内给予 IFN-γ对小鼠抗弓形虫感染的保护作用 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 实验 |
| IFN-γ作为佐剂的弓形虫 STAg 疫苗免疫效果观察 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 实验 |
| 弓形虫 STAg 抗原联合 IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答持续时间的观察 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ主要溶液配制方法 |
| 附录Ⅱ实验数据表 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（5）鼠疫黏膜佐剂疫苗的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 黏膜佐剂疫苗和鼠疫疫苗的研究进展 |
| 1.1 黏膜疫苗的概述 |
| 1.2 黏膜佐剂的研究进展 |
| 1.2.1 霍乱毒素B 亚单位（CTB）佐剂的研究进展 |
| 1.2.2 蛋白体佐剂的研究进展 |
| 1.2.3 Protollin 佐剂的研究进展 |
| 1.2.4 脑膜炎双球菌外膜蛋白孔道蛋白的研究进展 |
| 1.3 鼠疫疫苗的研究进展 |
| 1.3.1 当今鼠疫流行态势 |
| 1.3.2 传统鼠疫疫苗 |
| 1.3.3 重组亚单位疫苗 |
| 1.3.4 重组DNA 疫苗的研究 |
| 1.3.5 结语 |
| 1.4 黏膜免疫途径的研究进展 |
| 1.4.1 黏膜免疫 |
| 1.4.2 黏膜淋巴细胞的作用 |
| 1.4.3 鼻黏膜免疫研究进展 |
| 1.5 展望 |
| 第二章 蛋白体佐剂的制备和用于鼠疫黏膜疫苗的研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 菌种 |
| 2.1.3 培养基和溶液 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 蛋白体制备条件的优化 |
| 2.2.2 蛋白体某些物质的检测 |
| 2.2.3 异常毒性试验 |
| 2.2.4 蛋白体组分鉴定 |
| 2.2.5 蛋白体的稳定性检测 |
| 2.2.6 蛋白体多抗的制备 |
| 2.2.7 动物试验蛋白体免疫佐剂的研究 |
| 2.2.8 免疫保护力试验 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 脑膜炎双球菌培养基的优化结果 |
| 2.3.2 脑膜炎双球菌培养时间、速度和灭活条件的优化结果 |
| 2.3.3 蛋白体提取过程的优化结果 |
| 2.3.4 蛋白体的制备和纯化鉴定结果 |
| 2.3.5 蛋白体组分鉴定结果 |
| 2.3.6 蛋白体的稳定性检测结果 |
| 2.3.7 蛋白体中某些物质的检测结果 |
| 2.3.8 蛋白体多抗效价结果分析 |
| 2.3.9 小鼠血清总IgG 水平的检测结果 |
| 2.3.10 抗体亚型分类 |
| 2.3.11 小鼠呼吸道及消化道特异性sIgA 的测定 |
| 2.3.12 小鼠生殖道特异性sIgA 的测定 |
| 2.3.13 淋巴细胞亚群分析 |
| 2.3.14 免疫保护力试验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 Protollin 佐剂的制备及免疫佐剂的研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 菌种 |
| 3.1.3 溶液 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 LPS 的提取方法 |
| 3.2.2 LPS 的脱毒 |
| 3.2.3 LPS 的脱毒检测 |
| 3.2.4 LPS 某些物质的检测 |
| 3.2.5 异常毒性试验 |
| 3.2.6 Protollin 佐剂的制备 |
| 3.2.7 Protollin 佐剂疫苗的制备及免疫方案 |
| 3.2.8 免疫评价 |
| 3.2.9 T 淋巴细胞增殖试验（MTT） |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 蛋白质含量的测定结果 |
| 3.3.2 糖含量的测定结果 |
| 3.3.3 核酸含量测定结果 |
| 3.3.4 异常毒性试验结果 |
| 3.3.5 LPS 的脱毒检测结果 |
| 3.3.6 免疫双扩试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 蛋白体三分子的原核表达和纯化及免疫佐剂的研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 菌株和质粒 |
| 4.1.2 主要试剂及试剂盒 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.1.5 常用溶液的配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 引物的设计与合成 |
| 4.2.2 目的基因的PCR 扩增 |
| 4.2.3 采用玻璃奶回收试剂盒回收扩增的DNA 片段 |
| 4.2.4 PCR 产物与T 载体连接 |
| 4.2.5 新鲜感受态细胞的制备(CaCl_2 法) |
| 4.2.6 连接产物的转化 |
| 4.2.7 重组质粒的小量提取 |
| 4.2.8 重组质粒鉴定 |
| 4.2.9 重组原核表达质粒的构建 |
| 4.2.10 重组蛋白的表达及纯化 |
| 4.2.11 SDS-PAGE 电泳鉴定外源蛋白的表达 |
| 4.2.12 Western blotting 鉴定目的蛋白 |
| 4.2.13 蛋白体-鼠疫F1-V 重组蛋白疫苗的制备 |
| 4.2.14 实验动物和免疫方案 |
| 4.2.15 ELISA 测血清效价 |
| 4.2.16 抗体亚型分类 |
| 4.2.17 ELISA 检测血清IgA 和呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA |
| 4.2.18 T 淋巴细胞亚群分类 |
| 4.2.19 T 淋巴细胞增殖试验（MTT） |
| 4.2.20 免疫保护力试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 PCR 产物的电泳结果 |
| 4.3.2 重组质粒的PCR 鉴定结果 |
| 4.3.3 重组质粒的酶切鉴定结果 |
| 4.3.4 测序结果分析 |
| 4.3.5 pET28a(+)-PorA、pET28a(+)-PorB、pET28a(+)-Class 4 重组质粒在大肠杆菌中表达、纯化 |
| 4.3.6 Western blotting 鉴定表达的重组蛋白 |
| 4.3.7 小鼠血清总IgG 水平的检测结果 |
| 4.3.8 抗体亚型分类结果 |
| 4.3.9 小鼠血清IgA 和呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA 的测定结果 |
| 4.3.10 淋巴细胞亚群分析结果 |
| 4.3.11 MTT 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 CTB 佐剂的原核表达纯化和免疫佐剂的研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 菌种和质粒 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 引物的设计与合成 |
| 5.2.2 目的基因的PCR 扩增 |
| 5.2.3 采用玻璃奶回收试剂盒回收扩增的DNA 片段 |
| 5.2.4 PCR 产物与T 载体连接 |
| 5.2.5 新鲜感受态细胞的制备(CaCl_2 法) |
| 5.2.6 连接产物的转化 |
| 5.2.7 重组质粒的小量提取 |
| 5.2.8 重组质粒鉴定 |
| 5.2.9 重组原核表达质粒的构建 |
| 5.2.10 重组蛋白的表达及纯化 |
| 5.2.11 SDS-PAGE 电泳鉴定外源蛋白的表达 |
| 5.2.12 Western blotting 鉴定目的蛋白所表达的重组蛋白 |
| 5.2.13 实验动物和免疫方案 |
| 5.2.14 ELISA 测血清效价 |
| 5.2.15 抗体亚型分类 |
| 5.2.16 ELISA 检测血清IgA 和呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA |
| 5.2.17 T 淋巴细胞亚群分类 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 PCR 产物的电泳结果 |
| 5.3.2 重组质粒的PCR 鉴定结果 |
| 5.3.3 重组质粒的酶切鉴定结果 |
| 5.3.4 测序结果 |
| 5.3.5 pET32a(+)-CTB 重组质粒在大肠杆菌中表达、纯化 |
| 5.3.6 Western Blotting 鉴定表达的重组蛋白结果 |
| 5.3.7 小鼠血清总IgG 和IgA 水平的测定 |
| 5.3.8 抗体亚型分类 |
| 5.3.9 小鼠呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA 的测定结果 |
| 5.3.10 T 淋巴细胞亚群分析 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 不同鼠疫佐剂疫苗滴鼻免疫小鼠诱导黏膜与系统免疫反应 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 主要试剂 |
| 6.1.2 实验动物和主要仪器 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 实验动物和免疫方案 |
| 6.2.2 黏膜冲洗液的收集和淋巴细胞的分离 |
| 6.2.3 ELISA 测血清效价 |
| 6.2.4 抗体亚型分类 |
| 6.2.5 ELISA 检测血清IgA 和呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA |
| 6.2.6 T 淋巴细胞亚群分类 |
| 6.2.7 T 淋巴细胞增殖试验（MTT） |
| 6.2.8 免疫保护力试验 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 小鼠血清总IgG 水平的检测结果 |
| 6.3.2 抗体亚型分类结果 |
| 6.3.3 小鼠血清IgA 和呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA 的测定结果 |
| 6.3.4 淋巴细胞亚群分析结果 |
| 6.3.5 MTT 结果 |
| 6.3.6 免疫保护力试验结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略语英文对照表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道局部和全身免疫水平的影响（论文提纲范文）
| 原创性声明 |
| 学位论文版权使用授权书 |
| 目录 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 上篇 文献综述 |
| 第一章 动物黏膜免疫的特点 |
| 1.黏膜免疫的组织结构基础 |
| 2.鼻腔免疫研究进展 |
| 3.黏膜免疫的效应因子—SIgA |
| 4.黏膜免疫应答 |
| 参考文献 |
| 第二章 黏膜免疫佐剂的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第三章 禽流感 |
| 1.禽流感的发生与危害 |
| 2.病原学与流行病学 |
| 3.禽流感的公共卫生意义及其在我国的流行现状 |
| 参考文献 |
| 第四章 呼吸系统组织学与免疫学特点 |
| 1.呼吸系统组织学特点 |
| 2.呼吸系统免疫学特点 |
| 参考文献 |
| 下篇 试验研究 |
| 第一章 免疫佐剂CpG的提取制备 |
| 参考文献 |
| 第二章 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道局部细胞免疫水平的影响 |
| 试验一 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道上皮内淋巴细胞数量的影响 |
| 参考文献 |
| 试验二 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道CD3~+T细胞数量的影响 |
| 参考文献 |
| 试验三 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道肥大细胞数量的影响 |
| 参考文献 |
| 第三章 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡局部体液免疫水平的影响 |
| 试验四 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道IgA和IgG分泌细胞数量的影响 |
| 参考文献 |
| 试验五 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡十二指肠内容物特异性IgA水平的影响 |
| 参考文献 |
| 第四章 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡全身免疫水平的影响 |
| 试验六 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对血清中特异性抗体水平的影响 |
| 参考文献 |
| 试验七 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对血清中特异性IgA水平的影响 |
| 参考文献 |
| 第五章 攻毒试验 |
| 试验八 禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡攻毒保护作用的研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 弓形虫 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物分组与处理 |
| 1.2.2 可溶性速殖子抗原（STAg）的制备 |
| 1.2.3 小肠上皮内淋巴细胞（IEL）分离 |
| 1.2.4 PP结淋巴细胞分离与计数 |
| 1.2.5 粪便及黏膜冲洗液的收集与处理 |
| 1.2.6 弓形虫特异性sIgA含量测定 |
| 1.2.7 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 肠黏膜部位IEL、PP结T淋巴细胞数 |
| 2.2 黏膜部位弓形虫特异性sIgA抗体含量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肠黏膜部位细胞免疫应答 |
| 3.2 黏膜部位sIgA与抗弓形虫感染 |
（8）鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 实验动物和免疫方案 |
| 1.3 ELISA 测血清抗体效价 |
| 1.4 抗体亚型分类 |
| 1.5 ELISA 检测呼吸道、消化道和生殖道特异性sIgA |
| 1.6 T淋巴细胞亚群分类 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 小鼠血清总IgG和IgA水平的测定 |
| 2.2 抗体亚型分类 |
| 2.3 小鼠呼吸道、消化道、生殖道特异性sIgA的测定结果 |
| 2.4 T淋巴细胞亚群分析 |
| 3 讨论 |
（9）STAg联合IFN-γ和蜂胶鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答（论文提纲范文）
| STAg 联合IFN-γ鼻内免疫小鼠的抗弓形虫感染保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| STAg 联合蜂胶鼻内免疫小鼠的抗弓形虫感染保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| IFN-γ和蜂胶作为佐剂的弓形虫STAg疫苗免疫效果观察 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述:树突状细胞过继免疫的研究进展 |
| 正文 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答（论文提纲范文）
| 不同剂量STAg 滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| STAg 和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| STAg 和霍乱毒素滴鼻免疫诱导黏膜及系统免疫应答持续时间观察 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述:黏膜疫苗及其佐剂的研究进展 |
| 正文 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
四、双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠后不同部位淋巴细胞表型的变化（论文参考文献）
- [1]弓形虫STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导不同黏膜部位抗体水平动态观察[J]. 刘阳,殷丽天,孟晓丽,王海龙,刘红丽,殷国荣. 中国病原生物学杂志, 2011(02)
- [2]黏膜佐剂与鼠疫融合F1-V重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的初步研究[D]. 袁源. 中国人民解放军军事医学科学院, 2008(11)
- [3]鼠疫亚单位疫苗和黏膜佐剂的初步研究[D]. 崔萍. 西北农林科技大学, 2007(06)
- [4]STAg联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答[D]. 弓鸿飞. 山西医科大学, 2006(12)
- [5]鼠疫黏膜佐剂疫苗的初步研究[D]. 吴秀芳. 西北农林科技大学, 2006(05)
- [6]禽流感H5N2灭活抗原鼻腔免疫对鸡呼吸道局部和全身免疫水平的影响[D]. 张晓文. 南京农业大学, 2006(02)
- [7]不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答[J]. 刘成芳,殷国荣,刘娟娟,管志玉,石蓉,张宇斌. 热带医学杂志, 2006(05)
- [8]鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究[J]. 吴秀芳,于三科,谢应国,王栋,袁源,刑丽,武素琴,王希良. 免疫学杂志, 2006(03)
- [9]STAg联合IFN-γ和蜂胶鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染保护性免疫应答[D]. 刘成芳. 山西医科大学, 2005(05)
- [10]STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答[D]. 孟晓丽. 山西医科大学, 2005(05)