一、地塞米松对三维培养大鼠肝细胞分泌的影响（论文文献综述）
刘振辉[1]（2021）在《仿生导电人工神经支架的研究》文中指出目的:（1）制备具有导电功能的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架,并对其进行表征,验证其生物相容性,利用支架进行细胞三维立体培养,研究电刺激对RSC96细胞生长的影响。（2）制备具有取向性纳米纤维的PLLA纤维膜,并对其进行表征,验证其生物相容性,研究纤维取向性对RSC96细胞信号蛋白的影响。（3）制备仿生导电人工神经支架,将支架植入大鼠坐骨神经缺损,探讨仿生导电人工神经支架对大鼠坐骨神经修复效果和机制。方法:（1）利用梯度冷冻和冷冻干燥技术制备出具有多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架。通过微结构、溶胀和脱溶涨、导电率、形状记忆功能、载药及药物释放性能、力学性能和生物相容性对制备的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架进行表征,对三维立体培养的RSC96细胞进行组织学评价,观察不同培养条件下细胞生长行为。（2）利用静电纺丝技术制备出具有取向纳米纤维的PLLA纤维膜。通过扫描电镜、力学性能、降解性和生物相容性对制备的PLLA纤维膜进行表征。利用免疫荧光技术研究纤维取向性对RSC96细胞ERK、P38MAPK、MEK和LRP4蛋白的影响。（3）利用定制的模具制备多微通道导电支架,将第二部分制备的高取向PLLA纤维膜和定制的多微通道导电支架组合成仿生导电人工神经支架,并将神经支架植入到大鼠坐骨神经缺损处。将实验动物分为支架组（S）、支架联合电刺激组（S&E）和自体神经移植组（AT）,通过坐骨神经功能指数、神经电生理检测、肌肉组织学检测、再生神经的组织学检测来分析仿生导电神经支架对周围神经再生的影响。结果:（1）加入的多壁碳纳米管没有影响琼脂糖支架的孔隙组成比和形状记忆功能,但0.025%wt多壁碳纳米管提高了支架在溶胀平衡状态下的溶胀率和保水能力。多壁碳纳米管改变了琼脂糖支架的电导率、载药及药物释放能力和力学性能。高浓度多壁碳纳米管对RSC96细胞和PC12细胞的增殖有一定影响。电镜下PC12细胞在多壁碳纳米管琼脂糖支架上生长状态良好。多壁碳纳米管的加入未改变RSCs细胞的S100β表达量。当电刺激存在时,RSC96细胞层沿支架纵轴排列较好,0.025%MWCNT-琼脂糖支架和0.05%MWCNT-琼脂糖支架表现出更好的细胞黏附性。（2）制备的PLLA纤维膜为多孔结构,纤维大部分为取向排列,高取向纤维膜的纤维取向性更高,其表面光滑,粗细均匀,纤维间形成立体的三维孔隙并分布于整个纤维膜。取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（59.06±2.49）MPa,取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（56.82±2.80）MPa,两种纤维膜拉伸强度没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（1037.07±133.30）MPa,高取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（971.45±112.39）MPa,两种纤维膜杨氏模量没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为364.48±53.79,高取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为356.89±40.21,两种纤维膜断裂伸长率没有统计学差异。增加PLLA纤维膜的取向,并未明显改变纤维膜的拉伸强度、杨氏模量和断裂延伸率。改变纤维膜的纤维取向程度,对PLLA纤维膜的降解速率没有影响。取向PLLA纤维膜和高取向PLLA纤维膜对RSC96细胞的增殖均没有影响。和取向性纤维膜相比,高取向的PLLA纤维膜上的RSC96细胞呈现出现明显的丝状伪足,沿着排列整齐的纳米纤维延伸。和取向性PLLA纤维膜相比,高取向PLLA纤维增加了RSC96细胞ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白表达量（P<0.01）。（3）制备的仿生导电人工神经支架跟大鼠坐骨神经匹配良好,植入神经缺损出未见异物反应。S&E组坐骨神经功能指数、神经电生理结果、肌肉组织学结果、轴突和髓鞘再生效果接近AT组,好于S组。术后12周时免疫组化结果显示,NF-H蛋白和S00-β蛋白表达,S&E组和AT组的高于S组（P<0.01）,而S&E组接近AT组。LRP4蛋白和P38MAPK蛋白表达,AT组高于S组（P<0.01）,但AT和S&E组,S&E组和S组相比均无差异无统计学意义。ERK蛋白和MEK蛋白表达情况,AT组高于S组和S&E组（P<0.01）,S&E组和S组两者相比差异无统计学意义。结论:（1）多壁碳纳米管琼脂糖支架具有高的孔隙率、一定的形状记忆功能、载药及药物释放能力、导电能力,良好的生物相容性。在电刺激存在时,具有导电性能的多壁碳纳米管琼脂糖支架对RSC96细胞生长具有引导作用。（2）和取向性的PLLA纤维膜相比,高取向性的PLLA纤维膜未改变其力学性能、降解性和生物相容性,但增加了ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白的表达量,能引导RSC96细胞生长和迁移,这有利于其在周围神经再生中的应用。（3）仿生导电人工神经支架联合电刺激能够增强周围神经再生。电刺激可能通过ES通过与MAPK信号通路的激活促进周围神经再生,ERK、P38MAPK、MEK和LRP4可能参与周围神经再生。
颜妍[2]（2020）在《地塞米松诱导大鼠肝脏糖脂代谢紊乱分子机制研究》文中指出糖脂代谢紊乱（Glucose metabolism disorders）是指机体内糖代谢相关激素和酶以及代谢器官发生病变,致使糖代谢紊乱;以及自身或环境因素造成的血液和相关代谢性器官脂质沉积或代谢异常的脂质代谢紊乱。而糖尿病、非酒精性脂肪肝、肥胖等疾病都与糖脂代谢紊乱密切相关,随着生活水平的提高,此类代谢疾病发生越来越普遍,但糖脂代谢紊乱的机制却有待完善。本文通过地塞米松作用不同时间诱导大鼠肝脏糖脂代谢紊乱模型,进一步揭示糖脂代谢紊乱的发病机制。将180-220g的雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组（Ctrl）、地塞米松（DEX）不同作用之间 7d、14d、21d、28d 组（DEX07、DEX14、DEX21 和 DEX28）。地塞米松作用组分别给予lmg/kg地塞米松腹腔注射给药,作用不同的给药时间后,处死大鼠收集血清、肝脏组织和粪便样本用以后续实验。分别检测血清中ALT、AST、ALP、Glucose、FINS、TG、CHOL、LDL以及HDL的含量;HE染色观察肝脏组织病变和脂肪沉积情况;通过16srRNA高通量测序发分析大鼠粪便中肠道菌群的变化;利用转录组测序方法分析大鼠肝脏中差异基因的表达,对相关基因进行功能富集。结果表明,DEX作用后,与Ctrl组相比,糖脂代谢紊乱大鼠的肝脏指数显着升高;血:清中 ALT、AST、ALP、Glucose、FINS、TG、CHOL、LDL、HDL、TBIL、TBA和LPS的含量均显着升高。16srRNA高通量测序后发现DEX作用后,大鼠肠道菌群中特有的OTU数增加,所含微生物物种增多;肠道菌群组成部分,影响门和属水平相关菌群,在属水平有许多菌群与环境因子正负相关;并且对肠道菌群的Alpha多样性和Beta多样性具有影响。DEX作用后转录组测序发现,随着DEX作用时间增多,差异基因数目增多;差异基因GO功能富集后发现,差异基因主要分布于分子功能、生物过程和细胞组成三个GO term;KEGG通路将差异基因主要富集于胆固醇代谢通路、花生四烯酸代谢通路和青少年成熟期糖尿病途径等信号通路。结果证明,地塞米松通过影响肝脏病变、糖脂指标、肠道菌群及转录组水平基因变化诱导大鼠发生肝脏糖脂代谢紊乱。
尹菲[3]（2020）在《转染HGF的人脐带间充质干细胞调控TGF-β1/Smads信号通路对肝星状细胞的影响》文中研究说明目的:本研究旨在通过分析转染HGF的hUCMSCs对大鼠肝星状细胞系（HSCs-T6）的影响,探究转染HGF的hUCMSCs通过抑制TGF-β1/Smads信号通路的激活抑制HSCs-T6增殖,促进其凋亡,抑制其活化并减少CollagenⅠ和CollagenⅢ表达的可能作用机制,为抗肝纤维化的治疗提供研究基础。方法:采用Transwell间接共培养体系,将本研究室保存的转染HGF的hUCMSCs与HSCs-T6共培养,上层接种hUCMSCs,下层接种HSCs-T6;实验分为四组:对照组（HSCs-T6+完全培养基）、HGF组（HSCs-T6+HGF-hUCMSCs）、LV5-NC组（HSCs-T6+LV5-NC-hUCMSCs）和hUCMSC组（HSCs-T6+hUCMSCs）。共培养1,2,3d后,显微镜观察各组HSCs-T6的生长状态;MTT法检测各组HSCs-T6的细胞活力;Hoechst33342染色和流式分析法检测各组HSCs-T6的凋亡;免疫细胞化学,Western blotting及RT-PCR法检测各组HSCs-T6α-SMA,CollagenⅠ和CollagenⅢ和以及TGF-β1,Smad2和Smad3 m RNA和蛋白水平的表达。结果:1.显微镜观察结果表明,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,HSCs-T6均皱缩变小,排列稀疏;且HGF组变化最明显;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,HSCs-T6的生长状态无明显差异。2.MTT检测结果显示,共培养1d时,HGF组与对照组相比,OD值降低（P<0.05）。共培养2d时,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,OD值均显着降低（P<0.01）。共培养3d时,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,OD值的降低更为显着（P<0.001）;HGF组与LV5-NC组和hUCMSC组相比,OD值均显着降低（P<0.01）;LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异（P>0.05）。3.Hoechst33342染色结果显示,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,HSCs-T6凋亡小体数目增多;且HGF组增多最明显;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异。流式分析结果表明,共培养1,2,3d时,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,HSCs-T6凋亡比例均增加（P<0.05）;且HGF组与LV5-NC组和hUCMSC组相比,细胞凋亡比例均增加（P<0.05）;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异（P>0.05）。4.免疫细胞化学结果显示,共培养1d时,HGF组、hUCMSC组和LV5-NC组与对照组相比,α-SMA,CollagenⅠ和CollagenⅢ以及TGF-β1,Smad2和Smad3的表达均无明显差异（P>0.05）;共培养2d和3d时,上述指标的表达均下降（P<0.05）;且HGF组与hUCMSC组和LV5-NC组相比,上述指标表达均降低（P<0.05）;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异（P>0.05）。5.RT-PCR和Western blotting结果显示,共培养2d和3d时,HGF组、hUCMSC组和LV5-NC组与对照组相比,无论是m RNA水平还是蛋白水平,α-SMA,CollagenⅠ和CollagenⅢ以及TGF-β1,Smad2和Smad3的表达均下降（P<0.05）;且HGF组与hUCMSC组和LV5-NC组相比,上述指标表达均降低（P<0.05）;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异（P>0.05）。结论:转染HGF的hUCMSCs能够降低HSCs-T6的细胞活力,促进其凋亡,使其生长受到抑制;抑制其活化,减少CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达,发挥抗肝纤维化的作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路的激活有关。
李力[4]（2020）在《miR-148a/LDLR介导孕期地塞米松暴露致雄性成年子代高胆固醇血症的发生》文中进行了进一步梳理目的:流行病学调查提示,孕期不良环境暴露的子代成年时期高胆固醇血症易感,并具有宫内起源。地塞米松作为一种人工合成的糖皮质激素,可治疗早产及相关妊娠疾病,因此广泛于产前使用。流行病学调查提示,产前地塞米松滥用将导致子代成年疾病易感,如肥胖、神经系统、骨关节炎和代谢综合征等。虽然已有动物研究发现,孕期地塞米松暴露（prenatal dexamethasone exposure,PDE）可致子代出生后血胆固醇水平升高,但未深入研究其是否具有宫内起源以及其宫内编程机制。本研究旨在证实PDE所致的雄性大鼠成年子代高胆固醇血症,并阐明其宫内表观遗传编程机制。方法:Wistar大鼠受孕分为四组:正常对照组和地塞米松小、中、大剂量组[即PDE（S）、PDE（M）、PDE（H）]。于孕9-21天（gestational day 9-21,GD9-21）经颈部皮下注射不同剂量（0、0.1、0.2和0.4 mg/kg·d）的地塞米松,部分孕鼠于GD21经麻醉处死,取血和胎肝组织,另一部分经自然分娩于出生后12周（postnatal week 12,PW12）和PW28处死,取血和肝脏组织,母系遗传的F2代与F3代雄性大鼠在PW12周处死,取血和肝脏组织。通过生化试剂酶法测定出生前、后血胆固醇水平。通过q RT-PCR和Western blotting技术检测多代肝组织多种胆固醇代谢相关基因的表达,包括糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）、3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGCR）、载脂蛋白B（apolipoprotein B,Apo B）、清道夫受体B1（scavenger receptor B1,SR-B1）、低密度脂蛋白受体（Low-density lipoprotein receptor,LDLR）、Di George综合症关键区域基因8（Di George syndrome critical region 8 gene,DGCR8）、RNA酶基解旋酶（helicase with RNase motif,Dicer）和2类核糖核酸酶III酶（Class 2 ribonuclease III enzyme,Drosha）。通过染色质免疫共沉淀技术检测GR对DGCR8启动子区域的增强转录调控。通过提总RNA后的对mi RNA进行分离和检测来筛选表观遗传调控机制。同时应用骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）肝样分化细胞模型,探索地塞米松对发育分化过程中肝细胞的影响,并在其BMSCs肝样分化细胞和肝传代细胞系上,验证地塞米松对胆固醇相关代谢基因表达的影响及其调控LDLR的表观遗传机制。结果:宫内时期:与正常对照组相比,PDE组雄性胎鼠血总胆固醇（total cholesterol,TCH）水平呈剂量依赖性降低（P<0.05）,而HDL-C和LDL-C水平出现明显降低（P<0.05）。进一步发现,胎鼠肝脏TCH含量呈剂量依赖性降低（P<0.05,P<0.01）,同时胆固醇代谢相关基因（HMGCR、Apo B、SR-B1、LDLR）的m RNA及蛋白表达在PDE（M）、PDE（H）组均降低（P<0.05）。与正常对照组相比,PDE组胎肝GR的m RNA表达增加,同时胎肝胞核蛋白GR的表达增加（P<0.01）。胎肝中mi RNA合成识别酶DGCR8和mi RNA剪切酶Dicer的m RNA表达水平显着性升高（P<0.05）,mi R-148a表达水平显着升高（P<0.05）。出生后:与正常对照组相比,PDE（M）组雄性子代大鼠PD1体重显着降低（P<0.05,P<0.01）,而在PW2～PW6体重显着升高,PW7～PW 12接近正常对照组,而PD1-PW12的体重增长率一直显着高于正常对照组（P<0.01）。之后,我们检测了血清胆固醇水平变化,与正常对照组相比,PDE组PW12与PW28的血清TCH水平均升高（P<0.05,P<0.01）,而HDL-C水平在PW12升高而在PW28降低（P<0.05,P<0.01）,LDL-C水平在PW12无明显变化但在PW28有升高趋势（P=0.055）。结果进一步显示,PDE组PW12和PW28的血TCH/HDL-C和LDL-C/HDL-C的比值均升高（P<0.05）。结果显示,PW12和PW28肝组织TCH含量增加（P<0.05）。在PW12,PDE组肝脏胆固醇输出基因Apo B的m RNA及蛋白水平增高（P<0.05）,胆固醇逆转运功能基因SR-B1、LDLR的m RNA及蛋白水平降低（P<0.05）,而胆固醇合成功能基因HMGCR的m RNA及蛋白水平无明显变化。在PW28,PDE组肝脏HMGCR、Apo B、LDLR的m RNA及蛋白水平均降低（P<0.05,P<0.01）,而SR-B1的m RNA及蛋白水平升高（P<0.05,）。在多代研究中发现,与正常对照组相比,F2代PDE组成年大鼠血清TCH水平、肝mi R-148a表达和LDLR m RNA表达均无显着改变,仅SR-B1的m RNA水平显着增加（P<0.05）;而F3代PDE组成年雄性大鼠血清TCH水平增加,肝脏mi R-148a表达增加而LDLR的m RNA表达降低（P<0.05,P<0.01）。细胞实验:通过Dil-AC-LDL检测和PAS染色发现,BMSCs分化后的肝样细胞内出现低密度脂蛋白、糖原和ALB的聚集,流式细胞术鉴定ALB标记的细胞比例93.8%,CK18标记的细胞比例84.2%。提示,BMSCs肝样细胞分化成功。在BMSCs肝样细胞发现,地塞米松处理细胞后,培养基上清中TCH水平不仅呈时间依赖性升高（P<0.01）,而且呈浓度依赖性升高（P<0.05,P<0.01）。同时GR的下游靶基因血清糖皮质激素调节酶1（serum and glucocorticoid-regulated kinase 1,Sgk1）呈浓度依赖性升高（P<0.01）,表明GR处于激活状态。进一步发现,DGCR8、Dicer和mi R-148a的表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05,P<0.01）,LDLR的m RNA与蛋白水平表达呈浓度依赖性降低（P<0.05,P<0.01）。在Hep G2细胞上进行LDLR、mi R-148a和GR干扰发现,地塞米松可以明显升高细胞外高胆固醇环境中细胞内、外胆固醇含量（P<0.01）,而过表达LDLR可逆转地塞米松所致的细胞外胆固醇含量升高（P<0.01）,并促使细胞内的胆固醇含量进一步升高（P<0.05）。mi R-148a抑制剂可显着逆转地塞米松所致的LDLR表达降低（P<0.05,P<0.01）,还可以一定程度的逆转地塞米松所致的细胞外胆固醇含量升高,并且使转运至细胞内胆固醇含量增多（P<0.05,P<0.01）。GR抑制剂RU486可以显着逆转地塞米松所致DGCR8和mi R-148a的m RNA表达升高、LDLR的m RNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。此外,在Hep G2细胞上进行Ch IP-PCR检测,证实地塞米松处理后DGCR8启动子区与GR结合增多（P<0.01）。结论:PDE可致雄性成年子代大鼠高胆固醇血症,其发生主要是宫内地塞米松通过活化肝脏GR,增强DGCR8和mi R-148a表达,而mi R-148a的高表达可从宫内延续至成年甚至F3代,编程了肝脏LDLR的持续低表达量,导致胆固醇逆转运功能受损,最终导致高胆固醇血症的发生。
董媛[5]（2019）在《内质网应激调控晶状体上皮的生物学行为参与白内障发病机制的研究》文中提出研究目的和意义本研究拟通过一系列体内外实验,探索内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress,ERS）对晶状体上皮细胞的增殖、凋亡、上皮-间质转化、胶原沉积、炎症因子表达等生物学行为和过程的影响,初步查明ERS与白内障的关系以及ERS参与白内障发生发展调控的机制。单核甘酸多态性是基因组最常见的遗传多态性形式,对金属基质蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2,MMP-2）基因 rs243865 位点的多态性检测和分析,为白内障遗传易感性与基因多态性的研究提供理论和实验数据,也可能为白内障的临床治疗提供新的手段。本研究丰富了白内障发病机制的研究,为寻找白内障潜在的生物学治疗靶点提供理论和实验支持。对候选基因的多态性分析,也可能为研发治疗药物和治疗手段提供新的思路,具有十分重要的临床意义和社会价值。方法1.将20只8日龄无特殊病原体（Specific pathogen free,SPF）级大鼠随机分为模型组和对照组,模型组大鼠按20 μ mol/kg一次性经腹腔注射亚硒酸钠溶液,隔日注射一次,连续5次,诱导建立硒性白内障大鼠模型,通过裂隙灯观察和病理检查验证造模成功。对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,其余操作同模型组。2.体外培养人晶状体上皮细胞,随机分为ERS激活剂组、ERS抑制剂组和对照组,分别给予细胞相应的处理措施。Western Blot检测各组晶状体上皮中ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白结合蛋白（Glucose regulation protein-78/Binding Protein 1,GRP78/Bip）、激酶 R 样内质网激酶（Protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）、活化转录因子（Activating transcription factor 4,ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（C/EBP-homologous protein,CHOP）的表达水平,以及与晶状体上皮-间质转化相关的蛋白如α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、钙粘附蛋白E（E-cadherin）、MMP-2表达水平;MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫组化检测晶状体上皮中ⅣV胶原沉积情况;ELISA检测炎症因子的表达。3.利用TaqMan-MGB探针对晶状体上皮-间质转化密切相关的MMP-2基因rs243865位点的多态性进行检测和分析,初步探索MMP-2基因多态性与白内障易感性的关系。结果1.用20 μ mol/kg亚硒酸钠溶液经腹腔隔日注射5次,10天即成功在模型组大鼠中诱导出硒性白内障,建模成功率100%;其中晶状体Ⅱ级浑浊2例（20%）,Ⅲ级浑浊3例（30%）,Ⅳ级浑浊3例（30%）,Ⅴ级浑浊1例（10%）,Ⅵ级浑浊1例（10%）。2.HE染色后可见模型组大鼠晶状体正常上皮和异常上皮相间分布,异常上皮可见水肿、形态和大小不一,胞质淡然疏松,有大量空泡,核多形性,细胞间隙增大;纤维粗细不均一、排列无规律,纤维之间有囊泡和水裂,可见扭曲、断裂。3.白内障大鼠晶状体组织中GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达水平分别是对照组的（3.89±0.22）倍（p<0.01）、（2.97±0.09）倍（p<0.01）、（2.15±0.17）倍（p<0.01）和（3.11±0.19）倍（p<0.01）。4.ERS激活剂组SRA01/04细胞GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达水平分别是对照组细胞的（1.76±0.11）倍（p<0.01）、（3.62±0.17）倍（p<0.01）、（3.35 ± 0.13）倍（p<0.01）和（4.39±0.20）倍（p<0.01）;ERS 抑制剂组细胞GRP78、p-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达水平分别是对照组细胞的（0.43 ±0.05）倍（p<0.01）、（0.52±0.08）倍（p<0.01）、（0.32±0.06）倍（p<0.01）和（0.29 ± 0.04）倍（p<0.01）。5.ERS 激活剂组SRA01/04 细胞第 Ohr、12 hr、24 hr、48 hr、72 hr 和 96 hr存活率分别为（102±5）%,（108±9）%,（119±6）%,（134±5）%,（152±8）%,（168±8）%;ERS 抑制剂组 SRA01/04 细胞第 Ohr、12 hr、24 hr、48 hr、72 hr 和 96 hr 存活率分别为（102±4）%,（117 ± 7）%,（130±6）%,（162±7）%,（186±8）%,（209±8）%。ERS 激活剂处理的晶状体上皮细胞生长曲线整体在对照组下方,其中第48 hr、72 hr和96 hr的存活率与对照组有统计学差异（p<0.05）;ERS抑制剂处理的晶状体上皮细胞生长曲线整体在对照组上方,其中第48 hr和72 hr的存活率与对照组相比有统计学差异（p<0.05）。6.ERS激活剂组SRA01/04细胞凋亡率为（15.83±1.07）%,较对照组细胞的（7.94±0.56）%显着升高（p<0.01）;ERS抑制剂处理的SRA01/04细胞凋亡率为（5.05±0.71）%,较对照组细胞降低（p<0.05）。7.ERS激活剂组SRA01/04细胞α-SMA、E-cadherin和MMP-2蛋白表达水平分别是对照组的（2.78±0.13）倍、（0.29±0.09）倍和（1.70±0.08）倍（p均<0.01）;ERS 抑制剂组 SRA01/04 细胞α-SMA、E-cadherin 和 MMP-2 表达水平分别是对照组的（0.17±0.06）倍、（2.89±0.12）倍和（0.20±0.07）倍（p 均<0.01）。8.ERS激活剂组SRA01/04细胞中ⅣV胶原大量沉积,平均光密度为（0.65 ±0.08）,明显高于对照组的（0.23±0.03）（p<0.01）;ERS抑制剂处理组细胞中ⅣV胶原平均光密度为（0.11 ± 0.06）,低于对照组（p<0.05）。9.ERS激活剂组SRA01/04细胞IL-1 β、IL-6、CRP和TNF-lα表达水平分别为（42.53±4.14）ng/ml、（6.17±2.51）ng/ml、（9.27±0.80）mg/L 和（25.22±3.28）ng/ml;ERS 抑制剂组晶状体上皮 IL-1 β、IL-6、CRP 和 TNF-1α表达水平分别为（28.52 ± 5.00）ng/ml、（3.23±2.01）ng/ml、（2.01 ±0.35）mg/L 和（11.17±2.01）ng/ml;对照组晶状体上皮 IL-1 β、IL-6、CRP和 TNF-1α表达水平分别为（30.47 ± 4.83）ng/ml、（4.41±1.74）ng/ml、（2.23±0.29）mg/L 和（15.57±3.08）ng/ml。ERS 激活剂组晶状体上皮IL-1 β、IL-6、CRP和TNF-1α水平高于对照组（p<0.05）,ERS抑制剂组IL-6和TNF-1α水平低于对照组（p<0.05）。10.白内障组CC、CT和TT 3种基因型的检测频率和期望频率分别为62%和57.01%,30%和 39.90%,12%和 7.01%;对照组 CC、CT 和 TT 3 种基因型的检测频率和期望频率分别为72%和70.04%,25%和26.20%,3%和2.40%。经Hardy-Weinberg平衡定律吻合度检验,两组MMP-2基因的rs243865基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（p>0.05）,具有可比性。11.白内障组患者MMP-2基因多态性位点rs243865的GG、GA、AA三种基因型分布人数分别是62例、30例和12例,分别占57.01%、28.85%和11.54%;对照组MMP-2基因多态性位点rs243865的GG、GA、AA三种基因型分布人数分别是72例、25例和3例,分别占72%、25%和3%。三种基因型在两组分布有统计学差异（p<0.05）。12.白内障组患者C和T等位基因分布频率分别为74.04%和25.96%,对照组C和T等位基因分布频率分别为84.50%和15.50%,C/T等位基因在两组的分布频率有差异（p<0.05）。13.对MMP-2基因rs243865的遗传模型分析,白内障组和对照组在加性模型下存在差异（p<0.05）,但隐性模型和显性模型均无显着差异（p>0.05）。结论1.白内障大鼠晶状体组织中存在过度激活的ERS反应,ERS相关蛋白表达水平较正常大鼠明显升高;2.过度激活的ERS能抑制晶状体上皮细胞的增殖、促进细胞凋亡、上皮-间质转化、胶原沉积和炎症反应等生物学行为和过程,对白内障的发生发展有促进作用。3.MMP-2基因的rs243865位点多态性与人类白内障易感性相关。
岳永飞[6]（2019）在《LncRNA-DPT对妊娠期肝内胆汁淤积症滋养细胞的调控及机制探索》文中指出第一部分 LncRNA-DPT的表达及其与妊娠期肝内胆汁淤积症的发病相关研究目的:探讨 LncRNA-Dermatopontin（LncRNA-DPT）及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）在妊娠期肝内胆汁淤积症患者母胎界面的表达。分析LncRNA-DPT通过诱导细胞凋亡、并下调iNOS的表达,参与妊娠期肝内胆汁淤积症的发病机制。方法:1.随机纳入两组研究对象,正常妊娠孕妇80例,妊娠期肝内胆汁淤积症患者77例,分析两组研究对象的一般临床资料及生化指标;2.采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测两组研究对象母胎界面LncRNA-DPT的表达水平;3.采用RT-qPCR检测iNOS在两组胎盘和脐带组织细胞的表达水平;4.采用免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IH）检测两组胎盘组织中iNOS的表达情况;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测iNOS在两组母体和脐带血浆的表达水平;5.采用蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）方法检测iNOS蛋白在两组胎盘和脐带组织细胞的表达水平;6.采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,Tunnel）染色技术和测定线粒体活性氧的方法检测胎盘和脐带组织细胞的凋亡情况。结果:1.两组研究对象的孕龄、BMI、孕次和产次均无统计学差异（p>0.05）;ICP组的分娩孕周、血浆iNOS浓度、新生儿出生体重、胎盘重量和新生儿APGAR评分均小于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;ICP组的生化指标（TBA、CG、ALT、AST、TB、CB、UCB、TC、TG）、剖宫产率、胎儿宫内窘迫率、早产率、胎儿宫内生长受限率、新生儿入住NICU率均大于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;2.LncRNA-DPT在ICP患者胎盘组织中表达水平明显低于对照组胎盘组织的表达,差异具有统计学意义（p<0.05）;3.母体血浆中iNOS与TBA的表达呈负相关（r=-0.450,p<0.05）;iNOS与CG的表达呈负相关（r=-0.367,p<0.05）;iNOS与ALT的表达呈负相关（r=-0.359,p<0.05）;iNOS 与 AST 的表达呈负相关（r=-0.329,p<0.05）;4.iNOS主要在胎盘合体滋养细胞中表达,其在ICP患者胎盘的表达明显减少,差异具有统计学意义（p<0.05）;iNOS主要在脐带内皮细胞中表达,其在ICP患者脐带组织的表达明显减少,差异具有统计学意义（p<0.05）;5.iNOS在ICP组母体血浆中的表达明显低于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;iNOS在ICP组脐带血浆中的表达明显低于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;6.ICP组胎盘组织线粒体活性氧的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;7.通过荧光显微镜对荧光素标记的凋亡细胞进行观察,ICP组胎盘细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;ICP组脐带细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;结论:1.LncRNA-DPT和iNOS在ICP患者体内的异常表达可能与ICP的发病及疾病进展有关;2.LncRNA-DPT和iNOS在ICP患者体内的异常表达表明,LncRNA-DPT可能降低iNOS的表达,减少一氧化氮（Nitric oxide,NO）的合成,并同时激活组织细胞凋亡,参与ICP的发病及疾病进展。第二部分LncRNA-DPT上调NF-κB参与妊娠期肝内胆汁淤积症的分子机制目的:构建ICP大鼠模型,检测LncRNA-DPT及NF-κB信号通路相关蛋白在ICP大鼠体内的表达。探讨调节LncRNA-DPT的表达对NF-κB信号通路、下游iNOS表达及组织细胞凋亡的影响。方法:1.采用苯甲酸雌二醇构建ICP孕鼠模型,分析两组孕鼠的一般资料;2.采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测两组研究对象母胎界面LncRNA-DPT的表达水平;3.采用RT-qPCR检测iNOS在两组大鼠胎盘和脐带组织的表达;4.光学显微镜下观察ICP大鼠肝脏HE病理切片,证实ICP大鼠模型构建成功;采用免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IH）检测两组胎盘和脐带组织中iNOS的表达情况;采用蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）方法检测iNOS蛋白在两组胎盘组织细胞的表达水平;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测iNOS在两组大鼠血浆的表达水平;5.通过测定线粒体活性氧检测两组大鼠胎盘和脐带组织细胞的凋亡情况;6.调节人滋养细胞株HTR-8/SVneo的LncRNA-DPT表达,绘制细胞生长曲线观察细胞增殖能力变化,并分析其对NF-κB信号通路p65蛋白、下游iNOS的表达及细胞凋亡的影响。结果:1.纳入研究的两组大鼠均为第一次妊娠,在ICP模型构建前,两组大鼠的周龄、体重、TBA、CG、ALT和AST均无统计学差异（p>0.05）;ICP模型成功构建后,ICP组大鼠的TBA、CG、ALT和AST均明显高于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;2.RT-qPCR显示LncRNA-DPT在ICP大鼠胎盘组织中的表达水平明显低于正常大鼠胎盘组织,差异具有统计学意义（p<0.05）;3.ICP大鼠肝脏HE病理切片可见肝脏细胞内胆汁淤积;iNOS主要在胎盘合体滋养细胞中表达,其在ICP大鼠胎盘的表达明显低于正常大鼠,差异具有统计学意义（p<0.05）;iNOS主要在脐带内皮细胞中表达,其在ICP大鼠脐带组织的表达明显低于正常大鼠,差异具有统计学意义（p<0.05）;4.iNOS在ICP组大鼠血浆的表达明显低于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;5.ICP组胎盘组织线粒体活性氧的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;6.转染后,LncRNA-DPT在si-DPT组的表达明显低于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;7.根据MTT法绘制的细胞生长曲线显示,si-DPT组的细胞增殖能力明显减弱,差异具有统计学意义（p<0.05）;8.流式细胞仪检测HTR-8/Svneo细胞的凋亡,si-DPT组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义（p<0.05）;9.p65蛋白在对照组细胞质的表达明显高于细胞核,差异具有统计学意义（p<0.05）;p65蛋白在si-DPT组细胞质的表达明显低于细胞核,差异具有统计学意义（p<0.05）。结论:1.苯甲酸雌二醇能够成功构建ICP孕鼠模型,可用作ICP的研究;2.下调LncRNA-DPT可激活NF-κB信号通路,降低iNOS的表达,减少一氧化氮（Nitric oxide,NO）的合成,并促使组织细胞凋亡,参与ICP的发病及疾病进展。
姚欢[7]（2019）在《康复新液抗博来霉素诱导大鼠肺纤维化作用及对小鼠成纤维细胞增殖和迁移的影响》文中认为研究目的1.构建体内博来霉素肺纤维化大鼠模型,研究康复新液抗肺纤维化作用;2.构建体外肺纤维化细胞模型,研究康复新液对小鼠肺成纤维细胞增殖和迁移影响;3.观察康复新液对细胞周期蛋白Cyclin D1和CKIS的影响,研究康复新液抗肺纤维化作用机制,以期为康复新液用于治疗肺纤维化提供实验室依据。实验方法选择SD大鼠为体内研究对象,使用博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型。给予康复新液灌胃治疗后,观察大鼠体质量、肺湿重和肺系数等一般体征变化;H&E染色法观察肺组织病理变化;Masson染色法观察胶原沉积;Ashcroft评分评价纤维化程度;免疫组织化学法观察各组大鼠肺组织内α-SMA、MMP 1、MMP3、MMP9、TIMP-1、Collagen I、Collagen III表达。选取小鼠肺成纤维细胞为体外研究对象,分离细胞后使用差速贴壁法纯化细胞,免疫细胞化学法鉴定细胞。CCK8检测小鼠肺成纤维细胞活力;细胞计数法检测小鼠肺成纤维细胞增殖;Transwell法检测小鼠肺成纤维细胞迁移;RT-PCR法检测小鼠肺成纤维细胞Cyclin D1、p15ink4b、p18ink4c、p19arf基因mRNA水平。实验结果1.康复新液抗肺纤维化作用评价:（1）一般体征:与模型组比较,康复新液各剂量治疗组肺系数分别增加38.8%（P<0.01）,26.7%（P<0.01）,12.9%（P<0.05）降低。（2）肺组织病理学:H&E染色结果显示,模型组大鼠肺组织受损严重,大量肺泡塌陷后形成纤维化瘢痕并伴随弥漫性胶原纤维增生,肺泡壁明显增厚,肺泡数量减少,康复新液各剂量治疗组和地塞米松组减轻了上述病变;改良Ashcroft评分统计结果显示,与博来霉素组比较,康复新液各剂量治疗组Ashcroft评分降低64.7%（P<0.01）,37.5%（P<0.01）,20.8%（P<0.05）;Masson染色结果显示,与博来霉素组比较,复新液各剂量治疗组和地塞米松组大鼠肺组织内胶原含量明显减少。（3）肺纤维化肺组织相关生物学指标:免疫组化结果显示,与模型对照组比较,康复新液各剂量治疗组大鼠肺组织α-SMA、MMP1、MMP3、MMP9、TIMP-1、Collagen I和Collagen III蛋白的表达明显降低;2.复新液对小鼠成纤维细胞影响:（1）细胞增殖:CCK8结果显示,康复新液以浓度依赖方式抑制成纤维细胞活力;细胞计数法结果显示,康复新液组减少了TGF-β1诱导后成纤维细胞在不同时段的细胞数量。（2）细胞迁移:Transwell结果显示,康复新液组减少了TGF-β1诱导后迁移细胞数量。3.康复新液对成纤维细胞作用机制:RT-PCR结果显示,康复新液组降低了成纤维细胞Cyclin D1、p15ink4b、p18ink4c、p19arf基因表达水平。结论1.康复新液可以改善BLM诱导肺纤维化大鼠一般体征和肺组织损伤,在肺纤维化中发挥一定保护作用;2.康复新液可以减少肺BLM诱导肺纤维化模型大鼠肺组织胶原产生和肺泡结构损伤,并降低肺纤维化生物学指标MMP1、MMP3、MMP9、TIMP-1、α-SMA、Collagen I、Collagen III的表达,具有抗肺纤维化作用;3.康复新液可以抑制TGF-β1刺激后肺成纤维细胞增殖,减少肺纤维化成纤维细胞数量;4.康复新液可以抑制TGF-β1刺激后肺成纤维细胞迁移,减少肺纤维化成纤维细胞聚集;5.康复新液可能通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1表达和促进CKIS的表达从而抑制成纤维细胞增殖而发挥抗肺纤维作用。
严凯[8]（2019）在《地塞米松对妊娠母鼠及胎鼠铁代谢的影响及机制研究》文中提出铁是动物机体生长发育必不可少的微量元素之一,对妊娠及胎儿的发育尤为重要,妊娠期缺铁可能会对胎儿产生严重持久的影响,如胎儿生长发育障碍,抑制胎儿神经活动,造成长期神经功能障碍,增加成年后患病的危险性。本实验以地塞米松饮水处理为应激模型,模拟动物在妊娠期受到应激时对母鼠及胎鼠铁代谢的影响及作用机制。1.地塞米松对妊娠母鼠生产性能和铁代谢相关指标的影响本实验在合笼成功后选取24只重量相近的SD妊娠母鼠随机分为两组,正常饮水组12只,地塞米松饮水组12只。在妊娠第13天开始处理,对照组正常饮水,地塞米松组按0.2 mg/kg/d的剂量饮水。实验持续7天,妊娠第20天屠宰。实验期间记录并统计两组母鼠平均日采食量及体重,分析母鼠的生产性能,记妊娠母鼠肝脏、脾脏、肾脏和心脏的重量,根据器官重量计算脏器指数,检测血浆及肝脏生化指标、抗氧化指标及铁代谢相关指标,探讨地塞米松在妊娠期对母鼠铁代谢的作用机制。结果显示,地塞米松处理显着降低了母鼠体重、肝脏及脾脏重量、脾脏指数、肾脏指数、碱性磷酸酶（ALP）含量、血浆超氧化物歧化酶（SOD）活性肝脏SOD和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性（P<0.05）,显着升高了母鼠血浆中总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、葡萄糖（GLU）、谷草氨酸（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、血浆铁、转铁蛋白结合铁（Tf-Fe3+）、总铁结合力（TIBC）、转铁蛋白饱和度（TS）及肝脏中丙二醛（MDA）含量（P<0.05）。2.地塞米松对妊娠母鼠肝脏铁代谢及肠道铁吸收的影响以地塞米松处理应激母鼠为研究对象,运用qPCR及western blot方法检测大鼠十二指肠及对肝脏铁吸收、转运、储存及释放相关基因与蛋白表达变化,揭示地塞米松饮水应激对母鼠肠道及肝脏铁代谢的作用机制。western blot结果显示地米饮水显着降低了十二指肠铁释放相关蛋白（FPN）、铁蛋白轻链和重链的表达（P<0.05）;母鼠肝脏中铁摄取蛋白TFR1、TFR2、ZIP14表达均显着升高（P<0.05）,铁储存蛋白FTL、FTH表达显着下降（P<0.05）。3.地塞米松对母鼠胎盘及胎鼠铁代谢的影响及其机制研究胎盘作为连接母体与胚胎的营养转运器官,胎儿妊娠期所需要的铁全部从母体血液循环通过胎盘进行转运。应激结束记录胎鼠总体重、肝重、胎盘重、胎盘直径及厚度,结果显示地塞米松处理显着降低了胎盘重和胎盘直径（P<0.05）,产仔数有下降趋势,western blot结果显示地塞米松处理显着增加了母鼠胎盘铁蛋白轻链FTL和铁蛋白重链FTH的表达（P<0.05）,铁摄取蛋白TFR1表达显着降低（P<0.05）,胎鼠肝脏铁摄取相关蛋白TFR1、ZIP14、铁释放蛋白FPN和铁调节蛋白IRP1的表达显着降低（P<0.05）,而铁蛋白轻链FTL表达量显着升高（P<0.05）。实验中,首先使用浓度为10-7 M的Dex处理构建BeWo细胞慢性糖皮质激素暴露应激模型24h。与对照组先比,Dex处理显着降低了糖皮质激素受体（GR）总蛋白含量,而磷酸化GR（p-GR）蛋白表达含量升高（P<0.05）,说明Dex能够促进GR入核。当在Dex处理的BeWo细胞中加入不同浓度的GR拮抗剂RU486,结果显示1、5、10、15 μ MRU486处理均可使磷酸化GR蛋白的表达下降,说明RU486可阻止GR入核（P<0.05）,并且用浓度为1、5 μM的RU486处理细胞时,结果显示其能够抑制GR的磷酸化水平同时也缓解了 Dex引起的TFR1下调（P<0.05）,但对铁吸收、转运、释放及铁调节蛋白没有影响。综上所述,妊娠期地塞米松处理可显着减少母鼠体重,抑制器官（肝脏、脾脏及肾脏）发育,影响机体氧化系统、糖脂和铁代谢。母鼠地塞米松处理显着下调了十二指肠铁释放蛋白FPN表达和肝脏铁贮存蛋白FTL及FTH表达,显着上调了肝脏铁摄取相关蛋白TFR1和TFR2表达,影响了母鼠铁吸收及肝脏铁代谢。母鼠地塞米松处理抑制了胎盘发育,下调了胎盘铁转运蛋白TFR1表达,降低了胎鼠铁水平;且TFR1下调可能与GC诱导的铁调节蛋白IRP1下调密切相关。
施文雯[9]（2019）在《静水压调节hUC-MSCs在全肝脱细胞支架内肝样分化的实验研究》文中研究表明[目 的]利用体外灌流生物反应器及大鼠全肝脱细胞支架,为hUC-MSCs提供体外培养和诱导分化微环境,通过检测肝细胞相关分子表达以及肝细胞相关功能来评估hUC-MSCs的肝向分化情况,以探索静水压对hUC-MSCs肝向分化的影响,寻找hUC-MSCs肝向分化的最适条件。[方 法]1、hUC-MSCs体外培养与鉴定:无菌条件下,组织贴壁法分离培养hUC-MSCs,细胞培养至第四代,用流式细胞术检测细胞特异分子CD34、CD90、CD45、CD105、OCT4表达情况;采用成脂、成骨分化鉴定细胞多向分化能力。2、用SDS法制备大鼠全肝脱细胞支架,并检测脱细胞支架的质量。检测静水压对脱细胞支架内hUC-MSCs肝样分化的影响,实验分组为阴性对照组、二维诱导组（常规细胞培养板培养）、三维静止诱导组（细胞种植在脱细胞支架上,不施加压力）和三维持续灌流培养诱导组（细胞种植在脱细胞支架上,持续施加10cmH2O压力）,培养21天后收集细胞检测肝细胞相关因子（ALB、AFP、CK18、CK19、CYP3A5）的表达情况、肝细胞功能、力学-整合素信号通路相关分子（整合素β1、p-FAK、LamininA/C）的表达情况。[结 果]1、组织贴壁法分离培养得到hUC-MSCs,经流式细胞术检测细胞高表达CD105（98.9%± 1.35%）、CD90（99.17%±0.94%）,极低表达 CD34（0.06%±0.04%）、CD45（0.19%±0.27%）,部分表达 OCT4（65.7%±3.25%）,符合hUC-MSCs的特点;成脂分化后,油红O染色可见细胞内脂滴形成,成骨分化后茜素红染色可见钙结节形成,说明hUC-MSCs可分化为成脂和成骨细胞。2、用SDS法制备全肝脱细胞支架,残余DNA含量（12.79±0.90 ng/mg组织）显着低于正常肝组织（4987.60±310.29 ng/mg组织）,H&E及电镜检测未见残余细胞,能够为MSCs的体外培养提供良好生长环境。3、与二维培养条件相比,三维培养条件下的细胞在mRNA及蛋白水平均表达更高的肝细胞相关标志物（ALB、AFP、CK18、CK19、CYP3A5）,且具有更强的肝细胞相关功能（糖原合成、分泌ALB、ALP）。另外,三维持续灌流培养诱导条件下的肝样细胞相关因子的表达及肝细胞相关功能显着高于三维静态培养。4、在hUC-MSCs的肝向分化过程中,力学-整合素信号通路相关分子（整合素β1、p-FAK、LamininA/C）的表达降低,与二维培养条件相比,在三维培养条件下的信号通路相关分子表达显着降低。[结 论]1、利用组织块贴壁法成功分离培养出符合hUC-MSCs特点的细胞。2、hUC-MSCs可在3D及3D10 cmH2O静水压的条件下诱导分化为肝样细胞,全肝脱细胞支架能够为hUC-MSCs的体外培养和肝向诱导分化提供良好的三维生长环境,促进hUC-MSCs的肝样分化。3、10 cmH2O的静水压能够促进hUC-MSCs在3D条件下的肝样分化,使其分化为更成熟、更接近肝细胞功能的肝样细胞。4、在hUC-MSCs肝样分化过程中,力学-整合素信号通路受到抑制。
王磊[10]（2019）在《糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株INS-1损伤的保护作用研究》文中认为[目的]本实验通过体外培养胰岛β细胞INS-1糖脂毒模型,用“益气养阴清热”糖耐康进行分组干预,观察糖耐康对糖脂毒下的胰岛β细胞活力、凋亡以及胰岛素分泌的影响,并进一步从胰岛β细胞胰岛素信号转导通路探讨糖耐康对PI3K/Akt下游FOXO1等因子的影响,探索其具体作用靶点。为中药治疗糖脂毒诱导的早期2型糖尿病提供理论依据。[方法]1.糖耐康含药血清对糖脂毒损伤的INS-1细胞活力的影响体外选用大鼠胰岛素瘤细胞系INS-1细胞为本实验研究对象,以33.3mM葡萄糖刺激培养INS-1细胞构建糖毒性模型,以0.5mM棕榈酸刺激培养INS-1细胞构建脂毒性模型,33.3mM葡萄糖联合0.5 mM棕榈酸刺激培养INS-1细胞构建糖脂毒性模型。制备糖耐康含药血清,分糖耐康低（5%）、中（8%）、高（10%）剂量进行干预,以盐酸二甲双胍作为西药对照,以高糖、棕榈酸、高糖联合棕榈酸分别作为模型对照。CCK-8检测各组INS-1细胞活力、流式细胞荧光染色以及caspase-3活性观察细胞凋亡、ELISA测葡萄糖刺激下INS-1细胞的胰岛素分泌功能。2.糖耐康含药血清对糖脂毒损伤的INS-1细胞胰岛素信号转导通路的影响糖脂毒造模方法同上。制备糖耐康含药血清,分糖耐康低（5%）、中（8%）、高（10%）剂量进行干预,以盐酸二甲双胍作为西药对照,以高糖、棕榈酸、高糖联合棕榈酸分别作为模型对照。采用免疫印迹法测定胰岛素信号转导通路中胰岛素受体底物-2（IRS2）及PI3K下游相关蛋白:叉头转录因子（FOXO1）,蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）的蛋白质含量,以及IRS2（ser731）、FOX01（ser256）、P70s6k（htr389）的磷酸化水平。[结果]1.糖耐康含药血清对糖脂毒损伤的INS-1细胞活力的影响高糖、高脂、高糖联合高脂均能够显着降低INS-1细胞活力。经中药糖耐康干预后,与模型组相比,高剂量糖耐康组的细胞活力明显上升、caspase-3活性明显被抑制、胰岛素分泌功能BIS、GSIS数值明显上升。低剂量及中剂量糖耐康对上述指标均有不同程度改善。与二甲双胍对照组相比,高剂量糖耐康与二甲双胍无统计学意义。2.糖耐康含药血清对糖脂毒损伤的INS-1细胞胰岛素信号转到通路的影响高糖、高脂、高糖联合高脂组IRS2蛋白表达降低,磷酸化水平升高。FOX01（ser256）、P70s6k（htr389）的磷酸化水平降低,PTP1B蛋白表达升高。经中药糖耐康干预后,与模型组相比,高剂量糖耐康组的细胞IRS2蛋白表达升高,磷酸化水平降低。FOXO1（ser256）、P70s6k（htr389）的磷酸化水平升高,PTP1B蛋白表达降低。与二甲双胍对照组相比,高剂量糖耐康与二甲双胍无统计学意义。[结论]1.糖耐康能够改善糖脂毒刺激下的INS-1的细胞活力,抑制凋亡,改善胰岛素分泌功能。2.糖耐康能够调控糖脂毒刺激下的INS-1的细胞胰岛素信号转导通路中的IRS2、PTP1B、FOX01因子,升高P70s6k（htr389）磷酸化水平,改善胰岛细胞功能,进而调节糖脂代谢。
二、地塞米松对三维培养大鼠肝细胞分泌的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、地塞米松对三维培养大鼠肝细胞分泌的影响（论文提纲范文）
（1）仿生导电人工神经支架的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 多微通道导电神经支架的设计和制备及物理性能和生物相容性能检测评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 聚左旋乳酸取向性纤维膜及其生物相容性的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 仿生导电人工神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象和主要试剂 |
| 1.3 实验分组和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 周围神经损伤修复的细胞和分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（2）地塞米松诱导大鼠肝脏糖脂代谢紊乱分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 糖脂代谢紊乱的概述 |
| 1.1.1 糖脂代谢紊乱 |
| 1.1.2 肝脏糖脂代谢紊乱 |
| 1.2 糖脂代谢紊乱相关疾病 |
| 1.2.1 非酒精性脂肪肝 |
| 1.2.2 肥胖 |
| 1.2.3 糖尿病 |
| 1.3 肠道菌群 |
| 1.4 转录组学 |
| 1.5 地塞米松与糖脂代谢紊乱 |
| 1.6 研究内容及意义 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 材料与试剂 |
| 2.3 仪器与设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 动物实验模型的构建 |
| 2.4.2 大鼠空腹血糖及空腹胰岛素测定 |
| 2.4.3 血清中ALT、AST、TG、CHOL等的检测 |
| 2.4.4 肝脏组织的HE染色组织学观察 |
| 2.4.5 16srRNA高通量测序法分析大鼠粪便样本中肠道菌群成分 |
| 2.4.6 转录组测序 |
| 2.5 数据统计分析 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 DEX对糖脂代谢紊乱大鼠肝脏指标的影响 |
| 3.2 DEX对糖脂代谢紊乱大鼠肝脏组织病理形态的影响 |
| 3.3 DEX对糖脂代谢紊乱大鼠血糖相关指标的影响 |
| 3.4 DEX对糖脂代谢紊乱大鼠脂质代谢指标的影响 |
| 3.5 DEX对糖脂代谢紊乱大鼠其他指标的影响 |
| 3.6 DEX对糖脂代谢紊乱大鼠肠道菌群影响 |
| 3.6.1 DEX对肠道菌群物种的影响 |
| 3.6.2 DEX对肠道菌群门水平物种丰度的影响 |
| 3.6.3 DEX对肠道菌群属水平的影响 |
| 3.6.4 DEX对肠道菌群在属水平Spearman环境关联因子分析 |
| 3.6.5 DEX作用后对肠道菌群Alpha多样性的影响 |
| 3.6.6 DEX作用后对肠道菌群Beta多样性的影响 |
| 3.7 转录组学分析地塞米松诱导的糖脂代谢紊乱 |
| 3.7.1 地塞米松诱导大鼠糖脂代谢紊乱差异基因筛选 |
| 3.7.2 地塞米松诱导糖脂代谢紊乱差异基因的GO富集分析 |
| 3.7.3 地塞米松诱导糖脂代谢紊乱差异基因相关通路分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（3）转染HGF的人脐带间充质干细胞调控TGF-β1/Smads信号通路对肝星状细胞的影响（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 文献综述 人脐带间充质干细胞调控肝纤维化的研究进展——从生物学特性到治疗机制 |
| 1.1 hUCMSCs的生物学特性 |
| 1.1.1 hUCMSCs的来源 |
| 1.1.2 hUCMSCs的分离 |
| 1.1.3 hUCMSCs的培养和扩增 |
| 1.1.4 hUCMSCs的生物标志物 |
| 1.1.5 hUCMSCs分泌的生物活性分子 |
| 1.1.6 立体(3D)培养系统 |
| 1.1.7 体外诱导分化为肝细胞样细胞的潜能 |
| 1.2 hUCMSCs调控肝纤维化的可能作用机制 |
| 1.2.1 肝纤维化的形成机制 |
| 1.2.2 hUCMSCs的旁分泌效应对肝纤维化的调控作用 |
| 1.2.3 在肝纤维化条件下转分化为肝细胞样细胞 |
| 1.3 临床试验 |
| 1.4 总结与展望 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料、仪器与试剂 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 hUCMSCs的分离与培养 |
| 2.2.2 MTT法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6细胞活力的影响 |
| 2.2.3 Hoechst33342染色法观察转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6凋亡的影响 |
| 2.2.4 流式分析法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6凋亡的影响 |
| 2.2.5 免疫细胞化学法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 α-SMA,Collagen Ⅰ,Collagen Ⅲ,TGF-β1,Smad2和Smad3蛋白表达的影响 |
| 2.2.6 Western blotting法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 α-SMA,Collagen Ⅰ,Collagen Ⅲ,TGF-β1,Smad2和Smad3蛋白表达的影响 |
| 2.2.7 RT-PCR法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 α-SMA,Collagen Ⅰ,Collagen Ⅲ,TGF-β1,Smad2和Smad3 m RNA表达的影响 |
| 2.3 统计学方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 hUCMSCs与HSCs-T6的形态观察 |
| 3.1.1 hUCMSCs的培养与形态观察 |
| 3.1.2 HSCs-T6的培养与形态观察 |
| 3.2 转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6增殖和凋亡的影响 |
| 3.2.1 光镜观察转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6生长状态的影响 |
| 3.2.2 MTT法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6细胞活力的影响 |
| 3.2.3 Hoechst33342染色法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6凋亡的影响 |
| 3.2.4 流式分析法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6凋亡的影响 |
| 3.3 转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6活化与Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达的影响 |
| 3.3.1 免疫细胞化学染色法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 α-SMA,Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达的影响 |
| 3.3.2 Western blotting法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 α-SMA,Collagen Ⅰ,和Collagen Ⅲ蛋白表达的影响 |
| 3.3.3 RT-PCR法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6α-SMA,Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ m RNA表达的影响 |
| 3.4 转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 TGF-β1/Smads信号通路的调控 |
| 3.4.1 免疫细胞化学染色法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 TGF-β1,Smad2和Smad3蛋白表达的影响 |
| 3.4.2 Western blotting法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 TGF-β1,Smad2和Smad3蛋白表达的影响 |
| 3.4.3 RT-PCR法检测转染HGF的hUCMSCs对HSCs-T6 TGF-β1,Smad2和Smad3 m RNA表达的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）miR-148a/LDLR介导孕期地塞米松暴露致雄性成年子代高胆固醇血症的发生（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:孕期地塞米松暴露对子代肝脏脂代谢疾病相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻硕期间发表的科研成果目录 |
| 后记 |
（5）内质网应激调控晶状体上皮的生物学行为参与白内障发病机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 绪论 |
| 一、晶状体的一般生理 |
| 二、白内障的类型和发病机制 |
| 三、内质网应激与白内障 |
| 四、本研究的内容和意义 |
| 第一部分 硒性白内障大鼠模型的建立 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法公司 |
| 1.4.1 实验分组 |
| 1.4.2 造模 |
| 1.4.3 实验观察 |
| 1.4.4 晶状体浑浊程度判断依据 |
| 1.4.5 组织病理染色 |
| 1.4.6 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况 |
| 2.2 晶状体浑浊情况观察 |
| 2.3 晶状体HE染色检查 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 内质网应激对晶状体上皮细胞增殖、上皮-间质转化、胶原沉积、炎症反应等生物学行为的调控作用研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 细胞系 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 方法 |
| 1.5.1 大鼠处理 |
| 1.5.2 细胞培养和分组 |
| 1.5.3 组织和细胞总蛋白提取和定量 |
| 1.5.4 Western Blot检测目的蛋白表达 |
| 1.5.5 免疫组化检测IV型胶原沉积 |
| 1.5.6 MTT检测细胞增殖 |
| 1.5.7 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 1.5.8 ELISA检测炎症因子 |
| 2. 结果 |
| 2.1 Western Blot检测白内障大鼠晶状体中ERS相关GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP的表达水平 |
| 2.2 晶状体上皮细胞培养与活性鉴定 |
| 2.3 Western Blot检测晶状体上皮细胞系ERS相关GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP的表达水平 |
| 2.4 MTT法检测ERS对晶状体上皮细胞增殖的影响 |
| 2.5 流式细胞术检测ERS对晶状体上皮细胞凋亡的影响 |
| 2.6 Western Blot检测ERS对晶状体上皮-间质转化的影响 |
| 2.7 免疫组化检测ERS对晶状体上皮IV型胶原沉积的影响 |
| 2.8 ELISA检测ERS对晶状体上皮炎症因子表达的影响 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 金属基质蛋白酶多态性与白内障易感性的初步研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 临床病例 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 收集临床资料 |
| 1.4.2 外周血DNA提取 |
| 1.4.3 基因型检测 |
| 1.4.4 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 患者一般资料 |
| 2.2 HWE平衡检验 |
| 2.3 MMP-2基因rs243865位点基因型分布 |
| 2.4 MMP-2的C/T等位基因分布频率的比较 |
| 2.5 MMP-2基因rs243865位点遗传模型分析 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文文章 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）LncRNA-DPT对妊娠期肝内胆汁淤积症滋养细胞的调控及机制探索（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分、LncRNA-DPT的表达及其与妊娠期肝内胆汁淤积症的发病相关研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 LncRNA-DPT上调NF-κB参与妊娠期肝内胆汁淤积症的分子机制 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间本人公开发表的论着 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）康复新液抗博来霉素诱导大鼠肺纤维化作用及对小鼠成纤维细胞增殖和迁移的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 康复新液抗肺纤维化的作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.2.1 受试药 |
| 1.2.2 阳性对照药 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验设备与器械 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 大鼠肺纤维化模型建立 |
| 2.3 给药 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.5.1 一般体征 |
| 2.5.2 肺组织病理形态学 |
| 2.5.2.1 H&E染色和改良Ashcroft评分 |
| 2.5.2.2 Masson染色 |
| 2.5.2.3 肺纤维化生物学标志物检测 |
| 2.6 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 康复新液对模型大鼠一般体征影响 |
| 3.2 康复新液对模型大鼠病理改变影响 |
| 3.3 康复新液对肺纤维化肺组织生物学标志物影响 |
| 第二部分 康复新液对小鼠成纤维细胞增殖、迁移影响及作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验设备与器械 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 小鼠肺成纤维细胞分离、培养和纯化 |
| 2.2 体外肺纤维化细胞模型建立 |
| 2.3 给药治疗 |
| 2.4 检测指标 |
| 2.4.1 细胞形态 |
| 2.4.2 细胞鉴定 |
| 2.4.3 细胞活力 |
| 2.4.4 细胞增殖 |
| 2.4.5 细胞迁移 |
| 2.4.6 细胞周期蛋白和CKIS |
| 2.5 数据处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 小鼠肺成纤维细胞形态 |
| 3.2 小鼠肺成纤维细胞鉴定 |
| 3.3 康复新液对小鼠肺成纤维细胞活力影响 |
| 3.4 康复新液对肺成纤维细胞增殖影响 |
| 3.5 康复新液对小鼠肺成纤维细胞迁移影响 |
| 3.6 康复新液对Cyclin D1、p15ink4b、p18ink4c、p19arf表达影响 |
| 讨论 |
| 1 肺纤维化模型选择 |
| 1.1 动物模型 |
| 1.2 细胞模型 |
| 2 阳性药物选择 |
| 3 模型动物一般体征评价 |
| 4 肺纤维化指标选择 |
| 4.1 肺纤维化组织病理学 |
| 4.2 肺纤维化肺组织生物学标志物 |
| 4.2.1 胶原蛋白 |
| 4.2.2 MMPs和 TIMPs |
| 4.2.3 肌成纤维细胞标志物 |
| 4.3 细胞增殖 |
| 结论 |
| 特色与创新 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附件1:在读期间科研成果简介 |
（8）地塞米松对妊娠母鼠及胎鼠铁代谢的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 应激 |
| 1 应激的概念 |
| 2 应激的生物学效应 |
| 3 应激对动物机体的影响 |
| 3.1 应激对动物生产性能的影响 |
| 3.2 应激对动物繁殖性能的影响 |
| 3.3 应激对胎儿和胎盘发育的影响 |
| 3.4 应激对营养素代谢的影响 |
| 3.5 应激对微量元素代谢的影响 |
| 第二章 胎盘营养素转运及其调控 |
| 1 胎盘营养素转运 |
| 1.1 胎盘葡萄糖和氨基酸转运 |
| 1.2 胎盘铁转运通路 |
| 1.2.1 铁蛋白 |
| 1.2.2 转铁蛋白 |
| 1.2.3 转铁蛋白受体 |
| 1.2.4 二价金属离子转运蛋白1 |
| 1.2.5 膜转运蛋白1 |
| 1.2.6 含铜氧化酶 |
| 2 应激对胎盘营养素转运的影响 |
| 2.1 应激对胎盘葡萄糖转运的影响 |
| 2.2 应激对胎盘氨基酸转运的影响 |
| 第三章 铁代谢调控 |
| 1 铁代谢的调节 |
| 1.1 细胞水平铁代谢调节 |
| 1.2 组织水平铁代谢调节 |
| 2 应激对铁调节的影响 |
| 2.1 应激对铁调节蛋白的影响 |
| 2.2 应激对铁调素的影响 |
| 3 铁失调对机体的影响 |
| 3.1 铁过载对动物机体的影响 |
| 3.1.1 铁过载与神经退行性疾病 |
| 3.1.2 铁过载与肝脏疾病 |
| 3.1.3 铁过载与肿瘤 |
| 3.2 铁缺乏对动物机体的影响 |
| 第二篇 试验部分 |
| 第四章 地塞米松对母鼠生产性能和铁代谢的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及处理 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 样品采集 |
| 1.2 主要仪器设备和试剂 |
| 1.3 大鼠生长表观指标测定 |
| 1.4 大鼠脏器指数测定 |
| 1.5 母鼠血浆转铁蛋白结合铁及不饱和铁结合力的检测 |
| 1.6 大鼠血浆铁及肝脏铁测定 |
| 1.6.1 样品消解 |
| 1.6.2 铁含量测定 |
| 1.7 抗氧化指标检测 |
| 1.7.1 血浆及组织中过氧化氢酶(CAT)酶活力单位定义与组织样本处理步骤 |
| 1.7.2 血浆及组织中超氧化物歧化酶(SOD)单位定义与组织样本处理步骤. |
| 1.7.3 血浆及组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活力单位的定义与组织样本处理步骤 |
| 1.8 数据分析与统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 地塞米松对母鼠体重、采食量及铁摄入量的影响 |
| 2.2 地塞米松对母鼠器官重及脏器指数的影响 |
| 2.3 地塞米松对母鼠血液生化指标的影响 |
| 2.4 地塞米松对母鼠血液及肝脏抗氧化指标的影响 |
| 2.6 地塞米松对母鼠肝脏铁含量的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 地塞米松对母鼠体重及采食量的影响 |
| 3.2 地塞米松对母鼠器官重及脏器指数的影响 |
| 3.3 地塞米松对母鼠血液生化指标的影响 |
| 3.4 地塞米松对母鼠血液及肝脏抗氧化指标的影响 |
| 3.5 地塞米松对母鼠铁代谢的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 地塞米松对母鼠十二指肠及肝脏铁代谢的影响机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 样品采集 |
| 1.3 主要仪器与试剂 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 仪器设备 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 1.5 免疫印迹检测目的蛋白表达 |
| 1.5.1 母鼠肝脏和十二指肠总蛋白提取 |
| 1.5.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 1.5.3 转印 |
| 1.5.4 封闭 |
| 1.5.5 杂交 |
| 1.5.6 化学发光反应 |
| 1.5.7 图像获取和分析 |
| 1.6 母鼠肝脏、十二指肠、胎盘及胎肝相关基因检测 |
| 1.6.1 RNA提取及质量验证 |
| 1.6.3 引物设计 |
| 1.6.4 实时荧光定量PCR (real-time PCR)扩增反应 |
| 1.7 肝脏和十二指肠HE染色显微检测 |
| 1.8 数据分析与统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 地塞米松对母鼠十二指肠形态的影响 |
| 2.2 地塞米松对母鼠十二指肠铁代谢基因的影响 |
| 2.3 地塞米松对母鼠十二指肠铁代谢蛋白的影响 |
| 2.4 地塞米松对母鼠肝脏形态的影响 |
| 2.5 地塞米松对母鼠肝脏铁代谢相关基因的影响 |
| 2.6 地塞米松对母鼠肝脏铁代谢相关蛋白的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 地塞米松对母鼠十二指肠铁吸收的影响 |
| 3.2 地塞米松对母鼠肝脏铁代谢的影响 |
| 4 小结 |
| 第六章 地塞米松对母鼠胎盘及胎鼠肝脏铁代谢的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 地塞米松对母鼠繁殖性能的影响 |
| 1.2 BeWo细胞的复苏及传代 |
| 1.3 细胞处理及样品收集 |
| 1.4 主要试剂和仪器 |
| 1.5 主要溶液配制 |
| 1.6 地塞米松及不同浓度RU486对BeWo细胞活力的影响 |
| 1.7 免疫印迹检测蛋白表达 |
| 1.8 胎鼠、胎盘及BeWo细胞相关基因检测 |
| 1.9 数据分析与统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 地塞米松对母鼠繁殖性能及胎盘的影响 |
| 2.2 地塞米松对胎鼠肝脏的影响 |
| 2.3 地塞米松对胎鼠铁含量的影响 |
| 2.4 地塞米松对胎鼠肝脏铁代谢基因的影响 |
| 2.5 地塞米松对胎鼠肝脏铁代谢蛋白的影响 |
| 2.6 地塞米松对胎盘形态的影响 |
| 2.7 地塞米松对胎盘抗氧化指标的影响 |
| 2.8 地塞米松对胎盘铁代谢相关基因的影响 |
| 2.9 地塞米松对胎盘铁代谢相关蛋白的影响 |
| 2.10 地塞米松对BeWo细胞GR蛋白及磷酸化影响 |
| 2.11 不同浓度RU486对BeWo细胞活力的影响 |
| 2.12 不同浓度RU486对BeWo细胞GR磷酸化的影响 |
| 2.13 地塞米松及RU486对BeWo细胞铁代谢相关基因与蛋白的影响 |
| 2.14 地塞米松及RU486对BeWo细胞铁调节基因及蛋白的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 地塞米松对母鼠繁殖性能及胎盘的影响 |
| 3.2 地塞米松对胎鼠铁代谢的影响 |
| 3.3 地塞米松对胎盘铁转运的影响 |
| 3.4 地塞米松及RU486对BeWo细胞铁转运的影响 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）静水压调节hUC-MSCs在全肝脱细胞支架内肝样分化的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验溶液的配置 |
| 2.2 hUC-MSCs的培养与鉴定 |
| 2.3 hUC-MSCs在二维条件下成肝诱导 |
| 2.4 hUC-MSCs在三维条件下成肝诱导 |
| 2.5 hUC-MSCs肝向诱导分化的结果 |
| 2.6 统计学处理 |
| 结果 |
| 1.hUC-MSCs的分离和鉴定 |
| 1.1 hUC-MSCs的分离培养及流式鉴定结果 |
| 1.2 hUC-MSCs的分化鉴定结果 |
| 2.大鼠全肝脱细胞支架的制备 |
| 3.MSCs的肝向诱导分化 |
| 3.1 2D和3D诱导后细胞形态和排列情况 |
| 3.2 MSCs肝向分化相关分子mRNA表达情况 |
| 3.3 肝向分化相关分子蛋白表达情况 |
| 3.4 诱导后肝细胞功能检测 |
| 3.5 信号通路相关分子表达结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（10）糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株INS-1损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药防治2型糖尿病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 糖尿病细胞模型的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三“糖脂毒”与2型糖尿病关系的中西医研究概况 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株INS-1损伤的保护作用研究 |
| 序言 |
| 参考文献 |
| 实验一 糖耐康颗粒对糖脂毒诱导的INS-1细胞的保护作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 结论 |
| 实验二 糖耐康颗粒对糖脂毒诱导的INS-1细胞胰岛素信号转导通路的作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 创新点 |
| 问题与不足 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
四、地塞米松对三维培养大鼠肝细胞分泌的影响（论文参考文献）
- [1]仿生导电人工神经支架的研究[D]. 刘振辉. 新疆医科大学, 2021(08)
- [2]地塞米松诱导大鼠肝脏糖脂代谢紊乱分子机制研究[D]. 颜妍. 内蒙古农业大学, 2020(02)
- [3]转染HGF的人脐带间充质干细胞调控TGF-β1/Smads信号通路对肝星状细胞的影响[D]. 尹菲. 吉林大学, 2020(08)
- [4]miR-148a/LDLR介导孕期地塞米松暴露致雄性成年子代高胆固醇血症的发生[D]. 李力. 武汉大学, 2020(03)
- [5]内质网应激调控晶状体上皮的生物学行为参与白内障发病机制的研究[D]. 董媛. 山东大学, 2019(02)
- [6]LncRNA-DPT对妊娠期肝内胆汁淤积症滋养细胞的调控及机制探索[D]. 岳永飞. 苏州大学, 2019(04)
- [7]康复新液抗博来霉素诱导大鼠肺纤维化作用及对小鼠成纤维细胞增殖和迁移的影响[D]. 姚欢. 成都中医药大学, 2019(04)
- [8]地塞米松对妊娠母鼠及胎鼠铁代谢的影响及机制研究[D]. 严凯. 南京农业大学, 2019
- [9]静水压调节hUC-MSCs在全肝脱细胞支架内肝样分化的实验研究[D]. 施文雯. 昆明医科大学, 2019(06)
- [10]糖耐康对糖脂毒性诱导的胰岛细胞株INS-1损伤的保护作用研究[D]. 王磊. 北京中医药大学, 2019(07)